Инструкция по внутреннему контролю качества работ в лаборатории пример

Открытая разработка документов | LINCO Open Source Внутренний контроль качества. ВЛК в лаборатории. Пример процедуры Версия от 24.08.20

ВЕРНУТЬСЯ К ПЕРЕЧНЮ ДОКУМЕНТОВ ❯
ПЕРЕЙТИ К ТРЕБОВАНИЯМ ГОСТ 17025 ❯

Документ создается сообществом лабораторий и открыт для дополнения и редактирования.

Вы можете участвовать в корректировке и дополнении, а также направить нам свою версию
документа для включения её в состав данного материала. Для этой цели используйте
форму загрузки
внизу страницы.

Данный материал будет полезен для разработки документнов системы менеджмента своей лаборатории.

---

ВЕРНУТЬСЯ К ПЕРЕЧНЮ ДОКУМЕНТОВ ❯
ПЕРЕЙТИ К ТРЕБОВАНИЯМ ГОСТ 17025 ❯

РЕКОМЕНДАЦИИ ПО МЕЖГОСУДАРСТВЕННОЙ СТАНДАРТИЗАЦИИ

ГОСУДАРСТВЕННАЯ СИСТЕМА ОБЕСПЕЧЕНИЯ ЕДИНСТВА ИЗМЕРЕНИЙ

ВНУТРЕННИЙ КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА РЕЗУЛЬТАТОВ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ХИМИЧЕСКОГО АНАЛИЗА

State system for ensuring the uniformity of measurements. Internal control of quantitative chemical analysis result’s accuracy

РМГ 76-2014

Дата введения — 2016-01-01

Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2-2009 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены»

Сведения о рекомендациях

1 РАЗРАБОТАНЫ Федеральным государственным унитарным предприятием «Уральский научно-исследовательский институт метрологии» (ФГУП «УНИИМ»)

2 ВНЕСЕНЫ Техническим комитетом по стандартизации ТК 053 «Основные нормы и правила по обеспечению единства измерений»

3 ПРИНЯТЫ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 25 июня 2014 г. N 45)

За принятие проголосовали:

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 9 июля 2014 г. N 778-ст рекомендации по межгосударственной стандартизации РМГ 76-2014 введены в действие в качестве рекомендаций по метрологии Российской Федерации с 1 января 2016 г.

5 ВЗАМЕН РМГ 76-2004

Информация об изменениях к настоящим рекомендациям публикуется в ежегодном информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящих рекомендаций соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

1 Область применения

Настоящие рекомендации определяют порядок и содержание работ по внутрилабораторному (внутреннему) контролю качества результатов количественного химического анализа (далее — анализ) при реализации в отдельной лаборатории конкретной методики с установленными показателями качества

Рекомендации разработаны с учетом и в целях развития требований [1], [2], [3], [4], [5], РМГ 61, ГОСТ ИСО/МЭК 17025.

Положения настоящих рекомендаций могут быть использованы для проведения работ по внутри- лабораторному контролю качества результатов испытаний веществ и материалов, получаемых в соответствии с методиками (методами) испытаний с установленными показателями качества.

2 Нормативные ссылки

В настоящих рекомендациях использованы нормативные ссылки на следующие нормативные документы:

ГОСТ 8.010-99 Государственная система обеспечения единства измерений. Методики выполнения измерений. Основные положения <1>

<1> На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 8.563-2009 «Государственная система обеспечения единства измерений. Методики (методы) измерений».

ГОСТ 8.315-97 Государственная система обеспечения единства измерений. Стандартные образцы состава и свойств веществ и материалов. Основные положения

ГОСТ 849-2008 Никель первичный. Технические условия

ГОСТ 6012-2011 Никель. Методы химико-атомно-эмиссионного спектрального анализа

ГОСТ 10521-78 Реактивы. Кислота бензойная. Технические условия

ГОСТ 30669-2000 Продукты переработки плодов и овощей. Газохроматографический метод определения содержания бензойной кислоты

ГОСТ ISO/IEC 17025-2009 Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных лабораторий

ПМГ 96-2009 Государственная система обеспечения единства измерений. Результаты и характеристики качества измерений. Формы представления

РМГ 60-2003 Государственная система обеспечения единства измерений. Смеси аттестованные. Общие требования к разработке

РМГ 61-2010 Государственная система обеспечения единства измерений. Показатели точности, правильности, прецизионности методик количественного химического анализа. Методы оценки Издание официальное

РМГ 93-2009 Государственная система обеспечения единства измерений. Оценивание метрологических характеристик стандартных образцов

РМГ 103-2010 Государственная система обеспечения единства измерений. Проверка квалификации испытательных (измерительных) лабораторий, осуществляющих испытания веществ, материалов и объектов окружающей среды (по составу и физико-химическим свойствам), посредством межлабораторных сравнительных испытаний

Примечание — При пользовании настоящими рекомендациями целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящими рекомендациями следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3. Термины, определения, сокращения и обозначения

3.1 В настоящих рекомендациях применены термины «количественный химический анализ пробы вещества (материала)», «результат анализа», «результат единичного анализа», «истинное значение величины», «погрешность», «систематическая погрешность», «случайная погрешность», «неопределенность», «стандартная неопределенность», «расширенная неопределенность», «коэффициент охвата», «точность», «правильность», «прецизионность», «повторяемость», «воспроизводимость», «условия повторяемости», «условия воспроизводимости», «среднее квадратическое (стандартное) отклонение повторяемости», «среднее квадратическое (стандартное) отклонение воспроизводимости», «промежуточная прецизионность», «внутрилабораторная прецизионность», «систематическая погрешность методики анализа», «систематическая погрешность лаборатории», «смещение», «показатель точности методики анализа <2>», «показатель правильности методики анализа», «показатель воспроизводимости методики анализа», «показатель повторяемости методики анализа», «предел повторяемости», «предел воспроизводимости», «погрешность результата анализа (результата единичного анализа)» по РМГ 61, а также следующие термины с соответствующими определениями с учетом [1], РМГ 61:

<2> Термин «приписанная характеристика погрешности измерений» по ГОСТ 8.010 соответствует термину «показатель точности методики анализа», используемому в настоящих рекомендациях, если показатель точности представлен в виде характеристики погрешности, см. РМГ 61, 3.1.12.

3.1.1 методика количественного химического анализа; методика анализа: Совокупность конкретно описанных операций, выполнение которых обеспечивает получение результатов количественного химического анализа (результатов анализа) с установленными показателями точности (неопределенностью или характеристикой погрешности).

Примечания

1 Методика анализа представляет собой разновидность методики измерений (методики выполнения измерений по ГОСТ 8.010).

2 В качестве измеряемой величины принимают содержание одного или ряда компонентов пробы.

3.1.2 результат контрольного определения: Результат единичного анализа (определения), выполненного для целей контроля.

Примечание — При получении результата контрольного измерения реализуют все этапы процедуры измерений, предусмотренные нормативными документами (далее — НД) на методику анализа.

3.1.3 результат контрольного измерения: Среднеарифметическое значение результатов контрольных определений, полученных в условиях повторяемости.

Примечания

1 Число контрольных определений соответствует числу параллельных определений, установленному НД на методику анализа.

2 Если НД на методику анализа не предусмотрено получение результата анализа как среднего из результатов единичного анализа (параллельных определений), результат контрольного определения является собственно результатом контрольного измерения.

3.1.4

3.1.5 показатели качества результатов анализа (при реализации конкретной методики анализа в отдельной лаборатории): Установленные значения неопределенности или характеристики погрешности и составляющих неопределенности или характеристики погрешности для любого результата из совокупности результатов анализа (результатов единичного анализа <1>, полученного при соблюдении требований конкретной методики при ее реализации в отдельной лаборатории (далее — характеристики погрешности результатов анализа и ее составляющих).

<1> Используют для показателя повторяемости.

Примечание — К показателям качества результатов анализа относят показатели точности, правильности, повторяемости, внутрилабораторной прецизионности результатов анализа, а также, при необходимости, другие показатели, характеризующие составляющие бюджета неопределенности или погрешности измерений, получаемых при реализации методики в конкретной лаборатории.

3.1.6

3.1.7 показатель правильности результатов анализа: Значение неопределенности смещения или характеристики систематической погрешности лаборатории, полученное на основе результатов измерений при реализации методики анализа в конкретной лаборатории.

3.1.8 показатель повторяемости результатов анализа: Значение неопределенности или приписанной характеристики случайной погрешности результатов единичного анализа, полученных в условиях повторяемости при реализации методики анализа в конкретной лаборатории.

3.1.9 показатель внутрилабораторной прецизионности: Значение неопределенности или приписанной характеристики случайной погрешности результатов анализа, полученных по методике в конкретной лаборатории в условиях внутрилабораторной прецизионности.

3.1.10 стандартное (среднее квадратическое) отклонение внутрилабораторной прецизионности: Среднее квадратическое отклонение (СКО) результатов анализа, полученных в условиях внутрилабораторной прецизионности (с учетом [1]).

3.1.11 предел внутрилабораторной прецизионности: Допускаемое для принятой вероятности P абсолютное расхождение между двумя результатами анализа, полученными в условиях внутрилабораторной прецизионности.

3.1.12 статистические оценки показателей качества результатов анализа: Оценки показателей качества результатов анализа, полученные на основе небольшого числа результатов анализа.

3.1.13 норматив контроля: Числовое значение, являющееся критерием для признания контролируемого показателя качества результатов анализа соответствующим (или несоответствующим) установленным требованиям.

Примечание — Нормативы контроля должны быть взаимоувязаны с соответствующими показателями качества.

3.2 Сокращения

В настоящих рекомендациях применены следующие сокращения:

АС — аттестованная смесь;

ВСК — выборочный статистический контроль;

КПКТ — контрольная процедура для контроля точности;

НД — нормативный документ;

ОК — образец для контроля;

ОО — образец для оценивания;

СИ — средство измерений;

СКО — среднее квадратическое отклонение;

СО — стандартный образец.

3.3 Обозначения

В настоящих рекомендациях применены следующие обозначения:

— нижняя, верхняя границы, в которых погрешность любого из совокупности результатов анализа, получаемых по данной методике, находится с принятой вероятностью P;

P — доверительная вероятность;

— границы, в которых погрешность любого из совокупности результатов анализа, получаемых по данной методике, находится с принятой вероятностью P, при этом ;

— СКО погрешности результатов анализа, полученных во всех лабораториях, применяющих данную методику анализа (СКО погрешности методики анализа);

z — квантиль распределения, зависящий от его типа и принятой вероятности P;

— нижняя, верхняя границы, в которых погрешность любого из совокупности результатов анализа, получаемых в конкретной лаборатории при реализации методики, находится с принятой вероятностью P;

— границы, в которых погрешность любого из совокупности результатов анализа, получаемых в конкретной лаборатории при реализации методики, находится с принятой вероятностью P, при этом ;

— СКО погрешности результатов анализа, полученных в конкретной лаборатории при реализации методики;

— нижняя, верхняя границы, в которых систематическая погрешность методики анализа находится с принятой вероятностью P;

— границы, в которых систематическая погрешность методики анализа находится с принятой вероятностью P, при этом ;

— СКО неисключенной систематической погрешности методики анализа;

— нижняя, верхняя границы, в которых систематическая погрешность лаборатории находится с принятой вероятностью P;

— границы, в которых систематическая погрешность лаборатории находится с принятой вероятностью P, при этом ;

— СКО неисключенной систематической погрешности результатов анализа, полученных в конкретной лаборатории;

— предел повторяемости для n результатов параллельных определений, установленных методикой анализа;

— СКО результатов единичного анализа, полученных по методике в условиях повторяемости (СКО повторяемости);

— предел повторяемости для n результатов параллельных определений, установленных методикой анализа, полученных в конкретной лаборатории;

— СКО результатов единичного анализа, полученных в условиях повторяемости, полученных в конкретной лаборатории;

R — предел воспроизводимости (для двух результатов анализа);

— СКО всех результатов анализа, полученных по методике в условиях воспроизводимости (СКО воспроизводимости);

— предел внутрилабораторной прецизионности (для двух результатов анализа);

— СКО результатов анализа, полученных в условиях внутрилабораторной прецизионности в конкретной лаборатории;

U — расширенная неопределенность, принятая для любого результата из совокупности результатов анализа, получаемых по данной методике;

— коэффициент охвата;

— суммарная стандартная неопределенность, принятая для любого результата из совокупности результатов анализа, получаемых по данной методике;

— расширенная неопределенность, принятая для любого результата из совокупности результатов анализа, получаемых по данной методике, в конкретной лаборатории;

— суммарная стандартная неопределенность, принятая для любого результата из совокупности результатов анализа, полученных в конкретной лаборатории при реализации методики;

— расширенная неопределенность значения смещения, принятая для любого из совокупности результатов анализа, получаемых по данной методике;

— стандартная неопределенность значения смещения, принятая для любого из совокупности результатов анализа, получаемых по данной методике;

— расширенная неопределенность значения смещения, принятая для любого из совокупности результатов анализа, полученных в конкретной лаборатории при реализации методики;

— стандартная неопределенность значения смещения, принятая для любого из совокупности результатов анализа, полученных в конкретной лаборатории при реализации методики;

ur- стандартная неопределенность, характеризующая разброс результатов единичного анализа, полученных по методике в условиях повторяемости;

— стандартная неопределенность, характеризующая разброс результатов единичного анализа, полученных по методике в условиях повторяемости в конкретной лаборатории;

uR- стандартная неопределенность, характеризующая разброс всех результатов анализа, полученных по методике в условиях воспроизводимости;

— стандартная неопределенность, характеризующая разброс всех результатов анализа, полученных по методике в условиях внутрилабораторной прецизионности в конкретной лаборатории;

— результат анализа, результат контрольного измерения;

C — аттестованное значение ОК, аттестованное значение ОО;

— среднеарифметическое значение результатов анализа, результатов контрольных измерений;

— результат контрольной процедуры при контроле точности;

К — норматив контроля точности при оперативном контроле процедуры анализа;

— коэффициент разбавления (изменения навески);

— значение добавки;

— значение границ, в которых погрешность любого из совокупности результатов анализа, получаемых в конкретной лаборатории при реализации методики, в относительных единицах;

— масса рабочей пробы при использовании КПКТ с применением метода варьирования навески;

— масса рабочей пробы с измененной навеской при использовании КПКТ с применением метода варьирования навески;

— результат контрольного измерения рабочей пробы по контрольной методике анализа;

X — результат единичного анализа, результат контрольного определения;

— результат контрольной процедуры при контроле повторяемости, в единицах измеряемых содержаний;

— максимальный результат из n параллельных определений;

— минимальный результат из n параллельных определений;

— результат контрольной процедуры при контроле внутрилабораторной прецизионности, в единицах измеряемых содержаний;

— средняя линия при построении контрольных карт Шухарта для контроля точности;

— средняя линия при построении контрольных карт для контроля внутрилабораторной прецизионности;

— средняя линия при построении контрольных карт для контроля повторяемости;

, — верхний предел предупреждения при построении контрольных карт для контроля точности;

— нижний предел предупреждения при построении контрольных карт для контроля точности;

— предел предупреждения при построении контрольных карт для контроля внутрилабораторной прецизионности;

— предел предупреждения при построении контрольных карт для контроля повторяемости;

, — верхний предел действия при построении контрольных карт для контроля точности;

— нижний предел действия при построении контрольных карт для контроля точности;

— предел действия при построении контрольных карт для контроля внутрилабораторной прецизионности;

— предел действия при построении контрольных карт для контроля повторяемости;

— результат контрольной процедуры при контроле точности в приведенных величинах (в относительных величинах);

— результат контрольной процедуры при контроле внутрилабораторной прецизионности в приведенных величинах (в относительных величинах);

— результат контрольной процедуры при контроле повторяемости в приведенных величинах (в относительных величинах);

— верхний предел предупреждения при построении контрольных карт для контроля точности в приведенных величинах (в относительных величинах);

— нижний предел предупреждения при построении контрольных карт для контроля точности в приведенных величинах (в относительных величинах);

— предел предупреждения при построении контрольных карт для контроля внутрилабораторной прецизионности в приведенных величинах (в относительных величинах);

— предел предупреждения при построении контрольных карт для контроля повторяемости в приведенных величинах (в относительных величинах);

— верхний предел действия при построении контрольных карт для контроля точности в приведенных величинах (в относительных величинах);

— нижний предел действия при построении контрольных карт для контроля точности в приведенных величинах (в относительных величинах);

— предел действия при построении контрольных карт для контроля внутрилабораторной прецизионности в приведенных величинах (в относительных величинах);

— предел действия при построении контрольных карт для контроля повторяемости в величинах (в относительных величинах);

L — число контрольных процедур;

— норматив контроля внутрилабораторной прецизионности при периодической проверке подконтрольности процедуры выполнения анализа;

— норматив контроля правильности при периодической проверке подконтрольности процедуры выполнения анализа;

— норматив контроля точечной оценки показателя правильности при периодической проверке подконтрольности процедуры выполнения анализа;

f — число степеней свободы;

l, j — текущий индекс;

d — число дефектных результатов контрольных процедур;

— приемочное число;

— браковочное число;

N — объем партии результатов анализа рабочих проб;

— объем выборки;

— соотношение между показателем внутрилабораторной прецизионности результатов анализа и показателем повторяемости;

— оценка смещения результатов анализа в лаборатории, соответствующая реализуемой контрольной процедуре;

— СКО погрешности результатов анализа, соответствующее реализуемой контрольной процедуре.

