Егоров руководство по практическим занятиям по микробиологии

Также рекомендуем скачать

Год выпуска: 1995

Автор: Н.С. Егоров

Жанр: Микробиология

Формат: DjVu

Качество: Отсканированные страницы

Содержание книги

«Руководство к практическим занятиям по микробиологии»

Общая характеристика микроорганизмов
1.1. Прокариоты
1.2. Эукариоты
1.3. Влияние физических и химических факторов на рост микроорганизмов
1.4. Обмен веществ
1.5. Микроорганизмы в природе и биотехнологии
Микробиологическая лаборатория и правила работы в ней
2.1. Подготовка микробиологической лаборатории к работе
2.2. Правила работы с культурами микроорганизмов
Методы стерилизации
3.1. Стерилизация питательных сред
3.2. Стерилизация стеклянной посуды
3.3. Стерилизация инструментов и приборов
Культивирование и хранение микроорганизмов
4.1, Принципы составления сред для культивирования микроорганизмов
4.2. Условия культивирования микроорганизмов
4.3. Хранение микроорганизмов
Выделение чистых культур микроорганизмов
5.1. Получение накопительной культуры
5.2. Выделение чистой культуры
5.3. Определение чистоты выделенной культуры
Морфология и цитология микроорганизмов
6.1. Микроскопия
6.2. Изучение микроорганизмов в световом микроскопе
6.3. Приготовление препаратов для люминесцентной микроскопии
6.4. Методы приготовления препаратов микроорганизмов для электронной микроскопии
Количественный учет микроорганизмов
7.1. Определение количества клеток
7.2. Определение биомассы взвешиванием
7 3. Определение количества клеток и биомассы нефелометрическим методом
Определение состава клеток микроорганизмов
8.1. Методы разрушения клеток
8 2. Определение белка
8.3. Анализ нуклеиновых кислот
8.4. Определение поли-?-оксимасляной кислоты (ПБОМК)
8.5. Выделение и анализ полисахаридов
8.6. Изучение состава клеточных стенок микроорганизмов
Культуральиые и физиолого-биохимические свойства микроорганизмов
9.1. Культуральные свойства
9.2. Физиолого-биохимические свойства
Генетика микроорганизмов
10.1. Основные понятия
10.2. Мутагенез
10.3. Отбор мутантов
10.4. Перенос генетической информации у бактерий
Систематика и идентификация микроорганизмов
11.1. Основные понятия и правила наименования
11.2. Описание и идентификация
Среды для культивирования различных микроорганизмов
Условия хранения и допустимые сроки периодических пересевов некоторых гетеротрофных микроорганизмов
Рецепты красителей, индикаторов и растворов
Литература

Руководство

К ПРАКТИЧЕСКИМ
ЗАНЯТИЯМ

ПО МЕДИЦИНСКОЙ
МИКРОБИОЛОГИИ

Томск, 2002

Министерство
Здравоохранения Российской Федерации

Сибирский
государственный медицинский университет

«Утверждаю»

Директор ГОУ ВУН
МЦ МЗ РФ

П.А.
Душенков ______________

«___» ______________ 200 г.

РУКОВОДСТВО

К ПРАКТИЧЕСКИМ ЗАНЯТИЯМ

ПО ОБЩЕМУ КУРСУ
МЕДИЦИНСКОЙ МИКРОБИОЛОГИИ

Рекомендовано
Министерством здравоохранения

Российской Федерации
в качестве учебного пособия

для студентов
лечебно-профилактического,

медико-биологического
и фармацевтического факультетов

Издание второе,
переработанное и дополненное

Томск,
2002

Руководство
составлено профессорами Е.П. Красноженовым,
М.Р. Карповой, И.Н. Ильинских, доцентами
Ю.Н. Одинцовым, В.Г. Пехенько, Л.С.
Муштоватовой, ст. преподавателем Т.Л.
Мирютовой, ассистентом М.В. Шамис.

