Агар кристенсена с мочевиной инструкция по применению

Эту среду с добавлением мочевины рекомендуют для определения продукции уреазы, в частности у протеев. Она рекомендована международным комитетом (ISO 6579: 1993).

Состав**:

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Приготовление:

Размешать 24,0 г порошка в 950 мл дистиллированной воды. Прокипятить для полного растворения частиц. Стерилизовать автоклавированием при 0,7 атм (115°С) в течение 20 мин. Остудить до 50°С и асептично добавить 50 мл 40%-ного стерильного раствора мочевины (FD048). Тщательно перемешать, разлить в стерильные пробирки и остудить их в наклонном положении для получения скоса. Поскольку мочевина легко разрушается, не допускать перегревания и повторного нагрева среды.

Принцип и оценка результата:

Эта среда готовится в соответствии с прописью Кристенсена (1, 2). Для более быстрого выявления уреазы специалисты международного комитета (ISO) рекомендовали использовать один фосфат вместо двух. Первоначально среду для выявления уреазной активности предложили Rustigian и Stuart (4), но на ней отличались по росту протеи, которые быстро проявляют уреазную активность, и другие уреазоположительные (цитробактеры, энтеробактеры, клебсиеллы и не относимые к энтеробактериям микроорганизмы). Кристенсен отметил, что внесение в среду пептического перевара животной ткани, глюкозы и сниженного количества буфера способствует получению быстрого обильного роста микроорганизмов.

На поверхность косячков обильно засевают испытуемые культуры. При расщеплении мочевины образуется аммиак, который защелачивает среду, что сопровождается изменением цвета индикатора фенолового красного на розово-красный. Поскольку при длительном инкубировании может произойти защелачивание среды за счет образующихся из пептона аминов, для контроля рекомендуется засевать среду без мочевины.

Контроль качества:

Внешний вид порошка:

Гомогенный сыпучий порошок светло-розового цвета.

Плотность готовой среды:

Образуется среда, соответствующая по плотности 1,5%-ному агаровому гелю.

Цвет и прозрачность готовой среды:

Среда имеет желтовато-оранжевую окраску, прозрачна, если в пробирках формируется скошенный гель.

Кислотность среды:

При 25°С водный раствор (2,4% вес/об) имеет рН 6,8 ± 0,2.

Культуральные свойства:

Ростовые характеристики референс-штаммов через 18-24 ч при 35°С.

Примечание:
«+» — положительная реакция, розово-красный цвет;
«–» — отрицательная реакция, цвет не изменен.

Ссылки:

1. Christensen, W.B., 1946, J. Bact., 52:461.
2. MacFaddin J., 1980, Biochemical Tests for Identification of Medical Bacteria, 2nd ed., Williams and Wilkins, Baltimore.
3. International Organization for Standardization (ISO), 1993, Draft ISO/DIS 6579.
4. Rustigian and Stuart, 1941, Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 47:108.

Условия и сроки хранения:

Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8°С.

Это жидкая модификация среды Кристенсена. Модификация подходит для дифференциации организмов, продуцирующих уреазу, от представителей групп Salmonella и Shigella во время рутинного исследования мазков.

Приготовление

Добавьте 0,9 г в 95 мл дистиллированной воды. Стерилизовать автоклавированием при 115 ° C в течение 20 минут. Охладите до 55 °C и асептически введите 5 мл стерильного 40% раствора мочевины SR0020. Хорошо перемешайте и разлейте 10 мл в стерильные ёмкости.

Методика

Для исследования фекалий образцы культивируют в обогащающих и селективных средах обычным образом. Затем отдельные колонии снимают с поверхности твёрдой селективной среды.

Засейте пробирки с бульоном мочевины отдельными колониями организмов, не ферментирующих лактозу, и инкубируйте от 2 до 6 часов при 35 °C. Все организмы, дающие розовую окраску среды (из-за щелочности, вызванной гидролизом мочевины), как не принадлежащих к группам Salmonella или Shigella, и утилизируйте.

Инокулируйте все культуры, не показывающие изменения цвета (т. е. Без гидролиза мочевины), в «сахарную» пептонную воду (Andrade Peptone Water CM0061) плюс соответствующий углевод и на наклонную основу для кровяного агара CM0055.

Инкубируйте новые культуры вместе с бульоном мочевины до следующего утра. Если пробирка с мочевиной показывает щелочную реакцию (розовый цвет), дальнейшее тестирование не требуется, в противном случае продолжайте диагностические тесты, включая агглютинацию предметных стёкол из основной культуры кровяного агара, если это необходимо.

Условия хранения и сроки годности

Сухую среду хранить при температуре 10-30 °C и использовать до истечения срока годности, указанного на этикетке.

Приготовленную среду следует хранить при температуре 2-8 °C.

Внешний вид

Сухая среда: cыпучий порошок соломенного цвета.

Готовая среда: раствор оранжевого цвета