4. Общие положения

4.1 В соответствии с ГОСТ ISO/IEC 17025 любая испытательная лаборатория (в том числе применяющая методики количественного химического анализа) должна располагать процедурами управления качеством для того, чтобы контролировать достоверность проведенных испытаний (анализа). Основным элементом подтверждения достоверности результатов анализа является реализация в лаборатории процедур внутреннего контроля качества результатов анализа.

4.2 Целями внутреннего контроля качества результатов анализа являются обеспечение необходимой точности <3> результатов текущего анализа, экспериментальное подтверждение силами самой лаборатории своей технической компетентности, а также обеспечение доверия к результатам анализа как внутри лаборатории, организации, в составе которой работает лаборатория, так и со стороны других организаций (потребителей продукции, которую анализирует лаборатория, контролирующих организаций и т.п.).

<3> Обеспечение точности результатов анализа не ниже гарантируемой точности методики анализа, следовательно — требуемой точности анализа.

4.3 Необходимым этапом обеспечения качества результатов анализа является контроль наличия в лаборатории условий для проведения анализа. К факторам контроля относятся:

— технические и метрологические характеристики применяемого оборудования;

— сроки поверки (калибровки) СИ;

— сроки аттестации испытательного оборудования;

— условия хранения и сроки годности экземпляров СО;

— условия и сроки хранения реактивов, материалов, растворов, образцов проб;

— соответствие экспериментальных данных, полученных при построении градуировочной характеристики, выбранному виду зависимости;

— стабильность градуировочной характеристики;

— правила применения реактивов с истекшим сроком хранения;

— условия и правила отбора проб и их доставки (при необходимости);

— качество дистиллированной воды;

— уровень квалификации персонала;

— наличие условий для проведения контроля качества результатов анализа и т.п.

4.4 Внутренний контроль качества результатов анализа проводят для методик анализа с установленными показателями качества.

Показатели качества методики анализа могут быть представлены в НД на методику анализа в виде характеристики погрешности и ее составляющих или в виде расширенной неопределенности и ее составляющих (см. РМГ 61).

4.5 Организации и проведению внутреннего контроля качества результатов анализа должна предшествовать процедура подтверждения правильности использования методики анализа в лаборатории (с учетом ГОСТ ISO/IEC 17025).

4.5.1 При внедрении методик анализа в лаборатории должны быть установлены показатели качества результатов анализа и проведена проверка их соответствия показателям качества методик анализа.

Примечание — В связи с тем что для методик анализа, предназначенных для использования в одной лаборатории, показатель точности результатов анализа совпадает с показателем точности методики анализа, при внедрении методик установление показателей качества результатов анализа не проводят.

4.5.2 Показатели качества результатов анализа в виде характеристики погрешности и ее составляющих могут быть установлены с использованием алгоритмов, приведенных в приложении Б.

Оценивание показателей качества результатов анализа в виде расширенной неопределенности и ее составляющих может быть проведено с использованием алгоритмов, изложенных в РМГ 61, и с учетом приложения Б.

При организации эксперимента учитывают требования, приведенные в А.1 — А.4 приложения А.

Фактически обеспечиваемые значения показателей качества результатов анализа оформляют протоколом по А.5 или по А.6 приложения А.

4.5.3 В случае невозможности или экономической нецелесообразности проведения в лаборатории эксперимента по или аналогично описанному в приложении Б при внедрении методики в лаборатории подтверждают, что результаты измерений получают с погрешностью (неопределенностью), не превышающей установленной в методике (например, аналогично [6]). В этом случае показатель точности результатов анализа принимают равным показателю точности методики анализа.

Примечание — В этой ситуации с целью уменьшения риска получения неудовлетворительных результатов рабочих измерений при внедрении методики анализа допустимо (в случае получения при внедрении методики статистических оценок показателей качества существенно меньше установленных в методике) определять показатели качества результатов анализа расчетным способом, умножая соответствующий показатель качества методики анализа на коэффициент, равный 0,84 <4>.

<4> В случае представления показателя точности методики анализа в виде характеристики погрешности, принимая за показатели качества результатов анализа соответствующие показатели качества методики анализа для доверительной вероятности P = 0,90 и исходя из предположения симметричности и одномодальности распределения погрешности результатов анализа.

По мере накопления информации в процессе внутреннего контроля расчетные значения показателей качества результатов анализа могут быть уточнены с учетом фактически обеспечиваемых в лаборатории значений.

4.6 Организация внутреннего контроля и расчет нормативов внутреннего контроля основаны на использовании показателей качества результатов анализа, обеспечиваемых в лаборатории при реализации методик анализа.

Исходя из положений ПМГ 96 показатели качества результатов анализа, нормативы контроля, а также статистические оценки показателей качества результатов анализа представляют числом, содержащим не более двух значащих цифр. Для промежуточных результатов расчета рекомендуется сохранять третью значащую цифру. При записи окончательного результата третью значащую цифру округляют в большую сторону. Допускается показатели качества, нормативы контроля и статистические оценки показателей качества представлять числом, содержащим одну значащую цифру. В этом случае вторую значащую цифру округляют в большую сторону, если цифра последующего, неуказываемого младшего, разряда равна или больше пяти, или в меньшую сторону, если эта цифра меньше пяти.

Примечание — Организация внешнего контроля и расчет нормативов внешнего контроля, в том числе при проверке квалификации лаборатории посредством межлабораторных сличений (в РМГ 103 использован идентичный по содержанию термин «межлабораторные сравнительные испытания»), основаны на использовании показателей качества методик анализа.

4.7 Номенклатура и формы представления показателей качества методик анализа и соответствующих показателей качества результатов анализа при реализации методик в конкретной лаборатории — согласно таблицам 1 и 2.

Таблица 1

Показатели качества методики анализа и показатели качества результатов анализа (при реализации методики анализа в конкретной лаборатории) в виде характеристики погрешности и ее составляющих

Таблица 2

Показатели качества методики анализа и показатели качества результатов анализа (при реализации методики анализа в конкретной лаборатории) в виде расширенной неопределенности и ее составляющих

4.8 Для расчета нормативов контроля в формулах, приведенных в разделах 5 — 8, использованы показатели качества результатов анализа, представленные в виде характеристики погрешности и ее составляющих. Если показатели качества результатов анализа представляют в виде расширенной неопределенности и ее составляющих, то при расчете нормативов контроля вместо показателей качества, представленных в виде характеристики погрешности и ее составляющих, используют соответствующие точечные или интервальные оценки показателей качества, представленных в виде расширенной неопределенности и ее составляющих (см. таблицу 2). Например, вместо интервальной оценки показателя точности в виде характеристики погрешности используют интервальную оценку показателя точности в виде расширенной неопределенности , вместо точечной оценки показателя внутрилабораторной прецизионности в виде составляющей характеристики погрешности — точечную оценку показателя внутрилабораторной прецизионности в виде составляющей показателя неопределенности и т.п.

4.9 Если показатель точности методики анализа сформирован с использованием составляющих характеристики погрешности (бюджета неопределенности) <5>, не приведенных в таблицах 1 и 2, при внедрении методики и организации контроля качества результатов анализа определяют, какие составляющие характеристики погрешности (бюджета неопределенности) необходимо контролировать для обеспечения необходимой точности результатов анализа, и для этих составляющих (источников погрешности/неопределенности) устанавливают соответствующие показатели качества результатов анализа. При этом организация контроля этих составляющих может быть реализована в соответствии с процедурами, описанными в настоящих рекомендациях. Пример выбора контролируемых составляющих бюджета неопределенности приведен в приложении В.

<5> Например, погрешность (неопределенность) градуировочной характеристики.

4.10 Внутренний контроль качества результатов анализа в лаборатории реализуют на регулярной основе.

В лаборатории должно быть назначено лицо, ответственное за организацию и проведение внутреннего контроля качества результатов анализа. Допускают возложение указанных функций на управляющего по качеству лаборатории, который несет ответственность за внедрение системы качества лаборатории и ее постоянное функционирование.

4.11 Элементами системы внутреннего контроля являются:

— оперативный контроль процедуры анализа;

— контроль стабильности результатов анализа.

Примечание — Возможен контроль не всей процедуры анализа, а значимых составляющих характеристики погрешности (бюджета неопределенности).

4.12 Оперативный контроль процедуры анализа осуществляет исполнитель анализа с целью проверить готовность лаборатории к проведению анализа рабочих проб или оперативно оценить качество результатов анализа каждой серии рабочих проб, полученных совместно с результатами контрольных измерений.

Примечание — Оперативный контроль процедуры анализа может организовать ответственный за контроль качества результатов анализа.

4.13 Оперативный контроль процедуры анализа проводят:

1) при появлении факторов, которые могут повлиять на стабильность процесса анализа (смена партии реактивов, использование СИ после ремонта и т.д.);

2) при получении двух из трех последовательных результатов анализа рабочих проб на основе числа результатов параллельных определений большего, чем предусмотрено методикой анализа (в соответствии с процедурой, описанной в разделе 5, [5], [7]).

Оперативный контроль процедуры анализа может быть реализован с каждой серией рабочих проб (при наличии достаточного парка СО и установившейся традиции организации контроля, например при анализе черных металлов, сплавов).

4.14 Проведение оперативного контроля процедуры анализа в 1) и 2) случаях предупреждает появление неудовлетворительных результатов рабочих измерений и не носит плановый характер.

Примечание — В этом случае оперативный контроль процедуры анализа должен быть дополнен контролем стабильности результатов анализа.

4.15 Проведение оперативного контроля процедуры анализа в случае 3) позволяет проводить практически 100%-ный контроль качества результатов рабочих измерений (оценку качества результатов анализа рабочих проб соответствующей серии) и не допустить выдачу неудовлетворительных результатов рабочих измерений <6>. Проведение такого контроля носит плановый характер.

В электронном документе текст соответствует официальному источнику.

<6> В этом случае, если при оперативном контроле процедуры анализа используют ОК, адекватные анализируемым пробам, контроль стабильности результатов анализа допустимо не проводить.

Примечания

1 Результаты контрольных измерений, полученные при оперативном контроле процедуры анализа, проводимом с каждой серией рабочих проб, могут быть использованы при реализации любой из форм контроля стабильности результатов анализа по 4.17 (результаты контрольных измерений, полученные при повторной реализации контрольных процедур по 5.5 — 5.10, использованию не подлежат).

2 Использование результатов контрольных измерений, выполняемых одновременно с каждой серией рабочих проб, позволяет осуществлять при контроле стабильности результатов анализа с применением контрольных карт оперативное управление качеством анализа (применяя установленные при работе с контрольными картами правила рассмотрения возникающих ситуаций).

4.16 Контроль стабильности результатов анализа проводят в целях подтверждения лабораторией компетентности в обеспечении качества выдаваемых результатов анализа и оценки деятельности лаборатории в целом.

4.17 Контроль стабильности результатов анализа может предусматривать следующие формы:

1) контроль стабильности результатов анализа с использованием контрольных карт, реализуемый путем контроля и поддержания на требуемом уровне:

— погрешности (неопределенности) результатов анализа <7>,

<7> Если результат анализа представляет собой среднее значение из результатов единичного анализа, то понятие «контроль погрешности результатов анализа» идентично понятию «контроль систематической погрешности результатов единичного анализа» по [5].

— внутрилабораторной прецизионности <8>,

<8> Допустимо контроль внутрилабораторной прецизионности осуществлять путем контроля промежуточной прецизионности для всех факторов (время, исполнитель, экземпляр СИ и т.п.), формирующих внутрилабораторную прецизионность.

— повторяемости результатов параллельных определений;

2) периодическая проверка подконтрольности процедуры выполнения анализа;

3) выборочный статистический контроль (по альтернативному признаку) внутрилабораторной прецизионности, точности результатов анализа, полученных за определенный период времени.

При организации контроля стабильности выбирают в зависимости от организации работ в лаборатории применительно к каждой процедуре анализа одну из форм контроля стабильности.

4.18 Посредством использования данных, полученных при контроле стабильности результатов анализа, могут быть установлены значения показателей внутрилабораторной прецизионности, правильности, точности результатов анализа, фактически обеспечиваемые в лаборатории, и проведено их сопоставление с ранее установленными значениями.

Примечание — Если имеется информация о наличии значимых дополнительных факторов, влияющих на значение показателей качества результатов анализа, но не учитываемых при проведении контроля стабильности результатов анализа, например информация о неадекватности используемых ОК объекту анализа, неоднородности объекта анализа по сравнению с ОК, то необходимо оценку степени влияния таких факторов проводить с помощью отдельных экспериментов или с использованием априорной информации и расчет показателей качества выполнять с учетом результатов проведенной оценки.

4.19 Внутренний контроль всех видов основан на информации, получаемой в процессе реализации контрольных процедур — процедур получения оценок погрешности (неопределенности) или ее составляющих с использованием контрольных измерений (определений), выполненных с применением средств контроля.

Выводы о качестве результатов анализа, получаемых в лаборатории, делают на основе выводов о качестве результатов контрольных измерений. Достоверность выводов о качестве результатов анализа зависит от реализуемой формы контроля стабильности результатов анализа, используемого числа контрольных процедур, частоты их проведения.

4.20 Требования к проведению контрольных измерений (определений) аналогичны требованиям к проведению анализа рабочих проб, установленным в НД на методики анализа.

Примечание — Если принято решение о проведении контроля не всей процедуры измерений, а ее частей (части), контрольные измерения (определения) проводят применительно к этим частям (этой части) процедуры измерений.

4.21 В качестве средств контроля могут быть использованы:

— ОК: СО по ГОСТ 8.315 или АС по РМГ 60;

— рабочие пробы с известной добавкой определяемого компонента;

— рабочие пробы, разбавленные в определенном соотношении;

— рабочие пробы, разбавленные в определенном отношении, с известной добавкой определяемого компонента;

— рабочие пробы, анализируемые с использованием разных навесок (аликвот);

— контрольные пробы (однородные, стабильные и адекватные по составу рабочим пробам);

— рабочие пробы стабильного состава (как минимум на время получения результатов контрольных измерений для формирования контрольной процедуры).

Примечание — При проведении оперативного контроля процедуры анализа используют средства контроля с известными исполнителю характеристиками.

Если оперативный контроль процедуры анализа организует ответственный за контроль качества результатов анализа, то средства контроля выдают исполнителям в шифрованном виде.

При проведении контроля стабильности результатов анализа средства контроля выдают исполнителям в шифрованном виде <9>. Средства контроля при этом, по возможности, шифруют как обычные рабочие пробы.

<9> Допускают использование для контроля нешифрованных средств контроля, если применяемая в лаборатории методика анализа полностью автоматизирована.

4.22 Алгоритм проведения отдельно взятой контрольной процедуры выбирают с учетом:

— контролируемого показателя качества результатов анализа (показателя повторяемости, внутрилабораторной прецизионности, точности результатов анализа);

— наличия средств контроля;

— специфики метода анализа.

4.23 В процессе выполнения отдельно взятой контрольной процедуры предусматривают: при контроле повторяемости — выполнение n параллельных (контрольных) определений одной пробы; при контроле внутрилабораторной прецизионности — выполнение основного и повторного контрольных измерений одной и той же пробы в условиях внутрилабораторной прецизионности; при контроле точности результатов анализа — выполнение контрольных измерений с использованием тех или иных средств контроля: ОК; рабочей пробы и рабочей пробы с добавкой; рабочей пробы, разбавленной рабочей пробы и разбавленной рабочей пробы с добавкой; рабочей пробы и разбавленной рабочей пробы; рабочей пробы, проанализированной с использованием разных навесок (аликвот); рабочей пробы, проанализированной с использованием разных методик анализа (контролируемой и контрольной методики — другой методики анализа с установленными показателями качества).