Руководство
к практическим занятиям по медицинской
микробиологии. Под ред. проф. Е.П.
Красноженова. Томск, 2002.

Руководство
представляет собой обзор современной
литературы по вопросам морфологии и
физиологии, генетике микроорганизмов,
в том числе и вирусов, инфекции и
иммунитета, иммунопрофилактики и
иммунотерапии инфекционных заболеваний
и является дополнением к теоретическому
курсу «Медицинская микробиология».
Приведены сведения, позволяющие овладеть
практическими навыками выполнения
различных лабораторных методов
исследования. Составлено в соответствии
с программой, утвержденной Департаментом
образовательных медицинских учреждений
и кадровой политики Минздрава России.

Руководство
предназначено для студентов врачебных,
фармацевтического и медико-биологического
факультетов.

Рецензенты:

Томск, Сибирский
государственный медицинский университет,
2002

ВВЕДЕНИЕ

Основные этапы развития микробиологии

Открытие
мира микроорганизмов связано с именем
Антония Левенгука (1632-1723). А. Левенгук
создал свой микроскоп, дающий увеличение
до 300 раз, что позволило ему обнаружить,
описать и зарисовать основные формы
бактерий и клеток. Этот период назван
– морфологическим,
так как исследования в области
микробиологии сводились к описанию
форм бактерий.

Второй период
развития микробиологии физиологический
связан с именами ученых Луи Пастера
(1822-1895) и Роберта Коха (1843-1910). Л. Пастер
установил, что молочнокислое и
маслянокислое брожение, процесс
разложения белковых продуктов есть
результат жизнедеятельности
микроорганизмов. Он доказал, что
микроорганизмы являются возбудителями
ряда заболеваний, и выделил бактерии
куриной холеры, остеомиелита, разработал
методы профилактики инфекционных
заболеваний путем вакцинации, которые
успешно используются до настоящего
времени. Л. Пастер разработал не только
принципы вакцинации, но и способ
приготовления вакцин. Предложенный им
способ приготовления вакцины против
бешенства позволили в 1886 году И.И.
Мечникову и Н.Ф. Гамалея организовать
в России лабораторию, в которой проводили
прививки против этого заболевания.

Открытие
возбудителей болезней сопровождалось
изучением их биологических свойств и
их этиологической
роли в
возникновении инфекционных заболеваний.
Огромный вклад в этом направлении сделан
немецким микробиологом Р. Кохом. Он
разработал и, в дальнейшем, сформулировал
триаду Генле-Коха:

1. предполагаемый
   микроорганизм — возбудитель данного
   заболевания не может быть выделен при
   других инфекционных заболеваниях;

2. микроорганизм
   должен быть выделен в чистой культуре;

3. чистая
   культура возбудителя должна вызывать
   у экспериментальных животных специфическую
   болезнь.

Немецкая
школа микробиологов во главе с Р. Кохом
внесла большой вклад в развитие
микробиологии, разработав способы
получения чистых культур микроорганизмов,
методы окраски бактерий анилиновыми
красителями.

Благодаря
методам, предложенным Р. Кохом, были
изучены обмен веществ, дыхание,
ферментативная активность, рост и
размножение, культивирование на
искусственных питательных средах,
экзотоксины бактерий.

За
короткий промежуток времени было открыто
большое количество возбудителей
инфекционных заболеваний человека
(гонореи – А. Нейссер, брюшного тифа –
К. Эберт, туберкулеза — Р. Кох, холеры –
Р. Кох, стафилококк – Л. Пастер, дифтерия
– Леффлер и др.).

Третий
период микробиологии ознаменовался
созданием нового направления в
микробиологии — иммунологией. Русский
ученый И.И. Мечников (1845-1916) и немецкий
ученый П. Эрлих (1854-1915) считаются
основоположниками иммунологии. И.И.
Мечников разработал фагоцитарную теорию
иммунитета и впервые ввел понятие
«Клеточный иммунитет». И.И. Мечников
рассматривал фагоцитоз, как основной
фактор защиты организма человека от
возбудителей инфекционных заболеваний.