4.24 На основе результатов контрольных измерений (определений) рассчитывают результат контрольной процедуры — статистическую оценку показателя качества результатов анализа, полученную на основе результатов контрольных измерений (определений), выполненных при реализации отдельно взятой контрольной процедуры, в соответствии с выбранным алгоритмом оперативного контроля процедуры анализа.

Результат контрольной процедуры сравнивают с соответствующим нормативом контроля (см. раздел 5).

4.25 Оперативный контроль процедуры анализа проводят на основе оценки погрешности (неопределенности) при реализации отдельно взятой контрольной процедуры.

Алгоритмы оперативного контроля процедуры анализа приведены в разделе 5.

Примечания

1 При необходимости оперативной проверки расхождения результатов измерений, полученных в условиях внутрилабораторной прецизионности, проводят контроль внутрилабораторной прецизионности результатов анализа. Алгоритм контроля внутрилабораторной прецизионности приведен в 5.13.

2 Если методика анализа предусматривает получение результата анализа на основе результатов параллельных определений, при проведении рабочих измерений проводят проверку приемлемости результатов параллельных определений в соответствии с текстом НД на методику анализа, [5], [7], а получение результатов контрольных измерений осуществляют в соответствии с 5.11.

3 В некоторых случаях оперативный контроль повторяемости целесообразно проводить для методик, в которых установлено, что результат единичного определения является результатом анализа.

4.26 Контроль стабильности результатов анализа с использованием контрольных карт является визуальным средством наблюдения за динамикой изменений показателей качества результатов анализа, последующего установления причин этого изменения и оперативного управления качеством анализа на основе установленных при работе с контрольными картами правил рассмотрения возникающих ситуаций.

Примечание — Анализ данных контрольных карт позволяет проводить как корректирующие, так и предупреждающие мероприятия (по ГОСТ ISO/IEC 17025), позволяющие обеспечивать получение результатов рабочих измерений с необходимой точностью.

4.27 Информация о статистических оценках показателей качества результатов анализа, получаемая при контроле стабильности результатов анализа с использованием контрольных карт, позволяет провести достоверную оценку показателей правильности, внутрилабораторной прецизионности и точности результатов анализа <10>.

<10> См. примечание к 4.18.

4.28 Процедуры контроля стабильности результатов анализа с использованием контрольных карт и оценки на основе получаемой информации показателей качества результатов анализа приведены в разделе 6.

4.29 Контроль стабильности результатов анализа в форме периодической проверки подконтрольности процедуры выполнения анализа является средством проверки качества результатов анализа на основе фиксированного, как правило, небольшого числа контрольных измерений, проводимых в течение контролируемого периода.

4.30 Периодическую проверку подконтрольности процедуры выполнения анализа применяют при эпизодичности контроля объектов <11>.

<11> В этом случае контролируемый период определяют периодом получения результатов рабочих измерений.

Примечание — К периодической проверке подконтрольности процедуры выполнения анализа допустимо также переходить, если с использованием других форм контроля стабильности регулярно получают удовлетворительные результаты контроля.

4.31 Процедуры контроля стабильности результатов анализа в форме периодической проверки подконтрольности процедуры выполнения анализа <12> приведены в разделе 7.

<12> Следует иметь в виду, что выводы о качестве результатов измерений с использованием этой формы контроля делают по окончании контролируемого периода.

4.32 Контроль стабильности результатов анализа в форме выборочного статистического контроля (ВСК) качества результатов анализа по альтернативному признаку является средством проверки качества результатов анализа рабочих проб, полученных за определенный период времени (далее — контролируемый период) <13>.

<13> Контролируемый период может быть определен следующим образом: установленными периодами отчетности, графиками плановых проверок деятельности лаборатории контролирующими органами, периодом времени, необходимым для анализа партии рабочих проб, подлежащей оценке (приемке или забракованию) по результатам контроля, и т.п.

4.33 Алгоритм ВСК по альтернативному признаку <14> приведен в разделе 8.

<14> Следует иметь в виду, что выводы о качестве результатов измерений с использованием этой формы контроля делают по окончании контролируемого периода.

4.34 Если оперативный контроль процедуры анализа проводят с каждой серией рабочих проб, то для обоснованных выводов о качестве результатов анализа, получаемых в лаборатории, допустимо при организации контроля стабильности результатов анализа ограничиться проведением контроля стабильности внутрилабораторной прецизионности результатов анализа на рабочих пробах с использованием контрольных карт Шухарта или ВСК по альтернативному признаку.

4.35 Оцененные в процессе контроля стабильности показатели качества результатов анализа, принимаемые за основу при расчете нормативов внутреннего контроля на последующий период контроля, оформляют протоколом по А.5 или по А.6 приложения А. При этом ранее действовавший протокол аннулируют.

4.36 Организация и проведение работ по контролю стабильности результатов анализа, а также по оперативному контролю процедуры анализа в том случае, если последний проводят с каждой серией рабочих проб, подлежат планированию и включению в перечень плановых работ лаборатории.

4.36.1 При планировании работ по внутреннему контролю результатов анализа разрабатывают и утверждают в порядке, определенном в лаборатории, программу (план) внутреннего контроля.

Программа (план) внутреннего контроля должна отражать:

— используемые в лаборатории формы, алгоритмы контроля качества результатов анализа применительно к контролируемым объектам и определяемым компонентам, диапазонам анализа рабочих проб, с учетом реализуемых методик анализа;

— принятые алгоритмы проведения контрольных процедур;

— используемые средства контроля.

Программу (план) внутреннего контроля целесообразно составлять ежегодно.

Примечания

1 При планировании контроля подлежат учету алгоритмы оперативного контроля процедуры анализа, периодичность проведения контрольных измерений, если они установлены в НД на методику анализа.

2 При изменении плана проведения рабочих измерений программа контроля может быть скорректирована в установленном в лаборатории порядке.

4.36.2 Внутренний контроль качества результатов анализа проводят применительно ко всем процедурам измерений, применяемым в лаборатории.

Примечание — Если НД на методику анализа устанавливает несколько возможных процедур для получения результата анализа (например, получение результата анализа с учетом процедуры экстракции пробы либо без ее проведения), то контроль стабильности результатов анализа проводят для каждой применяемой в лаборатории процедуры.

4.36.3 Если в соответствии с одной процедурой анализа предусмотрено определение нескольких компонентов с использованием одного СИ, то допустимо проведение внутреннего контроля качества результатов анализа применительно к одному-двум выбранным компонентам (компоненты по которым будет вестись контроль качества результатов анализа выбирают с учетом следующих параметров):

— компонент с максимальным значением показателя точности результатов анализа для соответствующего диапазона измерений;

— наиболее плохо определяющийся компонент (например, при хроматографическом анализе, компонент, элюирующийся в конце хроматограммы или один из неполностью разделяемых компонентов при регламентированных в методике условиях разделения).

Примечание — При планировании работ по организации контроля в этом случае целесообразна периодическая смена контролируемых компонентов.

4.36.4 Если в течение года проводят разовые измерения применительно к конкретным процедурам анализа, то для этих методик контроль стабильности результатов анализа не выполняют. В этом случае осуществляют оперативный контроль процедуры анализа параллельно с каждым рабочим измерением.

4.37 Результаты контрольных измерений подлежат включению в рабочие журналы исполнителей наряду с рабочими измерениями.

4.38 Результаты оперативного контроля, контроля стабильности результатов анализа и выводы по результатам контроля отражают в соответствующих журналах контроля.

Примечания

1 Допустимо журналы контроля оформлять в электронном виде при наличии системы допуска и защиты информации, отраженной в руководстве по качеству лаборатории.

2 Для ведения журналов оперативного контроля, контроля стабильности (с расчетом результатов контроля) и построения контрольных карт Шухарта целесообразно использовать компьютерные лабораторно-информационные системы, разработанные по [8], прошедшие тестирование либо аттестацию по [9].

4.39 Процедуры организации, алгоритмы оценивания показателей качества результатов анализа, процедуры организации, используемые элементы, формы и алгоритмы проведения внутреннего контроля являются составной частью системы качества лаборатории, документально оформляемой в виде руководства по качеству лаборатории с учетом требований ГОСТ ISO/IEC 17025.

Примечания

1 Допустимо процедуры организации и алгоритмы оценивания показателей качества результатов анализа при внедрении методики и при ее реализации в лаборатории оформлять отдельной инструкцией (или другим внутренним документом лаборатории) с соответствующей ссылкой на нее в руководстве по качеству лаборатории.

2 Допустимо процедуры организации и алгоритмы проведения внутреннего контроля оформлять отдельной инструкцией с соответствующей ссылкой на нее в руководстве по качеству лаборатории.

4.40 Внедрение в лаборатории внутреннего контроля, обеспечивающего стабильность результатов анализа, позволяет в протоколах анализа, выдаваемых лабораторией <15>, использовать рекомендованную в РМГ 61, 4.20 форму представления результатов анализа

<15> Если НД на методику анализа предусматривает соответствующую форму предоставления результатов анализа.

либо ,

где — результат анализа;

— значение интервальной оценки показателя точности результатов анализа, установленное при реализации методики в лаборатории и закрепленное протоколом по А.5 (А.6) приложения А.

5. Алгоритмы оперативного контроля процедуры анализа

5.1 Оперативный контроль процедуры анализа осуществляет непосредственно исполнитель на основе оценки показателя точности результатов анализа при реализации отдельно взятой контрольной процедуры и сравнения полученной оценки (результата контрольной процедуры) с установленным нормативом контроля. При организации контроля исполнитель анализа в соответствии с алгоритмом проведения контрольной процедуры выбирает (при необходимости — подготавливает) средства контроля.

Примечание — Оперативный контроль процедуры анализа может быть проведен по указанию ответственного за внутренний контроль, при этом последний предоставляет средства контроля.

5.2 Схема оперативного контроля процедуры анализа предусматривает:

— выбор контрольной процедуры (если алгоритм оперативного контроля процедуры анализа не установлен НД на методику анализа);

— реализацию контрольной процедуры;

— расчет результата контрольной процедуры;

— расчет (установление) норматива контроля;

— реализацию решающего правила контроля (сопоставление результата контрольной процедуры с нормативом контроля, принятие решений по результатам контроля).

5.3 Контрольные процедуры могут быть реализованы с применением ОК, метода добавок совместно с методом разбавления пробы, метода добавок, метода разбавления пробы, метода варьирования навески, контрольной методики анализа.

Примечание — При оперативной проверке расхождения результатов измерений, полученных в условиях внутрилабораторной прецизионности, используют метод повторного анализа идентичных рабочих проб.

5.4 Рекомендации по выбору контрольной процедуры для контроля точности результатов анализа

5.4.1 Использование КПКТ с применением ОК наиболее предпочтительно, так как позволяет исполнителю оценить выполнение процедуры анализа в целом. КПКТ применяют при наличии ОК либо возможности и экономической целесообразности их создания в лаборатории для осуществления процедур внутреннего контроля качества результатов анализа.

5.4.2 КПКТ с применением метода добавок совместно с методом разбавления пробы используют при наличии условий для создания проб с введенными добавками и разбавленных проб, адекватных анализируемым пробам, и при отсутствии возможности по условиям методики анализа или экономической нецелесообразности применять другие способы контроля точности.

Примечания

1 Допускают применение только метода добавок (только метода разбавления пробы), если установлена (например, по результатам оценки показателя точности результатов анализа при реализации методики в лаборатории, на основе архивных данных) незначительность смещения (точечной оценки показателя правильности результатов анализа) на фоне показателя внутрилабораторной прецизионности.

2 Накопление информации по результатам применения метода добавок совместно с методом разбавления пробы может позволить перейти только на метод добавок либо только на метод разбавления пробы.

3 При невозможности введения добавок в пробу и/или ее разбавления может быть применен метод варьирования навесок, который по сути является методом разбавления пробы в отсутствии разбавляющего вещества.

5.4.3 КПКТ с применением контрольной методики анализа используют при наличии в лаборатории другой хорошо опробованной методики, как правило, обладающей более высокой точностью по отношению к контролируемой методике. При этом подлежит учету экономическая целесообразность применения данного способа по сравнению с другими способами контроля.

5.5 Алгоритм оперативного контроля процедуры анализа с использованием контрольной процедуры для контроля точности с применением образцов для контроля

5.5.1 Контрольная процедура для контроля точности с применением образцов для контроля

5.5.1.1 ОК должны быть адекватны анализируемым пробам (возможные различия в составах ОК и анализируемых проб не вносят в результаты анализа дополнительную статистически значимую погрешность/неопределенность). Погрешность (неопределенность) аттестованного значения ОК — не более одной трети от значения показателя точности результатов анализа.

5.5.1.2 При реализации контрольной процедуры получают результат контрольного измерения <16> аттестованной характеристики образца для контроля и сравнивают его с аттестованным значением C.

<16> За результат контрольного измерения принимают среднеарифметическое значение результатов параллельных определений (выполняющих в данной ситуации роль контрольных определений) в том случае, если они предусмотрены НД на методику анализа и удовлетворяют требованиям контроля повторяемости по 5.11.

5.5.1.3 Результат контрольной процедуры рассчитывают по формуле

. (1)

5.5.2 Норматив контроля К рассчитывают по формуле

, (2)

где — значение интервальной оценки показателя точности результатов анализа, соответствующее аттестованному значению ОК.

5.5.3 Реализация решающего правила контроля

5.5.3.1 Сопоставляют результат контрольной процедуры с нормативом контроля.

5.5.3.2 Если результат контрольной процедуры удовлетворяет условию

, (3)

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении данного условия контрольную процедуру повторяют. При повторном невыполнении этого условия выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

5.5.3.3 Пример оперативного контроля процедуры анализа с применением ОК (для того случая, когда показатели качества результатов анализа установлены в виде расширенной неопределенности и ее составляющих) приведен в Д.1 приложения Д.

5.6 Алгоритм оперативного контроля процедуры анализа с использованием контрольной процедуры для контроля точности с применением метода добавок совместно с методом разбавления пробы

5.6.1 Контрольная процедура для контроля точности с применением метода добавок совместно с методом разбавления пробы

5.6.1.1 При применении метода добавок совместно с методом разбавления пробы погрешности (неопределенности), обусловленные операциями разбавления и введения добавок, а также погрешности (неопределенности) СИ, используемых для разбавления и введения добавок, не являются статистически значимой частью погрешности (неопределенности) результатов измерений содержания компонента.

5.6.1.2 При реализации контрольной процедуры получают результаты контрольных измерений <17> содержания компонента в трех контрольных образцах:

<17> За результат контрольного измерения принимают среднеарифметическое значение результатов параллельных определений (выполняющих в данной ситуации роль контрольных определений) в том случае, если они предусмотрены НД на методику анализа и удовлетворяют требованиям контроля повторяемости по 5.11.

— в рабочей пробе — ;

— в рабочей пробе, разбавленной в раз, — ;

— в рабочей пробе, разбавленной в раз с введенной добавкой определяемого компонента, — .

Значения добавки и коэффициента разбавления удовлетворяют условиям:

Если для показателя точности результатов анализа установлено постоянство его значений в относительных единицах для диапазона, охватывающего содержание компонента в рабочей пробе, разбавленной рабочей пробе и разбавленной рабочей пробе с добавкой, то значения коэффициента разбавления и добавки могут быть установлены с учетом рекомендаций таблицы 3.

Таблица 3

Рекомендуемые значения коэффициента разбавления и добавки в зависимости от показателя точности результатов анализа <18>

<18> При > 50% метод контроля не рекомендуется к применению.

Рекомендации по определению массы (объема) вещества (материала) добавки приведены в приложении Е.

5.6.1.3 Результат контрольной процедуры рассчитывают по формуле

. (6)

Примечание — В частном случае, при = 2, . (7)

5.6.2 Норматив контроля К рассчитывают по формуле

(8)

где — значение интервальной оценки показателя точности результатов анализа, соответствующее содержанию компонента в разбавленной пробе с добавкой (разбавленной пробе, рабочей пробе).

Примечание — В частном случае, если и = 2

. (9)

5.6.3 Реализацию решающего правила контроля проводят в соответствии с 5.5.3.

5.7 Алгоритм оперативного контроля процедуры анализа с использованием контрольной процедуры для контроля точности с применением метода добавок

5.7.1 Контрольная процедура для контроля точности с применением метода добавок

5.7.1.1 При применении метода добавок погрешности (неопределенности), обусловленные операциями введения добавок, а также погрешности (неопределенности) СИ, используемых для введения добавок, не являются статистически значимой частью погрешности (неопределенности) результатов измерений содержания компонента <19>.

<19> Если установлено отсутствие определяемого компонента в рабочей пробе (на уровне предела обнаружения методики анализа), то введение в рабочую пробу добавки , соответствующей диапазону действия методики, позволяет рабочую пробу с введенной добавкой рассматривать в качестве ОК с аттестованным значением и использовать алгоритм контроля по 5.5 (;, где — результат анализа пробы с добавкой, — значение интервальной оценки показателя точности результатов анализа, соответствующее значению добавки).

5.7.1.2 При реализации контрольной процедуры получают результаты контрольных измерений <20> содержания определяемого компонента в рабочей пробе — и в рабочей пробе с внесенной известной добавкой — .

<20> За результат контрольного измерения принимают среднеарифметическое значение результатов параллельных определений (выполняющих в данной ситуации роль контрольных определений) в том случае, если они предусмотрены НД на методику анализа и удовлетворяют требованиям контроля повторяемости по 5.11.

Значение добавки удовлетворяет условию

, (10)

где — значение интервальной оценки показателя точности результатов анализа, соответствующее содержанию компонента в рабочей пробе (расчетному значению содержания компонента в пробе с добавкой).

Если для показателя точности результатов анализа установлено постоянство его значений в относительных единицах для диапазона, охватывающего содержание компонента в рабочей пробе и рабочей пробе с добавкой, то значения добавки могут быть установлены с учетом рекомендаций таблицы 3.

Рекомендации по определению массы (объема) вещества (материала) добавки приведены в приложении Е.

5.7.1.3 Результат контрольной процедуры рассчитывают по формуле

. (11)

5.7.2 Норматив контроля К рассчитывают по формуле

, (12)

где — значение показателя точности результатов анализа, соответствующее содержанию компонента в пробе с добавкой (рабочей пробе).

Примечание — В частном случае, если ,

. (13)

5.7.3 Реализацию решающего правила контроля проводят в соответствии с 5.5.3.

5.8 Алгоритм оперативного контроля процедуры анализа с использованием контрольной процедуры для контроля точности с применением метода разбавления пробы

5.8.1 Контрольная процедура для контроля точности с применением метода разбавления пробы

5.8.1.1 При применении метода разбавления пробы погрешности (неопределенности), обусловленные операциями разбавления, а также погрешности (неопределенности) СИ, используемых для разбавления, не являются статистически значимой частью погрешности (неопределенности) результатов измерений содержания компонента.

5.8.1.2 При реализации контрольной процедуры получают результаты контрольных измерений <21> содержания определяемого компонента в рабочей пробе — и в рабочей пробе, разбавленной в раз, — .

<21> За результат контрольного измерения принимают среднеарифметическое значение результатов параллельных определений (выполняющих в данной ситуации роль контрольных определений) в том случае, если они предусмотрены НД на методику анализа и удовлетворяют требованиям контроля повторяемости по 5.11.

Значение коэффициента разбавления удовлетворяет условию

разбавленной пробе).

Если для показателя точности результатов анализа установлено постоянство его значений в относительных единицах для диапазона, охватывающего содержание компонента в рабочей пробе и разбавленной рабочей пробе, то значения коэффициента разбавления могут быть установлены с учетом рекомендаций таблицы 3.

5.8.1.3 Результат контрольной процедуры рассчитывают по формуле

. (15)

5.8.2 Норматив контроля К рассчитывают по формуле

, (16)

где — значение интервальной оценки показателя точности результатов анализа, соответствующее содержанию компонента в разбавленной пробе (рабочей пробе).

Примечание — В частном случае, если и = 2,

. (17)

5.8.3 Реализацию решающего правила контроля проводят в соответствии с 5.5.3.

5.9 Алгоритм оперативного контроля процедуры анализа с использованием контрольной процедуры для контроля точности с применением метода варьирования навески

5.9.1 Контрольная процедура для контроля точности с применением метода варьирования навески <22>

<22> Приведенный алгоритм не относится к результатам измерений, выраженным в единицах массы, количества вещества.

5.9.1.1 При применении метода варьирования навески осуществляется изменение навески пробы по сравнению с рекомендуемой методикой анализа. Метод применим, если при изменении навески масса определяемого компонента в пробе соответствует диапазону измерений по контролируемой методике.

Примечание — Метод может быть применен в случае варьирования объема пробы, при этом предъявляют аналогичные требования к отношению объема пробы и измененного объема пробы.

5.9.1.2 При реализации контрольной процедуры получают результаты контрольных измерений содержания определяемого компонента в рабочей пробе массой и содержания определяемого компонента в рабочей пробе с измененной навеской массой , при этом должна быть меньше .

Коэффициент изменения навески рассчитывают по формуле

. (18)

Значение коэффициента изменения навески удовлетворяет условию

, (19)

определяемого компонента, соответствующего измененной навеске.

Если для показателя точности результатов анализа установлено постоянство его значений в относительных единицах для диапазона, охватывающего содержание компонента в рабочей пробе и пробе с содержанием компонента — , то значения коэффициента изменения навески могут быть установлены с учетом рекомендаций таблицы 3.

5.9.1.3 Результат контрольной процедуры рассчитывают по формуле

, (20)

где — результат контрольного измерения содержания определяемого компонента в рабочей пробе с измененной навеской;

— результат контрольного измерения содержания определяемого компонента в рабочей пробе.

5.9.2 Норматив контроля К рассчитывают по формуле

, (21)

где — значение интервальной оценки показателя точности результатов анализа, установленное в лаборатории при реализации методики и соответствующее содержанию определяемого компонента в рабочей пробе (в рабочей пробе с измененной навеской).

Примечание — Так как содержание определяемого компонента в рабочей пробе и рабочей пробе с измененной навеской совпадает, целесообразно норматив контроля рассчитывать по формуле

. (22)

5.9.3 Реализацию решающего правила контроля проводят в соответствии с 5.5.3.

5.10 Алгоритм оперативного контроля процедуры анализа с использованием контрольной процедуры для контроля точности с применением контрольной методики анализа

5.10.1 Контрольная процедура для контроля точности с применением контрольной методики анализа <23>

<23> Аналогичный алгоритм может быть реализован при сравнении результатов измерений одной пробы, полученных в разных лабораториях с применением разных методик.

5.10.1.1 При использовании КПКТ с применением контрольной методики соблюдают следующие условия:

1) диапазоны действия контролируемой и контрольной методик соответствуют диапазону содержаний определяемого компонента в рабочих пробах, анализируемых в лаборатории;

2) принцип измерений, положенный в основу контрольной методики, должен отличаться от принципа измерений, положенного в основу контролируемой методики;

3) для контрольной методики установлены значения показателя точности результатов анализа при ее реализации в лаборатории;

4) показатель точности результатов анализа, получаемых по контрольной методике, формируется за счет показателя внутрилабораторной прецизионности, который, в свою очередь, не превышает показателя внутрилабораторной прецизионности результатов анализа, получаемых по контролируемой методике;

5) результаты анализа, получаемые по контрольной методике, соответствуют требованиям внутреннего контроля;

6) интервальные оценки показателей точности результатов анализа для контрольной и контролируемой методик должны быть установлены при одном уровне доверительной вероятности.

5.10.1.2 При реализации контрольной процедуры получают в одинаковых условиях результаты контрольных измерений <24> и одной и той же пробы по контролируемой и контрольной методикам анализа соответственно.

<24> За результат контрольного измерения принимают среднеарифметическое значение из результатов параллельных определений (выполняющих в данной ситуации роль контрольных определений) в том случае, если они предусмотрены НД на методику анализа и удовлетворяют требованиям контроля повторяемости по 5.11.

5.10.1.3 Результат контрольной процедуры рассчитывают по формуле

. (23)

5.10.2 Норматив контроля К рассчитывают по формуле

, (24)

где — значение интервальной оценки показателя точности результатов анализа при реализации контрольной (контролируемой) методики анализа в лаборатории, соответствующее содержанию компонента в пробе.

Примечание — В частном случае, если ,

, (25)

5.10.3 Реализацию решающего правила контроля проводят в соответствии с 5.5.3.

5.11 Получение результатов контрольных измерений при оперативном контроле процедуры анализа

5.11.1 Результаты контрольных измерений получают на основе результатов контроля повторяемости результатов контрольных определений, если НД на методику анализа предусмотрены параллельные определения для получения результата анализа.

Примечания — Возможна ситуация, когда:

— характеристика повторяемости в методике анализа установлена для части процедуры измерений;

— в НД на методику анализа не предусмотрены параллельные определения для получения результата анализа.

В этом случае, если характеристика повторяемости части процедуры измерений выбрана в соответствии с 4.9 контролируемой составляющей характеристики погрешности (бюджета неопределенности) измерений, то для ее контроля может быть использован алгоритм настоящего пункта.

5.11.2 При реализации алгоритмов оперативного контроля процедуры анализа по 5.5 — 5.10 контроль повторяемости осуществляют для каждого из результатов контрольных измерений, получаемых в соответствии с методикой анализа <25>.

<25> Контроль повторяемости проводят также для каждого из результатов контрольных измерений, получаемых в соответствии с методикой анализа, при реализации контроля стабильности результатов анализа в форме периодической проверки подконтрольности процедуры анализа или ВСК (см. разделы 7 и 8).

5.11.3 Процедура контроля предусматривает сравнение абсолютного расхождения между наибольшим и наименьшим результатами контрольных определений, выполненных для получения результата контрольного измерения, с пределом повторяемости .

5.11.4 За результат контрольного измерения принимают среднее из результатов n контрольных определений, если выполнено условие

. (26)

5.11.5 Предел повторяемости, если он не установлен в методике анализа, может быть рассчитан по формуле

, (27)

где Q (P, n) — коэффициент, зависящий от числа контрольных определений n и доверительной вероятности P. Значения коэффициента для доверительной вероятности P = 0,95 приведены в таблице 4;

— значение точечной оценки показателя повторяемости методики анализа, заданное НД на методику анализа и соответствующее содержанию компонента в пробе, найденному как среднее арифметическое значение результатов контрольных определений.

Таблица 4

Значения коэффициента Q (P, n) для доверительной вероятности P = 0,95

5.11.6 Если условие по 5.11.4 не выполнено, процедуру контроля по 5.11.3 — 5.11.5 повторяют. При повторном превышении предела повторяемости выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

5.12 Формы регистрации результатов оперативного контроля процедуры анализа приведены в приложении Ж (применительно к реализуемым контрольным процедурам)

5.13 Алгоритм контроля внутрилабораторной прецизионности результатов анализа

5.13.1 Алгоритм контроля внутрилабораторной прецизионности результатов анализа реализуют в тех случаях, когда возникает необходимость оперативной проверки расхождения результатов измерений, полученных в разных условиях (например, в случае выхода исполнителя анализа на работу после длительного перерыва и т.п.), в то же время реализация алгоритма оперативного контроля процедуры анализа признана нецелесообразной. При этом результаты контрольных измерений получают в условиях внутрилабораторной прецизионности, варьируя все факторы (время проведения анализа, средство измерений и т.п.), изменяющиеся в лаборатории при проведении анализа.

5.13.2 При реализации контрольной процедуры получают два результата контрольных измерений <26> и одной и той же пробы (или ОК) в условиях внутрилабораторной прецизионности.

<26> За результат контрольного измерения принимают среднеарифметическое значение результатов параллельных определений (выполняющих в данной ситуации роль контрольных определений) в том случае, если они предусмотрены НД на методику анализа и удовлетворяют требованиям контроля повторяемости по 5.11.

5.13.3 Рассчитывают результат контрольной процедуры по формуле

. (28)

5.13.4 Норматив контроля (предел внутрилабораторной прецизионности ) может быть рассчитан по формуле

, (29)

В электронном документе текст соответствует официальному источнику.

где — значение точечной оценки показателя внутрилабораторной прецизионности результатов анализа, соответствующее содержанию компонента в пробе, найденному как среднеарифметическое значение результатов контрольных измерений и , используемых для получения результата контрольной процедуры .

5.13.5 Реализация решающего правила контроля

5.13.5.1 Сопоставляют результат контрольной процедуры с нормативом контроля.

5.13.5.2 Если результат контрольной процедуры удовлетворяет условию

, (30)

внутрилабораторную прецизионность результатов анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении данного условия контрольную процедуру повторяют. При повторном невыполнении этого условия выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

5.13.6 Формы регистрации результатов контроля внутрилабораторной прецизионности результатов анализа аналогичны формам регистрации результатов оперативного контроля процедуры анализа.

6. Контроль стабильности результатов анализа с использованием контрольных карт

6.1 Общие представления

6.1.1 Контроль стабильности результатов анализа с использованием контрольных карт представляет собой графический способ контроля показателей качества результатов анализа.

6.1.2 В целях обеспечения стабильности результатов анализа и принятия оперативных мер по управлению процессом анализа одновременно и регулярно строят контрольные карты для контроля показателей повторяемости, внутрилабораторной прецизионности, точности результатов анализа.

6.1.3 Для организации контроля стабильности результатов анализа с использованием контрольных карт определяют:

— необходимое число контрольных процедур для достоверной оценки каждого из контролируемых показателей качества результатов анализа (с учетом принятых значений неопределенности оценок этих показателей <27> согласно приложениям И, К);

<27> Оценку контролируемого показателя качества считают достоверной, если неопределенность этой оценки не превышает 0,33.

— временной диапазон для получения необходимого числа контрольных процедур (далее — временной диапазон), устанавливаемый с учетом: длительности процесса выполнения анализа, стоимости анализа, взаимосвязи числа контрольных процедур с числом рабочих проб, анализируемых за определенный период времени.

Примечания

1 При установлении временного диапазона могут быть использованы рекомендации по выбору числа контрольных процедур, реализуемых в течение месяца, в зависимости от объема анализируемых проб (в соответствии с таблицей 5).

2 При выполнении контрольных измерений с каждой серией рабочих проб допустимо откладывать на контрольной карте результаты контрольных процедур в привязке к однотипным условиям проведения анализа [например, один результат контрольной процедуры, выбранный случайным образом из числа полученных за рабочий день (ряд смен), если в течение рабочего дня (ряда смен) условия проведения анализа приняты стабильными]. При этом временной диапазон определяют исходя из числа результатов контрольных процедур, откладываемых на контрольной карте.

Таблица 5

Рекомендуемое число контрольных процедур за месяц

6.1.4 Для контроля стабильности показателей качества результатов анализа могут быть использованы контрольные карты Шухарта и контрольные карты кумулятивных сумм. Для контроля повторяемости и внутрилабораторной прецизионности рекомендуется использовать контрольные карты Шухарта, для контроля точности — контрольные карты Шухарта или контрольные карты кумулятивных сумм.

Примечание — В настоящих рекомендациях приведены контрольные карты Шухарта по [10]: для контроля повторяемости и внутрилабораторной прецизионности — карты размахов, скользящих/текущих размахов, для контроля точности — карты индивидуальных значений <28>.

<28> В соответствии с [5] для контроля точности также может быть применена контрольная карта средних или контрольная карта кумулятивных сумм.

6.1.5 Применение контрольных карт Шухарта основано на сопоставлении результатов контрольных процедур с установленными нормативами контроля: пределами действия (устанавливаемыми для доверительной вероятности P = 0,997) и пределами предупреждения (устанавливаемыми для доверительной вероятности P = 0,95).

6.1.6 Применение контрольных карт кумулятивных сумм основано на сопоставлении сумм результатов последовательных контрольных процедур с нормативами контроля — границами регулирования. Контрольные карты кумулятивных сумм могут строиться с применением [5] или [11].

6.1.7 При контроле стабильности с использованием контрольных карт в течение временного диапазона в соответствии с выбранным алгоритмом проведения контрольных процедур выполняют контрольные измерения.

6.1.8 Контрольные измерения, необходимые для реализации контрольных процедур, проводят (по возможности) равномерно в течение временного диапазона.

Примечание — Если НД на методику анализа предусмотрено проведение параллельных определений для получения результата анализа, то при контроле стабильности результатов анализа с использованием контрольных карт за результат контрольного измерения принимают среднеарифметическое значение результатов n контрольных определений (без проведения процедуры проверки их расхождения на соответствие пределу повторяемости ).