П. Эрлих
предложил гуморальную теорию иммунитета
и положил начало учению об антителах.
К концу ХХ века
выяснилось, что эти две точки зрения
ученых дополняют друг друга. За эти
исследования И.И. Мечников и П. Эрлих
были удостоены Нобелевской премии 1908
г. в области иммунологии.

В 1892 г.
Д.И. Ивановский сообщил об открытии им
возбудителя мозаичной болезни табака
— фильтрующегося вируса. Этот год
считается датой рождения нового
направления в микробиологии – вирусологии,
которая в настоящее время стала
фундаментальной биологической наукой.
Затем были открыты вирусы полиомиелита
– 1909 г. К. Ландштейнер и Е. Поппер;
бешенства –1892 г. В. Бабеш и 1903 г. Негри;
кори – 1911 г. Дж. Гольдбергер и Дж. Андерсон;
паротита – 1934 г. К. Джонсон и Э. Гудпасчер;
вируса гриппа – 1933 г. В. Смит и К. Эндрюс;
вирус клещевого энцефалита – 1937 г. Л.
Зильбер, Е. Левкович, Т. Чумаков; вирус
ВИЧ — 1982 г. Р.Гало, 1983 г. Л. Монтанье; вирус
гепатита – 1970 г. Д. Дейн.

В конце
ХХ века было
установлено, что болезни человека могут
вызывать не только бактерии, но и
простейшие: амебы, лейшмании, плазмодии
малярии и т.д. Возникло учение –
протозоология.

Для
лечения и профилактики инфекционных
заболеваний наряду с созданием и
применением вакцин и сывороток развивается
новое направление – химиотерапия. Одним
из основоположников этих исследований
был П. Эрлих. Им было установлено
губительное действие ряда красителей
на трипаносомы, создан препарат
«Сальварсан», бактерицидно действующий
на спирохеты – возбудителя сифилиса.
Начиная с 30-х годов, были разработаны
препараты против малярии – хинин,
сульфаниламид, стрептоцид и т.д.

Английский
ученый А. Флеминг в 1928 г. положил начало
созданию антибиотиков. Он установил
экспериментально, что вокруг зеленой
плесени – гриба рода Penicillium – отсутствует
рост стафилококков. В 1940 г. Х. Флори и Э.
Чейн получили стабильный препарат
очищенного пенициллина для лечения
многих инфекционных заболеваний.

Молекулярно-генетическийэтап развития микробиологии начинается
с 40-50 годов ХХ века. Огромные успехи в
области молекулярной биологии, генетики,
биотехнологии, биохимии позволили
расшифровать геном бактерий и вирусов,
создать рекомбинантные штаммы
микроорганизмов и использовать их для
получения разнообразных биологически
активных веществ (антибиотиков, гормонов,
ферментов, витаминов), установить
химическую структуру иммуноглобулинов
и разработать способ получения
моноклональных антител, изучить принцип
функционирования иммунной системы,
разработать диагностические системы
к вирусам и бактериям, основанные на
иммунологических и генетических
принципах, создать генно-инженерные
вакцины. Научные достижения ученых мира
создали реальные предпосылки к развитию
биотехнологии и ликвидации ряда
инфекционных заболеваний. Благодаря
иммунопрофилактике ликвидирована
натуральная оспа, снижена заболеваемость
корью, коклюшем, дифтерией, туляремией,
сибирской язвой и т.д.

В
настоящее время широкие исследования
ведутся в области борьбы с такими
распространенными заболеваниями как
гепатиты, туберкулез, ВИЧ — инфекция.