6.1.9 При построении контрольной карты Шухарта для каждого из контролируемых показателей качества результатов анализа:

— выбирают алгоритмы проведения контрольных процедур (контроль точности — с применением ОК, метода добавок совместно с методом разбавления пробы, метода добавок, метода разбавления пробы, метода варьирования навески, контрольной методики анализа; контроль внутрилабораторной прецизионности и контроль повторяемости — с использованием ОК или рабочих проб);

— рассчитывают значения средней линии, пределов предупреждения и действия (в зависимости от выбранного алгоритма проведения контрольных процедур);

— наносят на контрольную карту значения средней линии, пределов предупреждения и действия (в виде горизонтальных линий);

— в соответствии с выбранным алгоритмом проведения контрольных процедур получают результаты контрольных измерений и формируют контрольные процедуры (в согласно 6.2);

В электронном документе текст соответствует официальному источнику.

— рассчитывают результаты контрольных процедур и в точке, соответствующей номеру контрольной процедуры, наносят их значения на контрольную карту;

— проводят анализ контрольных карт и, при необходимости, корректирующие или предупреждающие действия.

Примечание — Масштабирование контрольной карты по вертикальной оси целесообразно проводить в долях предела предупреждения.

6.1.10 Контрольные карты Шухарта допустимо строить в единицах измеряемых содержаний, в приведенных величинах, в относительных величинах.

Контрольные карты Шухарта в единицах измеряемых содержаний строят:

— для поддиапазонов с постоянными значениями показателей качества результатов анализа в единицах измеряемых содержаний;

— при наличии зависимости показателей качества результатов анализа от измеряемых содержаний — в случае использования в качестве средства контроля одного и того же ОК или одной и той же контрольной пробы.

Контрольные карты Шухарта в приведенных величинах строят для всего диапазона анализа рабочих проб, при наличии зависимости показателей качества результатов анализа от измеряемых содержаний и использовании различных средств контроля.

Контрольные карты Шухарта в относительных величинах строят для всего диапазона анализа рабочих проб, если в этом диапазоне показатели качества результатов анализа установлены в виде постоянных значений в относительных единицах.

Примечания

1 Построению контрольной карты в приведенных величинах должно предшествовать экспериментальное установление в лаборатории показателей качества результатов анализа.

2 На основе результатов контрольных процедур, полученных при построении контрольных карт в единицах измеряемых содержаний и в относительных величинах, могут быть установлены значения показателей качества результатов анализа.

Используемое для установления значений показателей качества число контрольных процедур должно быть не менее необходимого (см. 6.1.3) для достоверной оценки соответствующих показателей. При этом оценке показателей должен предшествовать анализ полученных данных. Не рекомендуется использование результатов контрольных процедур, выходящих за пределы действия.

6.1.11 Построение контрольных карт Шухарта в единицах измеряемых содержаний

6.1.11.1 Контрольные карты допустимо строить в привязке:

— к началу, середине и концу диапазона анализа (если показатели качества результатов анализа установлены по данным лаборатории в виде постоянных значений в единицах измеряемых содержаний для всех поддиапазонов диапазона анализа рабочих проб);

— к началу и концу диапазона анализа рабочих проб (если показатели качества результатов анализа установлены в виде линейной зависимости от содержания определяемого компонента или в виде постоянного значения в относительных единицах для всего диапазона анализа рабочих проб) <29>. В этом случае, при использовании в качестве средств контроля рабочих проб, определяют поддиапазоны, для которых устанавливают постоянные значения (в единицах измеряемых содержаний) показателей качества результатов анализа.

<29> В этой ситуации целесообразно построение контрольных карт в относительных величинах.

6.1.11.2 Если показатели качества результатов анализа установлены согласно 4.5.3 на основе показателей качества методики анализа, то на этапе внедрения процедуры контроля построение контрольных карт проводят:

— для каждого из поддиапазонов с постоянным значением показателей качества методики анализа (если показатели качества методики анализа установлены в виде постоянных значений в единицах измеряемых содержаний для всех поддиапазонов диапазона анализа рабочих проб);

— в привязке к началу, середине и концу диапазона анализа рабочих проб (если показатели качества методики анализа установлены в виде линейной зависимости от содержания определяемого компонента или в виде постоянного значения в относительных единицах для всего диапазона анализа рабочих проб) <30>. В этом случае, при использовании в качестве средств контроля рабочих проб, определяют поддиапазоны, для которых устанавливают постоянные значения (в единицах измеряемых содержаний) показателей качества результатов анализа.

<30> В этой ситуации целесообразно построение контрольных карт в относительных величинах.

6.1.11.3 При построении контрольной карты значения средней линии, пределов предупреждения и действия, результаты контрольных процедур рассчитывают: при контроле повторяемости и внутрилабораторной прецизионности — в соответствии с таблицей 6 (графа 2); при контроле точности — в соответствии с таблицей 7 (графа 2) <31>.

<31> Модуль значений пределов предупреждения при контроле точности равен значению соответствующего норматива оперативного контроля точности процедуры анализа.

6.1.12 Построение контрольной карты Шухарта в приведенных величинах

6.1.12.1 Контрольную карту строят для всего диапазона анализа рабочих проб.

6.1.12.2 При построении контрольной карты используют приведенные величины — значения средней линии, пределов предупреждения, пределов действия, результатов контрольных процедур, нормированные: при контроле точности — в единицах предела предупреждения; при контроле внутрилабораторной прецизионности — в единицах точечной оценки показателя внутрилабораторной прецизионности; при контроле повторяемости — в единицах точечной оценки показателя повторяемости.

Примечание — Допустимо построение одной контрольной карты для контроля точности с использованием различных алгоритмов контроля (по 6.1.9). При этом результаты контрольных процедур нормируют в единицах пределов предупреждения для соответствующих алгоритмов контроля.

6.1.12.3 Содержание определяемого компонента в используемых средствах контроля — ОК или рабочих пробах — должно соответствовать, в общем случае, началу, середине и концу диапазона анализа рабочих проб, при этом распределение средств контроля, частота проведения контрольных измерений для каждого из средств контроля подлежат согласованию с числом (объемом) рабочих проб, анализируемых в различных точках диапазона.

6.1.12.4 При построении контрольной карты расчет значений средней линии, пределов предупреждения, пределов действия, результатов контрольных процедур осуществляют: при контроле повторяемости и внутрилабораторной прецизионности — в соответствии с таблицей 6 (графа 3); при контроле точности — в соответствии с таблицей 7 (графа 3).

Таблица 6

Расчет результатов контрольных процедур, нормативов контроля: пределов действия и предупреждения, средней линии — при построении контрольных карт Шухарта для контроля повторяемости и внутрилабораторной прецизионности

Таблица 7

Расчет результатов контрольных процедур, нормативов контроля: пределов действия и предупреждения, средней линии — при построении контрольных карт Шухарта для контроля точности

6.1.13 Построение контрольной карты Шухарта в относительных величинах

6.1.13.1 Контрольную карту строят для диапазона (поддиапазона) анализа, в котором показатели качества результатов анализа постоянны в относительных единицах.

Примечания

1 Требования к используемым при построении контрольных карт в относительных величинах средствам контроля аналогичны требованиям к средствам контроля при построении контрольных карт в приведенных величинах.

2 Использование одного ОК при построении контрольных карт в относительных величинах нецелесообразно. В этом случае строят контрольные карты в единицах измеряемых содержаний.

6.1.13.2 Значения средней линии, пределов предупреждения, пределов действия, результатов контрольных процедур рассчитывают, используя их значения в приведенных величинах в соответствии с таблицами 6 и 7 (графа 3), умноженные на значения контролируемого показателя качества (точности, внутрилабораторной прецизионности, повторяемости) в относительных единицах.

6.1.13.3 При построении контрольной карты расчет значений средней линии, пределов предупреждения, пределов действия, результатов контрольных процедур осуществляют: при контроле повторяемости и внутрилабораторной прецизионности — в соответствии с таблицей 6 (графа 4); при контроле точности — в соответствии с таблицей 7 (графа 4).

6.1.14 Примеры построения контрольных карт Шухарта приведены в приложении Д.

6.1.15 Динамику изменения стабильности процесса анализа отслеживают на основе регулярного анализа данных контрольных карт Шухарта в соответствии с 6.3.4.

Интерпретация результатов анализа данных контрольных карт является основанием для проведения (при необходимости) корректирующих и/или предупреждающих действий с целью обеспечения стабильности процесса анализа рабочих проб.

6.2 Алгоритмы проведения контрольных процедур, используемых при построении контрольных карт

6.2.1 Алгоритм проведения контрольной процедуры для контроля повторяемости

6.2.1.1 Контрольные процедуры для контроля повторяемости осуществляют с использованием рабочих проб или ОК.

6.2.1.2 При реализации контрольной процедуры проводят в соответствии с НД на методику анализа n контрольных определений, необходимых для получения результата контрольного измерения. Если методикой анализа не предусмотрены параллельные определения, для формирования контрольной процедуры ограничиваются проведением в условиях повторяемости двух контрольных определений.

6.2.1.3 Результат контрольной процедуры rк в единицах измеряемых содержаний рассчитывают по формуле

, (31)

где () — наибольший (наименьший) результат из результатов контрольных определений, выполненных в условиях повторяемости.

Расчет результатов контрольных процедур при построении контрольной карты в приведенных величинах (в относительных величинах) выполняют в соответствии с таблицей 6, графа 3 (графа 4).

6.2.2 Алгоритм проведения контрольной процедуры для контроля внутрилабораторной прецизионности — в соответствии с 5.13.

Расчет результатов контрольных процедур при построении контрольной карты в единицах измеряемых содержаний (в приведенных величинах, в относительных величинах) выполняют в соответствии с таблицей 6 (графа 2, графа 3, графа 4 соответственно).

6.2.3 Алгоритмы проведения контрольных процедур для контроля точности — в соответствии с разделом 5.

Расчет результатов контрольных процедур при построении контрольной карты в единицах измеряемых содержаний (в приведенных величинах, в относительных величинах) выполняют в соответствии с таблицей 7 (графа 2, графа 3, графа 4 соответственно).

6.3 Контроль стабильности результатов анализа с использованием контрольных карт Шухарта

6.3.1 Контроль повторяемости

6.3.1.1 Для контроля повторяемости используют контрольную карту, на которой откладывают результаты контрольных процедур — расхождения результатов контрольных определений.

Примечания

1 Для диапазона (поддиапазона) с постоянным значением показателя повторяемости результатов анализа на контрольной карте в единицах измеряемых содержаний откладывают расхождения результатов контрольных определений проб, содержание определяемого компонента в которых соответствует этому диапазону (поддиапазону).

2 Если НД на методику анализа предусматривает параллельные определения для получения результата анализа, то контрольную карту для контроля повторяемости допустимо строить с использованием результатов контрольных определений, выполняемых для получения результатов контрольных измерений при контроле внутрилабораторной прецизионности с применением контрольной карты.

3 Если НД на методику анализа не предусматривает параллельные определения, контрольную карту строят с использованием результатов контрольных определений, выполняемых специально для целей контроля повторяемости.

6.3.1.2 Рассчитывают и откладывают на контрольной карте значения средней линии, предела предупреждения и предела действия (в соответствии с 6.1.11 для контрольных карт в единицах измеряемых содержаний, 6.1.12 — для контрольных карт в приведенных величинах, 6.1.13 — для контрольных карт в относительных величинах).

6.3.1.3 При заполнении контрольной карты по горизонтальной оси откладывают номер контрольной процедуры, соответствующий дате, исполнителю и другим факторам, характеризующим контрольную процедуру; по вертикальной оси — результаты контрольных процедур (расчет результатов контрольных процедур — в соответствии с 6.2.1).

6.3.1.4 Результаты контрольных определений, результаты контрольных процедур, выводы оперативного реагирования по результатам контроля вносят в таблицу. Рекомендуемая форма приведена в таблице 8.

Таблица 8

Данные для построения контрольной карты для контроля повторяемости

Пример построения контрольной карты в относительных величинах приведен в Д.2 приложения Д.

Примечание — В журналах контроля стабильности результатов анализа наряду с данными, отраженными в таблице 8, приводят информацию о шифре пробы, исполнителе, дате проведения анализа и другие данные, необходимые для идентификации контрольных измерений, а также проведенные корректирующие или предупреждающие действия либо ссылку на внутренний документ лаборатории, в котором эти действия отражены.

6.3.2 Контроль внутрилабораторной прецизионности

6.3.2.1 Для контроля внутрилабораторной прецизионности могут быть использованы карты двух видов:

1) карта, на которой откладывают результаты контрольных процедур для контроля внутрилабораторной прецизионности, получаемые для различных проб. Такие контрольные карты в единицах измеряемых содержаний или в относительных величинах строят для диапазона (поддиапазона) с постоянным значением показателя внутрилабораторной прецизионности результатов анализа в единицах измеряемых содержаний или в относительных единицах соответственно, при этом используют пробы, содержание определяемого компонента в которых соответствует этому диапазону (поддиапазону);

2) карта, на которой откладывают последовательно текущие расхождения результатов контрольных измерений <31> (предыдущего и последующего) одной и той же пробы, стабильной в течение временного диапазона, или ОК (, где — результаты контрольных измерений; L — число контрольных процедур). Результаты контрольных измерений получают в условиях внутрилабораторной прецизионности.

<31> Если результат контрольной процедуры — текущее расхождение результатов контрольных измерений и — превышает предел действия, то проводят корректирующие действия, расхождение результатов контрольных измерений и не рассчитывают, последующий результат контрольной процедуры формируют на основе результатов контрольных измерений и .

6.3.2.2 Рассчитывают и откладывают на контрольной карте каждого вида (первого или второго) значения средней линии, пределов предупреждения и действия (в соответствии с 6.1.11 для контрольных карт в единицах измеряемых содержаний, 6.1.12 — для контрольных карт в приведенных величинах, 6.1.13 — для контрольных карт в относительных величинах).

6.3.2.3 При заполнении контрольной карты по горизонтальной оси откладывают номер контрольной процедуры, соответствующий дате, исполнителю и другим факторам, характеризующим данную контрольную процедуру; по вертикальной оси — результаты контрольных процедур (расчет результатов контрольных процедур в соответствии с 6.2.2).

6.3.2.4 Результаты контрольных измерений, результаты контрольных процедур, выводы оперативного реагирования по результатам контроля вносят в таблицу по форме (рекомендуемой) таблицы 9 (при построении контрольной карты 1-го вида), таблицы 10 (при построении контрольной карты 2-го вида).

Таблица 9

Данные для построения контрольной карты для контроля внутрилабораторной прецизионности (при использовании различных проб)

Таблица 10

Данные для построения контрольной карты текущих расхождений для контроля внутрилабораторной прецизионности

Примеры построения контрольных карт 1-го вида приведены в примере 2 Д.2 приложения Д, 2-го вида — в примере 1 Д.2 приложения Д.

Примечание — В журналах контроля стабильности результатов анализа наряду с данными, отраженными в таблицах 9, 10, приводят информацию о шифре пробы, исполнителе, дате проведения анализа и другие данные, необходимые для идентификации контрольных измерений, а также проведенные корректирующие или предупреждающие действия либо ссылку на внутренний документ лаборатории, в котором эти действия отражены.

На основе результатов контрольных процедур (рассчитанных в единицах измеряемых содержаний), выполненных в течение временного диапазона при построении одной контрольной карты, может быть найдена точечная оценка показателя внутрилабораторной прецизионности по формуле <32>

<32> Для результатов контрольных процедур, рассчитанных как текущие расхождения результатов контрольных измерений, l = 2, …, L + 1.

или по формуле

где — расхождение результатов контрольных измерений одной пробы — результат контрольной процедуры в соответствии с 6.2.2;

L — число используемых контрольных процедур, достаточное для достоверной оценки показателя внутрилабораторной прецизионности.

Примечания

1 Если при построении контрольных карт применяют разные пробы, целесообразно использование формулы 32 (аналогично [3]), при применении одной пробы или одного ОК — формулы 33 (аналогично [5]).

2 Если результаты контрольных процедур были рассчитаны в относительных единицах, то точечная оценка показателя внутрилабораторной прецизионности в относительных единицах, %, может быть найдена по формуле

или по формуле

3 Оценка показателя внутрилабораторной прецизионности в виде показателя неопределенности может быть найдена в соответствии с приложением Л.

4 На основе результатов контрольных процедур, полученных при построении контрольных карт для контроля повторяемости, по аналогичным формулам могут быть рассчитаны точечные оценки показателя повторяемости результатов анализа.

6.3.2.5 Оцененное значение сравнивают с точечной оценкой показателя внутрилабораторной прецизионности .

Если , то для следующего временного диапазона может быть принято значение показателя внутрилабораторной прецизионности из диапазона от до . Границы регулирования для построения контрольных карт рассчитывают с использованием принятого значения.

Если , анализируют процесс измерений с учетом результатов контроля точности по 6.3.3 и принимают решение на основе рекомендаций 6.3.3.5 — 6.3.3.13.

6.3.3 Контроль точности

6.3.3.1 Для контроля точности используют контрольную карту, на которой откладывают результаты контрольных процедур в соответствии с выбранным алгоритмом КПКТ.

При выборе КПКТ с применением ОК допустимо в качестве средства контроля использовать контрольную пробу. В этом случае построению контрольной карты с применением контрольной пробы предшествует специальный эксперимент, предусматривающий одновременное проведение контрольных измерений ОК и контрольной пробы, что позволяет оценить наличие систематического смещения в результатах анализа контрольной пробы. Соответствующий алгоритм контроля приведен в 6.3.5.

Примечания

1 При построении контрольной карты для диапазона (поддиапазона) с постоянным значением показателя точности результатов анализа используют ОК или рабочие пробы, содержание определяемого компонента в которых соответствует этому диапазону (поддиапазону).

2 При построении контрольной карты для поддиапазона (диапазона) с постоянным значением показателя точности результатов анализа в единицах измеряемых содержаний (в относительных единицах) и при формировании контрольных процедур с применением контрольной методики анализа используют рабочие пробы, содержание определяемого компонента в которых соответствует поддиапазону (диапазону) с постоянным значением показателя точности результатов анализа в единицах измеряемых содержаний (в относительных единицах) как для контролируемой, так и для контрольной методик.

6.3.3.2 Для построения контрольной карты в зависимости от используемого алгоритма КПКТ рассчитывают (в соответствии с 6.1.11 для контрольных карт в единицах измеряемых содержаний, 6.1.12 — для контрольных карт в приведенных величинах, 6.1.13 — для контрольных карт в относительных величинах) и откладывают на контрольной карте значения средней линии, пределов предупреждения и действия.

6.3.3.3 При заполнении контрольной карты по горизонтальной оси откладывают номер контрольной процедуры, соответствующий дате, исполнителю и другим факторам, характеризующим контрольную процедуру; по вертикальной оси — результаты контрольных процедур (расчет результатов контрольных процедур в соответствии с 6.2.3).

6.3.3.4 Результаты контрольных измерений, результаты контрольных процедур, выводы оперативного реагирования на результаты контроля вносят в таблицу. Рекомендуемая форма таблицы при использовании алгоритма контроля с применением ОК приведена в таблице 11 (при построении контрольной карты в единицах измеряемых содержаний) и в таблице 12 (при построении контрольной карты в приведенных величинах или в относительных величинах), с применением метода добавок — в таблице 13 (при построении контрольной карты в единицах измеряемых содержаний) и таблице 14 (при построении контрольной карты в приведенных величинах или в относительных величинах). При использовании других алгоритмов контроля данные для построения контрольной карты оформляют (используя таблицу 7) аналогично.

Примеры построения контрольных карт с использованием алгоритма контроля с применением ОК (при построении контрольной карты в относительных единицах) и метода добавок (при построении контрольной карты в единицах измеряемых содержаний) приведены в приложении Д.

Примечание — В журналах контроля стабильности результатов анализа наряду с данными, отраженными в таблицах 11 — 14, приводят информацию о шифре пробы, исполнителе, дате проведения анализа и другие данные, необходимые для идентификации контрольных измерений, а также проведенные корректирующие или предупреждающие действия либо ссылку на внутренний документ лаборатории, в котором эти действия отражены.

Таблица 11

Данные для построения контрольной карты для контроля точности результатов анализа с использованием ОК (при построении контрольной карты в единицах измеряемых содержаний)

Таблица 12

Данные для построения контрольной карты для контроля точности результатов анализа с использованием ОК (при построении контрольной карты в приведенных величинах или в относительных величинах)

Таблица 13

Данные для построения контрольной карты для контроля точности результатов анализа с применением метода добавок (при построении контрольной карты в единицах измеряемых содержаний)

Таблица 14

Данные для построения контрольной карты для контроля точности результатов анализа с применением метода добавок (при построении контрольной карты в приведенных величинах или в относительных величинах)

6.3.3.5 На основе результатов контрольных процедур, рассчитанных в единицах измеряемых содержаний или в относительных единицах и полученных в течение временного диапазона при построении одной контрольной карты, находят (при необходимости) в соответствии с 6.3.3.6 — 6.6.3.9 интервальную оценку показателя правильности результатов анализа (в единицах измеряемых содержаний) или (в относительных единицах).

Официальный источник электронного документа содержит неточность: имеется в виду пункт 6.3.3.9.

Примечание — Оценка показателя правильности результатов анализа в виде показателя неопределенности может быть найдена в соответствии с приложением Л.

6.3.3.6 Рассчитывают оценку смещения и точечную оценку показателя правильности результатов анализа по формулам:

где — результат контрольной процедуры в соответствии с 6.2.3 в зависимости от выбранного алгоритма реализации контрольной процедуры;

L — число используемых контрольных процедур, достаточное для достоверной оценки показателя правильности результатов анализа.

Примечание — Оценку смещения и точечную оценку показателя правильности результатов анализа в относительных единицах, %, рассчитывают по формулам:

где — результат контрольной процедуры в относительных величинах.

6.3.3.7 Рассчитывают значение критерия Стьюдента t

. (40)

Полученное значение t сравнивают с при числе степеней свободы f = L — 1 для доверительной вероятности P = 0,95. Значения указаны в таблице Г.2 приложения Г.

Примечание — Если оценка смещения и точечная оценка показателя правильности результатов анализа рассчитаны в относительных единицах, то значение t рассчитывают по формуле

. (41)

6.3.3.8 Если t <= , то смещение незначимо на фоне случайного разброса, и в этом случае его принимают равным нулю.

6.3.3.9 Интервальную оценку показателя правильности результатов анализа определяют по формуле

. (42)

или по формуле

. (43)

Примечание — Интервальную оценку показателя правильности результатов анализа в относительных единицах, %, определяют по формуле

(44)

или по формуле

. (45)

6.3.3.10 На основе определенных (в соответствии с 6.3.2.5 и 6.3.3.6 — 6.3.3.9) по результатам контрольных процедур за временной диапазон оценок показателей внутрилабораторной прецизионности и правильности результатов анализа устанавливают оценку показателя точности результатов анализа по формуле

.(46)

В том случае, если t > , оценка показателя точности результатов анализа может быть установлена аналогично РМГ 61, 5.4.

Примечания

1 Оценку показателя точности результатов анализа в относительных единицах рассчитывают по формуле

. (47)

В том случае, если t > , оценка показателя точности результатов анализа может быть установлена аналогично РМГ 61, 5.4.

2 Если , то принимают равной (аналогично, если , то принимают равной ).

3 Если показатели качества результатов анализа установлены в виде расширенной неопределенности и ее составляющих, то значения могут быть установлены в соответствии с приложением Л.

6.3.3.11 Полученную интервальную оценку показателя точности результатов анализа сравнивают с ранее принятым значением интервальной оценки показателя точности результатов анализа .

Если удовлетворяет условию , то для следующего временного диапазона может быть принято значение показателя точности результатов анализа из диапазона от до . Границы регулирования для построения контрольных карт рассчитывают с использованием принятого значения.

Если удовлетворяет условию

, (48)

где — интервальная оценка показателя точности методики анализа,

— интервальная оценка показателя точности результатов анализа, установленная согласно 4.5.3 на основе показателя точности методики анализа, то для следующего временного диапазона устанавливают интервальную оценку показателя точности из диапазона от до .

Примечания

1 Если интервальная оценка показателя точности результатов анализа была установлена в относительных единицах, %, то в соответствии с настоящим пунктом и 6.3.3.13 ее сравнивают со значениями интервальных оценок показателя точности результатов анализа и показателя точности методики анализа в относительных единицах, %.

2 Если показатель точности результатов анализа установлен в виде расширенной неопределенности, то его значение сравнивают со значениями интервальных оценок показателя точности результатов анализа и показателя точности методики анализа U в соответствии с приложением Л.

6.3.3.12 Установленное значение показателя точности результатов анализа и соответствующих ему показателей внутрилабораторной прецизионности и правильности результатов анализа оформляют протоколом по А.5 или А.6 приложения А.

6.3.3.13 Если удовлетворяет условию

, (49)

где — значение интервальной оценки показателя точности результатов анализа, экспериментально установленное в лаборатории, то процесс анализа приостанавливают <33>, выясняют причины сложившейся ситуации и осуществляют корректирующие действия.

<33> Если , процесс анализа допустимо не приостанавливать. В этом случае необходимо выяснить причины сложившейся ситуации и принять решение о значении показателя точности результатов анализа для следующего временного диапазона.

6.3.4 Анализ данных контрольных карт и их интерпретация

6.3.4.1 С целью отследить динамику изменения стабильности процесса анализа проводят регулярный анализ контрольных карт в течение временного диапазона и их интерпретацию.

6.3.4.2 В случае контрольных карт для контроля повторяемости или внутрилабораторной прецизионности сигналом к возможному нарушению стабильности процесса анализа служит появление на контрольной карте следующих ситуаций:

1) одна точка вышла за предел действия;

2) девять точек подряд находятся выше средней линии;

3) шесть возрастающих точек подряд <34>;

<34> При построении контрольной карты с использованием одного и того же ОК (пробы).

4) две из трех последовательных точек находятся выше предела предупреждения;

5) четыре из пяти последовательных точек находятся выше половинной границы зоны предупреждения (т.е. четыре из пяти последовательных результатов контрольных процедур превышают значение при контроле повторяемости, значение — при контроле внутрилабораторной прецизионности).

Примечание — Допускается использовать другие тревожные ситуации в качестве сигналов к возможному нарушению стабильности процесса анализа. Например, тревожной ситуацией могут быть четыре одинаковых точки подряд, которые могут быть результатом организационных (грубое округление результатов измерений), а не статистических проблем.

6.3.4.3 В случае контрольных карт для контроля точности сигналом к возможному нарушению стабильности процесса анализа служит появление на контрольной карте следующих ситуаций:

1) одна точка вышла за пределы действия;

2) девять точек подряд находятся по одну сторону от средней линии;

3) шесть возрастающих или убывающих точек подряд;

4) две из трех последовательных точек вышли за пределы предупреждения;

5) четыре из пяти последовательных точек вышли за половинные границы верхней или нижней зоны предупреждения (т.е. значения четырех из пяти последовательных результатов контрольных процедур больше или меньше );

6) восемь последовательных точек находятся по обеим сторонам средней линии, и все эти точки вышли за половинные границы зоны предупреждения (т.е. модуль значений восьми последовательных результатов контрольных процедур превышает значение ).

Примечание — Допускается использовать другие тревожные ситуации в качестве сигналов к возможному нарушению стабильности процесса анализа.

6.3.4.4 При появлении одной из перечисленных в 6.3.4.2 или 6.3.4.3 ситуаций необходимо выяснить причины возникшей ситуации, приостановить процесс анализа (при необходимости) и провести корректирующие или предупреждающие действия.

6.3.5 Контроль точности с использованием контрольных карт на основе применения контрольных проб

6.3.5.1 Для проведения контроля используют ОК (требования к ОК — по 5.5.1.1) и контрольную пробу, близкие по составу и адекватные анализируемым пробам.

6.3.5.2 Определяют число результатов анализа L, необходимых для достоверной оценки показателя правильности результатов анализа (в соответствии с 6.1.3 и приложениями К, Л).

6.3.5.3 Получают в условиях внутрилабораторной прецизионности L результатов контрольных измерений одновременно анализируемых контрольной пробы и ОК.

6.3.5.4 На основе полученных результатов контрольных измерений ОК находят оценку показателя правильности результатов анализа для доверительной вероятности P = 0,95: , используя алгоритм по Б.3.2 приложения Б, — если показатели качества результатов анализа представлены в виде характеристики погрешности и ее составляющих, или , используя алгоритмы по РМГ 61 с учетом приложения Б, — если показатели качества результатов анализа представлены в виде расширенной неопределенности и ее составляющих.

6.3.5.5 На основе результатов контрольных измерений контрольной пробы рассчитывают среднее арифметическое значение результатов контрольных измерений

(50)

и точечную оценку показателя внутрилабораторной прецизионности по формуле

если показатели качества результатов анализа представлены в виде характеристики погрешности и ее составляющих, или , используя алгоритмы по РМГ 61 с учетом приложения Б, если показатели качества результатов анализа представлены в виде расширенной неопределенности и ее составляющих.

6.3.5.6 Используя оценку показателя правильности результатов анализа по 6.3.5.4 и оценку показателя внутрилабораторной прецизионности по 6.3.5.5, находят оценку показателя точности результатов анализа по формуле

(52)

— если показатели качества результатов анализа представлены в виде характеристики погрешности и ее составляющих, или , используя алгоритмы по РМГ 61 с учетом приложения Б, — если показатели качества результатов анализа представлены в виде расширенной неопределенности и ее составляющих.

Примечание — Если , то принимают равной .

6.3.5.7 Полученную оценку показателя точности результатов анализа сравнивают с показателем точности методики анализа.

6.3.5.8 Если оценка показателя точности результатов анализа больше показателя точности методики анализа, то делают вывод о нестабильности процесса анализа в лаборатории, определяют и реализуют мероприятия по проверке соблюдения процедуры анализа.

6.3.5.9 Если оценка показателя точности результатов анализа не превышает показатель точности методики анализа, то:

— интервальную оценку показателя точности результатов анализа устанавливают равным ;

— установленное значение показателя точности результатов анализа и соответствующих ему показателей внутрилабораторной прецизионности и правильности результатов анализа оформляют протоколом по А.5 или А.6 приложения А;

— контрольную карту строят с применением контрольной пробы.

6.3.5.10 Построение контрольной карты для контроля точности с применением контрольной пробы проводят в соответствии с 6.3.5.11 — 6.3.5.16.

6.3.5.11 Рассчитывают значение средней линии, верхние и нижние значения пределов предупреждения и действия по формулам:

, (53)

, (54)

, (55)

, (56)

. (57)

Полученные значения откладывают на контрольной карте.

6.3.5.12 Получают в порядке, определенном в лаборатории, результаты контрольных измерений контрольной пробы и рассчитывают результаты контрольных процедур по формуле

. (58)

6.3.5.13 При заполнении контрольной карты по горизонтальной оси откладывают номер контрольной процедуры, соответствующий дате, исполнителю и другим факторам, характеризующим контрольную процедуру. По вертикальной оси откладывают результаты контрольных процедур.

6.3.5.14 Результаты контрольных определений, результаты контрольных процедур, выводы оперативного реагирования по результатам контроля вносят в таблицу. Форма таблицы аналогична приведенной в таблице 11.

6.3.5.15 Анализ контрольных карт проводят в соответствии с 6.3.4.

6.3.5.16 Положительные результаты контроля позволяют результатам анализа рабочих проб приписывать установленное по 6.3.5.9 значение показателя точности результатов анализа.

6.3.5.17 Использование для построения контрольной карты другой контрольной пробы предполагает повторное проведение процедуры, описанной в 6.3.5.1 — 6.3.5.9. При этом вновь полученную оценку показателя точности результатов анализа сопоставляют с ранее установленным значением показателя точности результатов анализа.

7. Контроль стабильности результатов анализа в форме периодической проверки подконтрольности процедуры выполнения анализа

7.1 Периодическая проверка подконтрольности процедуры выполнения анализа предусматривает проверку соответствия статистических оценок показателей внутрилабораторной прецизионности и правильности результатов анализа, полученных на основе оценки качества ограниченной совокупности результатов контрольных измерений, значениям показателей качества результатов анализа, установленным при реализации методики в лаборатории.

Примечание — Периодической проверке подконтрольности процедуры выполнения анализа должно предшествовать установление в лаборатории фактических значений показателей качества результатов анализа (например, в соответствии с приложением Б).

7.2 При реализации контроля данной формы устанавливают контролируемый период, в течение которого проводят проверку подконтрольности процедуры выполнения анализа.

7.3 Периодическую проверку подконтрольности процедуры выполнения анализа проводят на основе специально планируемого эксперимента.

7.4 В зависимости от специфики анализа, наличия средств контроля специально планируемый эксперимент может быть организован с применением ОК, метода добавок совместно с методом разбавления пробы, метода добавок, метода разбавления пробы, метода варьирования навески, контрольной методики анализа.