Структура
микробиологической службы Российской
Федерации

В России
в 1999 году принят закон «О санитарном
эпидемиологическом благополучии
населения». В этом законе предусмотрены
меры по предупреждению, возникновения
и распространения инфекционных
заболеваний. С этой целью должны
своевременно проводится
санитарно-противоэпидемические
мероприятия, в том числе мероприятия
по осуществлению санитарной охраны
территории Российской федерации,
введения при необходимости карантинных
мер в отношении больных инфекционным
заболеванием, проведении профилактических
прививок.

Для
контроля за исполнением закона и
своевременном проведении предусмотренных
мероприятий создана государственная
санитарно — эпидемиологическая службаРоссийской федерации, которая представляет
собой единую федеральную централизованную
систему органов и учреждений. Руководство
государственной санитарно-эпидемиологической
службой РФ осуществляется, Главным
государственным санитарным врачом –
в ранге зам. министра Здравоохранения
РФ. В субъектах РФ организацию деятельности
санитарно — эпидемиологической службы
осуществляют Главные санитарные врачи
республик, областей, городов и районов.

Кроме
того, в состав санитарно-эпидемиологической
службы включены структурные подразделения
железнодорожного транспорта, обороны,
внутренних дел, служб безопасности,
налоговой и пограничной службы, которые
осуществляют санитарно-эпидемиологический
надзор соответственно на железнодорожном
транспорте, в вооруженных силах и др.
указанных выше подразделениях.

Все
структурные подразделения Госсанэпиднадзора
осуществляют в своих субъектах или
подразделениях контроль за выполнением
санитарного законодательства. Проводят
санитарно-профилактические мероприятия,
санитарный карантин, контроль в пунктах
пропуска через Государственную границу
РФ, контроль за санитарно-эпидемиологической
обстановкой, проведение санитарно-эпидемических
расследований, направленных на
установление причин возникновения и
распространения инфекционных заболеваний,
государственный учет инфекционных,
профессиональных, массовых заболеваний,
связанных с вредным воздействием
факторов среды обитания.

Таким
образом, в каждом субъекте РФ имеется
соответственный Госсанэпиднадзор
(ранее именовались СЭС), который
осуществляет на своей территории
контроль за санитарно-эпидемической
обстановкой, разрабатывает и выполняет
санитарно-противоэпидемические
мероприятия, вводит и отменяет карантин,
информирует население об инфекционных
заболеваниях и массовых отравлениях,
а также о проводимых мероприятиях. В
составе каждой структуры Госсанэпиднадзора
имеются лаборатории (бактериологическая,
вирусологическая, иммунологическая и
т.д.) выполняющие контроль за санитарно
— эпидемической обстановкой на
соответствующей территории. Все
нижестоящие структуры Госсанэпиднадзора
подчиняются и отчитываются только перед
федеральным центром РФ.

Для
проведения санитарно-эпидемических и
профилактических мероприятий в Российской
федерации в структуре Министерства
Здравоохранения имеются государственные
научно-производственные объединения
и НИИ, которые осуществляют научные
исследования по отраслевым проблемам,
разрабатывают новые препараты для
лечения, профилактики и диагностики
инфекционных заболеваний, а также
осуществляют производство и выпуск
бактерийных и вирусных препаратов.

В системе
здравоохранения имеются клинико-диагностические
лаборатории общего назначения и
специального типа (бактериологическая,
вирусологическая, иммунологическая),
входящие в состав больниц, поликлиник
и других лечебных учреждений. Кроме
этого, существуют центральные, проблемные,
отраслевые и учебные лаборатории ВУЗов
– кафедры микробиологии, вирусологии
и иммунологии, а также специализированные
лаборатории, выполняющие работу с особо
опасными инфекциями.

В
соответствии с делением микроорганизмов
на группы по степени биологической
опасности лаборатории подразделяются
на 3 категории:

1) базовые
(общего типа); 2) режимные; 3) лаборатории
особого режима.

Безопасность
работы в лабораториях всех категорий
обеспечивается выполнением распорядка
и правил работ, оснащением лаборатории
соответствующим оборудованием, а также
наличием лицензии на право работы с
инфекционным материалом.