Примечание — В настоящих рекомендациях рассмотрены эксперименты с применением ОК, метода добавок (для случая применения одной пробы или нескольких проб), метода разбавления пробы (для случая применения нескольких проб).

7.5 Периодическая проверка подконтрольности процедуры выполнения анализа с применением ОК

7.5.1 Выбирают ОК, соответствующий требованиям 5.5.1.1.

7.5.2 Получают случайным образом в течение контролируемого периода L результатов контрольных измерений <35> OK (L >= 5).

<35> За результат контрольного измерения принимают среднеарифметическое значение из результатов параллельных определений (выполняющих в данной ситуации роль контрольных определений) в том случае, если они предусмотрены НД на методику анализа и удовлетворяют требованиям контроля повторяемости по 5.11.

7.5.3 Рассчитывают среднеарифметическое значение результатов контрольных измерений , их СКО и оценку смещения (отклонение среднего значения от аттестованного значения C образца для контроля) по формулам:

где — l-й результат контрольного измерения содержания определяемого компонента в ОК, l = 1, …, L.

7.5.4 Рассчитывают норматив контроля внутрилабораторной прецизионности Квп для доверительной вероятности P = 0,95 по формуле

, (62)

где f = L — 1,

— коэффициент, учитывающий ограниченность выборки (см. таблицу 15);

— значение СКО (точечной оценки показателя) внутрилабораторной прецизионности, соответствующее содержанию компонента в ОК.

Таблица 15

Коэффициент, учитывающий ограниченность выборки <36>, для доверительной вероятности P = 0,95

<36> Установлен с применением распределения .

7.5.5 Рассчитывают норматив контроля правильности для доверительной вероятности P = 0,95 по формуле

где — квантиль t-распределения Стьюдента (см. таблицу Г.2 приложения Г);

— значение интервальной оценки показателя правильности результатов анализа, соответствующее содержанию компонента в ОК.

7.5.6 Стабильность процесса анализа признают удовлетворительной, если выполнены следующие условия:

. (64)

В противном случае стабильность процесса анализа подвергают сомнению, выясняют и устраняют причины неудовлетворительного воспроизведения процедуры выполнения анализа.

7.5.7 Форма регистрации результатов контроля при периодической проверке подконтрольности процедуры выполнения анализа с использованием ОК приведена в таблице М.1 приложения М.

7.6 Периодическая проверка подконтрольности процедуры выполнения анализа с применением метода добавок с использованием одной рабочей пробы

7.6.1 Эксперимент проводят при выполнении условий 5.7.1.1. Значение добавки должно соответствовать требованиям 5.7.1.2.

7.6.2 Получают случайным образом в течение контролируемого периода 2L результатов контрольных измерений <37>: по L результатов контрольных измерений пробы и пробы с добавкой определяемого компонента (L >= 5). Результаты контрольных измерений получают в условиях внутрилабораторной прецизионности.

<37> За результат контрольного измерения принимают среднеарифметическое значение из результатов параллельных определений (выполняющих в данной ситуации роль контрольных определений) в том случае, если они предусмотрены НД на методику анализа и удовлетворяют требованиям контроля повторяемости по 5.11.

7.6.3 Рассчитывают среднеарифметическое значение результатов контрольных измерений и содержания компонента в рабочей пробе и в пробе с добавкой соответственно, СКО результатов контрольных измерений содержания компонента в рабочей пробе , в пробе с добавкой и оценку смещения (значение разности между средним значением результатов контрольных измерений в пробе с добавкой, в пробе без добавки и значением добавки ) по формулам:

где — l-й результат контрольного измерения содержания определяемого компонента в рабочей пробе, l = 1, …, L;

— l-й результат контрольного измерения содержания определяемого компонента в пробе с добавкой, l = 1, …, L.

7.6.4 Рассчитывают нормативы контроля внутрилабораторной прецизионности при измерении содержания определяемого компонента в рабочей пробе и пробе с добавкой , для доверительной вероятности P = 0,95 по формулам:

, (70)

, (71)

где — значение СКО (точечной оценки показателя) внутрилабораторной прецизионности, соответствующее содержанию компонента в рабочей пробе;

— значение СКО (точечной оценки показателя) внутрилабораторной прецизионности, соответствующее содержанию компонента в пробе с добавкой;

— коэффициент, учитывающий ограниченность выборки (см. таблицу 15);

f — число степеней свободы, f = L — 1.

7.6.5 Рассчитывают норматив контроля правильности для доверительной вероятности P = 0,95 по формуле

, (72)

где t(f) — квантиль t-распределения Стьюдента (см. таблицу Г.2 приложения Г);

— значение интервальной оценки показателя правильности результатов анализа, соответствующее содержанию компонента в рабочей пробе (в пробе с добавкой).

7.6.6 Стабильность процесса анализа признают удовлетворительной, если выполнены следующие условия:

. (73), (74)

В противном случае стабильность процесса анализа подвергают сомнению, выясняют и устраняют причины неудовлетворительного воспроизведения процедуры выполнения анализа.

7.6.7 Форма регистрации результатов контроля при периодической проверке подконтрольности процедуры выполнения анализа с применением метода добавок (с использованием одной пробы) приведена в таблице М.2 приложения М.

7.7 Периодическая проверка подконтрольности процедуры выполнения анализа с применением метода добавок с использованием нескольких рабочих проб (если показатели качества результатов анализа заданы в единицах измеряемых содержаний)

7.7.1 Эксперимент проводят при нестабильности рабочих проб в течение контролируемого периода <38> и выполнении условий 5.7.1.1.

<38> При этом рабочие пробы должны быть стабильны на время проведения контрольных измерений.

7.7.2 При проведении эксперимента используют:

— рабочие пробы и пробы с добавкой, содержание определяемого компонента в которых соответствует диапазону (поддиапазону) с постоянным значением показателя точности результатов анализа;

— добавки, отвечающие требованиям 5.7.1.2 для каждой рабочей пробы.

7.7.3 Получают в условиях внутрилабораторной прецизионности для каждой l рабочей пробы три результата контрольных измерений <39> содержания определяемого компонента: два результата контрольных измерений рабочей пробы (основной и повторный ) и результат контрольного измерения рабочей пробы с внесенной добавкой .

<39> За результат контрольного измерения принимают среднеарифметическое значение из результатов параллельных определений (выполняющих в данной ситуации роль контрольных определений) в том случае, если они предусмотрены НД на методику анализа и удовлетворяют требованиям контроля повторяемости по 5.11.

Примечание — Повторный результат контрольного измерения рабочей пробы и результат контрольного измерения рабочей пробы с добавкой могут быть получены в условиях повторяемости.

7.7.4 Рассчитывают для каждой рабочей пробы результат контрольной процедуры для контроля внутрилабораторной прецизионности и результат контрольной процедуры для контроля погрешности по формулам:

; (75)

. (76)

7.7.5 Рассчитывают статистическую оценку СКО внутрилабораторной прецизионности , норматив контроля внутрилабораторной прецизионности , статистические оценки смещения и точечной оценки показателя правильности результатов анализа , норматив контроля величины точечной оценки показателя правильности результатов анализа , норматив контроля правильности КП по формулам:

где — коэффициент, учитывающий ограниченность выборки, для числа степеней свободы f (f = L при расчете , f = L — 1 при расчете ), указан в таблице 15;

— СКО (точечная оценка показателя) внутрилабораторной прецизионности, соответствующее содержанию компонента в анализируемых пробах;

— квантиль t-распределения Стьюдента для числа степеней свободы f = L — 1 (см. таблицу Г.2 приложения Г);

— значение интервальной оценки показателя правильности результатов анализа, соответствующее содержанию компонента в анализируемых пробах .

7.7.6 Стабильность процесса анализа признают удовлетворительной, если выполнены следующие условия:

. (83), (84)

В противном случае стабильность процесса анализа подвергают сомнению, выясняют и устраняют причины неудовлетворительного воспроизведения процедуры выполнения анализа.

7.7.7 Форма регистрации результатов контроля при периодической проверке подконтрольности процедуры выполнения анализа с применением метода добавок (с использованием нескольких рабочих проб) приведена в таблице М.3 приложения М.

7.8 Периодическая проверка подконтрольности процедуры выполнения анализа с применением метода добавок с использованием нескольких рабочих проб (если показатели качества результатов анализа заданы в относительных единицах для всего диапазона измерений)

7.8.1 Эксперимент проводят при нестабильности рабочих проб в течение контролируемого периода <40> и выполнении условий 5.7.1.1.

<40> При этом рабочие пробы должны быть стабильны на время проведения контрольных измерений.

7.8.2 При проведении эксперимента используют добавки, отвечающие требованиям 5.7.1.2 и 7.7.2 для каждой пробы.

7.8.3 Получают в условиях внутрилабораторной прецизионности для каждой l рабочей пробы три результата контрольных измерений <41> содержания определяемого компонента: два результата контрольных измерений рабочей пробы (основной и повторный ) и результат контрольного измерения рабочей пробы с внесенной добавкой .

<41> За результат контрольного измерения принимают среднеарифметическое значение из результатов параллельных определений (выполняющих в данной ситуации роль контрольных определений) в том случае, если они предусмотрены НД на методику анализа и удовлетворяют требованиям контроля повторяемости по 5.11.

Примечание — Повторный результат контрольного измерения рабочей пробы и результат контрольного измерения рабочей пробы с добавкой могут быть получены в условиях повторяемости.

7.8.4 Рассчитывают для каждой рабочей пробы результаты контрольных процедур в относительных единицах: для контроля внутрилабораторной прецизионности — и для контроля погрешности — по формулам:

, (85)

. (86)

7.8.5 Рассчитывают статистическую оценку СКО внутрилабораторной прецизионности норматив контроля внутрилабораторной прецизионности , статистические оценки смещения и точечной оценки показателя правильности результатов анализа , норматив контроля величины точечной оценки показателя правильности результатов анализа , норматив контроля правильности КП,о по формулам:

где — коэффициент, учитывающий ограниченность выборки, для числа степеней свободы f (f = L при расчете , f = L — 1 при расчете ), приведен в таблице 15;

— СКО (точечная оценка показателя) внутрилабораторной прецизионности в относительных единицах, %;

— квантиль t-распределения Стьюдента для числа степеней свободы f = L — 1 (см. таблицу Г.2 приложения Г);

— значение интервальной оценки показателя правильности результатов анализа в относительных единицах, % .

7.8.6 Стабильность процесса анализа признают удовлетворительной, если выполнены следующие условия:

. (93), (94), (95)

В противном случае стабильность процесса анализа подвергают сомнению, выясняют и устраняют причины неудовлетворительного воспроизведения процедуры выполнения анализа.

7.8.7 Форма регистрации результатов контроля при периодической проверке подконтрольности процедуры выполнения анализа с применением метода добавок (с использованием нескольких рабочих проб) в том случае если показатели качества результатов анализа заданы в относительных единицах для всего диапазона измерений, аналогична приведенной в таблице М.3 приложения М.

7.9 Периодическая проверка подконтрольности процедуры выполнения анализа с применением метода разбавления с использованием нескольких рабочих проб

7.9.1 Эксперимент проводят при нестабильности рабочих проб в течение контролируемого периода <42> и выполнении условий 5.8.1.1.

<42> При этом рабочие пробы должны быть стабильны на время проведения контрольных измерений.

7.9.2 При проведении эксперимента используют рабочие пробы и разбавленные рабочие пробы, содержание определяемого компонента в которых соответствует диапазону (поддиапазону) с постоянным значением показателя точности результатов анализа (в единицах измеряемых содержаний или в относительных единицах).

7.9.3 Значение коэффициента разбавления для каждой рабочей пробы должно удовлетворять требованиям 5.8.1.2 для каждой пробы.

7.9.4 Получают в условиях внутрилабораторной прецизионности для каждой l рабочей пробы три результата контрольных измерений <43> содержания определяемого компонента: два результата контрольных измерений рабочей пробы (основной и повторный ) и результат контрольного измерения разбавленной рабочей пробы .

<43> За результат контрольного измерения принимают среднеарифметическое значение результатов параллельных определений (выполняющих в данной ситуации роль контрольных определений) в том случае, если они предусмотрены НД на методику анализа и удовлетворяют требованиям контроля повторяемости по 5.11.

Примечание — Повторный результат контрольного измерения рабочей пробы и результат контрольного измерения разбавленной рабочей пробы могут быть получены в условиях повторяемости.

7.9.5 Рассчитывают для каждой рабочей пробы результат контрольной процедуры для контроля внутрилабораторной прецизионности и результат контрольной процедуры для контроля точности по формулам:

; (96)

(97)

— если показатель точности постоянен в единицах измеряемых содержаний;

или по формулам:

, (98)

, (99)

где — если показатель точности постоянен в относительных единицах.

7.9.6 Рассчитывают статистическую оценку СКО внутрилабораторной прецизионности ( или ), норматив контроля внутрилабораторной прецизионности ( или ), статистические оценки смещения ( или ) и точечной оценки показателя правильности результатов анализа ( или ), норматив контроля величины точечной оценки показателя правильности результатов анализа ( или ), норматив контроля правильности ( или ) (если показатель точности задан в единицах измеряемых содержаний или в относительных единицах соответственно).

7.9.6.1 Если значения показателя точности заданы в единицах измеряемых содержаний, используют следующие формулы:

где — коэффициент, учитывающий ограниченность выборки, для числа степеней свободы f (f = L при расчете , f = L — 1 при расчете ), указан в таблице 15;

— СКО (точечная оценка показателя) внутрилабораторной прецизионности, соответствующее содержанию компонента в анализируемых пробах;

— квантиль t-распределения Стьюдента для числа степеней свободы f = L — 1 (см. таблицу Г.2 приложения Г);

— значение интервальной оценки показателя правильности результатов анализа, соответствующее содержанию компонента в анализируемых пробах ;

— значение точечной оценки показателя правильности результатов анализа, соответствующее содержанию компонента в анализируемых пробах.

7.9.6.2 Если значения показателя точности заданы в относительных единицах используют следующие формулы:

где — СКО (точечная оценка показателя) внутрилабораторной прецизионности в относительных единицах, %;

— значение интервальной оценки показателя правильности результатов анализа в относительных единицах, % ;

— значение точечной оценки показателя правильности результатов анализа в относительных единицах.

7.9.7 Стабильность процесса анализа признают удовлетворительной, если выполнены следующие условия:

, (112)

(113)

и , (114)

— в том случае, когда показатель точности задан в единицах измеряемых содержаний;

, (115)

(116)

и , (117)

— в том случае, когда показатель точности задан в относительных единицах.

В противном случае стабильность процесса анализа подвергают сомнению, выясняют и устраняют причины неудовлетворительного воспроизведения процедуры выполнения анализа.

7.9.8 Форма регистрации результатов контроля (если показатели качества результатов анализа заданы в единицах измеряемых содержаний) приведена в таблице М.4 приложения М.

7.10 Фактически обеспечиваемые в лаборатории значения показателей качества результатов анализа могут быть определены (уточнены) на основе объединения данных ряда экспериментов, проводимых при периодической проверке подконтрольности процедуры выполнения анализа.

С этой целью формируют контрольные процедуры (для контроля внутрилабораторной прецизионности и для контроля точности) и рассчитывают их результаты на основе результатов контрольных измерений, полученных в экспериментах с использованием ОК или рабочих проб, содержание определяемого компонента в которых соответствует диапазону (поддиапазону) с постоянным значением показателей качества результатов анализа в единицах измеряемых содержаний или в относительных единицах. Число контрольных процедур, необходимое для достоверной оценки показателей качества результатов анализа (внутрилабораторной прецизионности, точности), определяют в соответствии с приложениями И, К. Расчет оценок показателей качества результатов анализа проводят в соответствии с 6.3.2.5, 6.3.3.5 — 6.3.3.10 или в соответствии с приложением Л.

Если , то полученное значение (, , соответственно) может быть принято в качестве показателя точности результатов анализа для его последующего использования. Установленное значение показателя точности результатов анализа и соответствующих ему показателей внутрилабораторной прецизионности и правильности результатов анализа оформляют протоколом по А.5 или по А.6 приложения А.

Если > или > или > U или > (что может быть следствием незначительного числа контрольных измерений при проведении отдельных экспериментов по проверке подконтрольности процедуры выполнения анализа), то определяют и реализуют мероприятия по проверке соблюдения процедуры анализа и принимают (при необходимости) решение об увеличении числа контрольных измерений при проведении последующей периодической проверки подконтрольности процедуры выполнения анализа.

8. Контроль стабильности результатов анализа в форме выборочного статистического контроля внутрилабораторной прецизионности и точности результатов анализа

8.1 Контроль стабильности результатов анализа с применением алгоритмов ВСК по альтернативному признаку позволяет осуществлять контроль точности и внутрилабораторной прецизионности результатов анализа.

8.2 При организации ВСК в зависимости от специфики анализа, наличия средств контроля выбирают алгоритмы получения результатов контрольных процедур (по 5.5 — 5.10, 5.12).

8.3 При проведении ВСК используют одноступенчатый корректируемый план статистического контроля по альтернативному признаку для приемлемого уровня качества 10% или 6,5% по [12].

Примечания

1 Под приемлемым уровнем качества понимают максимальную долю дефектных результатов анализа (результатов анализа с точностью, не соответствующей установленным требованиям) в контролируемой партии рабочих проб, при которой стабильность результатов анализа не может быть подвергнута сомнению.

2 При анализе состава проб объектов окружающей среды целесообразно использовать план статистического контроля для приемлемого уровня качества 10%, при анализе проб промышленного производства — 6,5%.

8.4 Параметрами одноступенчатого плана ВСК по альтернативному признаку являются:

— контролируемый период;

— объем контролируемой совокупности результатов анализа рабочих проб (объем партии — N);

— число контрольных процедур (объем контрольной выборки — nв), необходимых для оценки качества результатов анализа партии рабочих проб, выполняемых в течение контролируемого периода;

— нормативы ВСК — приемочные и браковочные числа.

8.5 Приемочное число является критерием для признания результатов ВСК удовлетворительными. Под приемочным числом понимают число, равное допустимому числу дефектных результатов контрольных процедур в выборке nв, при этом результат контрольной процедуры считают дефектным, если он превышает установленный для него норматив контроля.

Браковочное число является критерием для признания результатов ВСК неудовлетворительными (как правило, = + 1).

8.6 Критерии определения объема контрольной выборки и значения приемочных и браковочных чисел в зависимости от объема партии и уровня контроля качества (нормальный, усиленный, ослабленный контроль) приведены в таблице 16 для приемлемого уровня качества 10% и в таблице 17 для приемлемого уровня качества 6,5%.

Таблица 16

Критерии определения объема выборки и значения приемочного и браковочного чисел для приемлемого уровня качества 10% (в соответствии с [12])

Таблица 17

Критерии определения объема выборки и значения приемочного числа для приемлемого уровня качества 6,5% (в соответствии с [12])

8.7 Для реализации алгоритма контроля проводят контрольные измерения <44> для получения результатов контрольных процедур, распределяя их по таблице случайных чисел или другим случайным образом среди рядовых анализов рабочих проб.

<44> За результат контрольного измерения принимают среднеарифметическое значение результатов параллельных определений (выполняющих в данной ситуации роль контрольных определений) в том случае, если они предусмотрены НД на методику анализа и удовлетворяют требованиям контроля повторяемости по 5.11.

Примечание — Результаты контрольных измерений и результаты контрольных процедур для контроля точности и для контроля внутрилабораторной прецизионности получают независимо друг от друга.

8.8 Результаты контрольных процедур и значения нормативов контроля К при контроле точности рассчитывают в соответствии с выбранным алгоритмом получения результата контрольной процедуры по 5.5 — 5.10. Результаты контрольных процедур и значения нормативов контроля при контроле внутрилабораторной прецизионности рассчитывают в соответствии с 5.13.

8.9 Подсчитывают в выборке nв число d дефектных результатов контрольных процедур, т.е. результатов, для которых результат контрольной процедуры ( или ) выходит за нормативы контроля (К или ):

|| > К — при контроле точности результатов анализа;

> — при контроле внутрилабораторной прецизионности.

8.10 Полученное значение d сравнивают с приемочным числом Ac.

Если d <= , то внутрилабораторную прецизионность (при контроле внутрилабораторной прецизионности) или точность результатов анализа (при контроле точности) партии рабочих проб, полученных в течение контролируемого периода, считают удовлетворительной.

Если d >= , то внутрилабораторную прецизионность или точность результатов анализа признают неудовлетворительной.

В том случае, если внутрилабораторная прецизионность и/или точность результатов анализа признана неудовлетворительной, проведение анализа приостанавливают, выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля, и принимают меры по их устранению.

После выяснения и устранения возможных причин неудовлетворительной внутрилабораторной прецизионности или точности результатов анализа следует проверить выполнение условий переключения по 8.11.3.1 (при нормальном контроле) или по 8.11.3.4 (при ослабленном контроле), в случае необходимости осуществить соответствующее переключение.

Примечания

1 Если возможно, после выяснения и устранения причин неудовлетворительных результатов контроля может быть проведен повторный анализ партии рабочих проб (с получением того же числа результатов контрольных измерений), после чего повторена процедура контроля.

2 В некоторых случаях результаты измерений партии рабочих проб выдают заказчику или иному заинтересованному субъекту только после получения положительных результатов выборочного статистического контроля.

8.11 Нормальный, усиленный и ослабленный контроль

8.11.1 На стадии внедрения в лаборатории ВСК используют нормальный уровень контроля качества (нормальный контроль).

Примечание — При освоении новых методик анализа (разработке новых НД на методики анализа) может быть целесообразным применение усиленного контроля.

8.11.2 Нормальный, усиленный, ослабленный контроль продолжают без изменения до тех пор, пока не будет выполнено одно из условий переключения (с нормального контроля — на ослабленный либо усиленный, с ослабленного либо усиленного контроля — на нормальный) по 8.11.3.1 — 8.11.3.4. Процедуры переключения применяют отдельно для контроля внутрилабораторной прецизионности и для контроля точности.

8.11.3 Процедуры и условия переключений (см. рисунок 1)

Рисунок 1 — Схема процедур и условий переключения по 8.11.3

8.11.3.1 Переключение с нормального на усиленный контроль

Нормальный контроль переключают на усиленный контроль в том случае, если признана неудовлетворительной внутрилабораторная прецизионность или точность для двух из пяти (или менее) последовательных партий результатов анализа.

8.11.3.2 Переключение с усиленного на нормальный контроль

Усиленный контроль переключают на нормальный контроль в том случае, если признана удовлетворительной внутрилабораторная прецизионность или точность результатов анализа в течение пяти последовательных контролируемых периодов подряд (для пяти последовательных партий результатов анализа).

8.11.3.3 Переключение с нормального на ослабленный контроль

Нормальный контроль допустимо переключить на ослабленный контроль в том случае, если одновременно выполнены два условия:

— признана удовлетворительной внутрилабораторная прецизионность или точность результатов анализа в течение десяти последовательных контролируемых периодов подряд (десяти последовательных партий результатов анализа);

— суммарное количество дефектных результатов контрольных процедур в десяти выборках, соответствующих этим партиям, не превосходит соответствующего предельного числа, указанного в таблице 18.

Таблица 18

Предельные числа дефектных результатов контрольных процедур для перехода к ослабленному контролю

8.11.3.4 Переключение с ослабленного на нормальный контроль

Ослабленный контроль переключают на нормальный контроль в том случае, если число дефектных результатов контрольных процедур окажется больше приемочного числа, но меньше браковочного.

8.12 Схема реализации ВСК внутрилабораторной прецизионности (точности результатов анализа) для одной последовательной партии результатов анализа показана на рисунке 2.

Рисунок 2 — Схема реализации ВСК внутрилабораторной прецизионности (точности) результатов анализа по альтернативному признаку для одной последовательной партии результатов анализа

8.13 Форма регистрации результатов ВСК внутрилабораторной прецизионности приведена в приложении Н. Результаты ВСК точности результатов анализа регистрируют аналогично.

8.14 Если при проведении ВСК используемые при расчете нормативов контроля (для выявления дефектных результатов контрольных процедур) показатели качества результатов анализа установлены также расчетным путем, то фактически обеспечиваемые в лаборатории значения этих показателей могут быть установлены на основе результатов контрольных процедур <1> ( — для внутрилабораторной прецизионности, — для точности), полученных при реализации ВСК с использованием ОК или рабочих проб, содержание определяемого компонента в которых соответствует диапазону (поддиапазону) с постоянным значением показателей качества результатов анализа <2>. Число контрольных процедур, необходимое для достоверной оценки показателей качества результатов анализа (внутрилабораторной прецизионности, точности), определяют в соответствии с приложениями И, К. Расчет оценок показателей качества результатов анализа проводят в соответствии с 6.3.2.5, 6.3.3.5 — 6.3.3.10 или в соответствии с приложением Л.

<45> Без учета дефектных результатов.

<46> Если показатели качества методики анализа постоянны в относительных единицах, то для оценивания показателей качества результатов анализа могут быть использованы результаты контрольных процедур в относительных величинах.

Если , то полученное значение принимают в качестве показателя точности результатов анализа для его последующего использования. Установленное значение показателя точности результатов анализа и соответствующих ему показателей внутрилабораторной прецизионности и правильности результатов анализа оформляют протоколом по А.5 или по А.6 приложения А.

При последующем проведении ВСК установленные значения , (, ) используют при расчете нормативов контроля, соответствующих алгоритмам получения результатов контрольных процедур.

Приложение А
(рекомендуемое)

ОБЩИЕ ТРЕБОВАНИЯ К ОРГАНИЗАЦИИ ЭКСПЕРИМЕНТА ПО УСТАНОВЛЕНИЮ ПОКАЗАТЕЛЕЙ КАЧЕСТВА РЕЗУЛЬТАТОВ АНАЛИЗА ПРИ РЕАЛИЗАЦИИ МЕТОДИКИ АНАЛИЗА В КОНКРЕТНОЙ ЛАБОРАТОРИИ

А.1 Оценку показателей качества результатов анализа проводит назначаемый руководителем лаборатории совет специалистов, в состав которого входят аналитики и метрологи, имеющие достаточный опыт в разработке и оценке метрологических характеристик методик анализа. Необходимо, чтобы специалисты, входящие в состав совета, владели:

— номенклатурой показателей качества методик и результатов анализа;

— формами представления и способами выражения показателей точности, правильности, прецизионности методик и результатов анализа;

— формами представления результатов анализа;

— расчетными и экспериментально-расчетными методами оценки показателей качества;

— основными методами измерений, положенными в основу методик анализа;

— методологией планирования и проведения метрологических исследований при реализации в лаборатории методики анализа.

А.2 Совет специалистов разрабатывает программу оценивания показателей качества результатов анализа. При разработке программы следует предусмотреть:

— перечень оцениваемых показателей качества;

— число образцов для оценивания;

— необходимое число серий результатов параллельных определений каждого образца;

— форму представления экспериментальных данных;

— сроки проведения эксперимента.

А.3. Рекомендуемые методы оценки показателей качества результатов анализа приведены в приложении Б <1>.

<1> Для ситуации, в которой показатели качества оценивают в виде характеристики погрешности и ее составляющих. В том случае, когда показатели качества результатов анализа представляют в виде расширенной неопределенности и ее составляющих, для их оценивания может быть проведен эксперимент, описанный в приложении Б, при этом используют алгоритмы, аналогичные описанным в РМГ 61, 5.8.

Официальный источник электронного документа содержит неточность: пункт 5.8 РМГ 61-2010 отсутствует

А.4 Результаты оценки показателей качества результатов анализа оформляют протоколом по А.5 (форма соответствует ситуации, при которой показатели качества установлены в виде характеристики погрешности и ее составляющих) или А.6 (форма соответствует ситуации, при которой показатели качества установлены в виде расширенной неопределенности и ее составляющих). Протокол утверждает руководитель лаборатории, применяющей методику, при наличии согласующей подписи представителя метрологической службы и (или) управляющего по качеству лаборатории, если последнему соответствующие функции переданы метрологической службой предприятия.

А.5 Форма протокола оценки показателей качества результатов анализа при реализации методики анализа в конкретной лаборатории (для того случая, когда показатель точности результатов анализа установлен в виде характеристики погрешности и ее составляющих)

<1> Установленные значения показателей качества результатов анализа могут быть уточнены по результатам внутреннего контроля. В этом случае необходимо оформление нового протокола, при этом ранее оформленный протокол считается утратившим силу.

<2> В протокол установленных значений показателей качества результатов анализа заносят, при необходимости, полученные значения показателей качества результатов анализа, откорректированные с учетом факторов, оказывающих значимое влияние на результаты анализа и не учтенных при их оценивании по результатам контрольных процедур [например, погрешность (неопределенность) от неоднородности проб, если при проведении контроля точности использовались СО]. Откорректированные показатели качества результатов анализа не должны превышать показателей качества методики анализа.

<3> Если методика предназначена для измерений содержаний одного показателя в объекте или значения показателей качества, методики измерений одинаковы для всех показателей, наименование определяемых компонентов допустимо не указывать.

А.6 Форма протокола оценки показателей качества результатов анализа при реализации методики анализа в конкретной лаборатории (для того случая, когда показатель точности результатов анализа установлен в виде расширенной неопределенности и ее составляющих)

<1> Установленные значения показателей качества результатов анализа могут быть уточнены по результатам внутреннего контроля. В этом случае необходимо оформление нового протокола, при этом ранее оформленный протокол считается утратившим силу.

<2> В протокол установленных значений показателей качества результатов анализа заносят, при необходимости, полученные значения показателей качества результатов анализа, откорректированные с учетом факторов, оказывающих значимое влияние на результаты анализа и не учтенных при их оценивании по результатам контрольных процедур [например, погрешность (неопределенность) от неоднородности проб, если при проведении контроля точности использовались СО]. Откорректированные показатели качества результатов анализа не должны превышать показателей качества методики анализа.

<3> Если методика предназначена для измерений содержаний одного показателя в объекте или значения показателей качества методики измерений одинаковы для всех показателей, наименование определяемых компонентов допустимо не указывать.

<4> Указывают нужное (неопределенность по типу А или Б в соответствии с [13]).

<5> Значения коэффициентов чувствительности для источников неопределенности от прецизионности и правильности (смещения) принимают равными 1.

Приложение Б
(рекомендуемое)

МЕТОДЫ ОЦЕНКИ ПОКАЗАТЕЛЕЙ КАЧЕСТВА РЕЗУЛЬТАТОВ АНАЛИЗА (В ВИДЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ ПОГРЕШНОСТИ И ЕЕ СОСТАВЛЯЮЩИХ)

Б.1 В настоящих рекомендациях рассмотрены следующие методы оценки показателей качества результатов анализа:

— с помощью набора ОО;

— с применением метода добавок.

Б.2 Основные допущения при использовании методов оценки показателей качества результатов анализа

Б.2.1 Распределение случайной погрешности результата анализа принимают нормальным <1>.

<1> На практике достаточно, чтобы распределение случайной погрешности было симметричным и одномодальным.

Б.2.2 Распределение неисключенной систематической погрешности лаборатории принимают нормальным <2>.

<2> На практике достаточно, чтобы распределение систематической погрешности лаборатории было симметричным и одномодальным.

Б.2.3 Распределение погрешности аттестованного значения ОО и аттестованного значения добавки принимают равномерным.

Б.2.4 Влияющие факторы пробы не оказывают значимого влияния на погрешность результата анализа.

Б.3 Метод оценки показателей качества результатов анализа с помощью набора образцов для оценивания

Б.3.1 Требования к образцам для оценивания

Б.3.1.1 В качестве образцов для оценивания используют СО или АС.

Б.3.1.2 ОО выбирают таким образом, чтобы содержание определяемого компонента в ОО позволило охватить весь диапазон анализа рабочих проб.

Примечание — В качестве ОО для оценки показателей прецизионности могут быть использованы как СО и АС, так и стабильные и однородные рабочие пробы.

Б.3.1.3 Общий состав ОО должен соответствовать области применения методики анализа.

Б.3.1.4 ОО стабильны во время проведения эксперимента.

Б.3.1.5 В общем случае число ОО — не менее трех.

Примечания

1 Если по априорным данным установлено отсутствие значимой зависимости погрешности результатов анализа, выполняемых по методике, от измеряемого содержания (например, небольшой диапазон измерений) или получена информация о линейной зависимости погрешности от измеряемого содержания, то допускают использование одного или двух ОО соответственно.

2 Если для оценки показателя внутрилабораторной прецизионности результатов анализа использованы рабочие пробы, то определение числа ОО для оценки показателя правильности результатов анализа проводят после установления значений показателя внутрилабораторной прецизионности для всего диапазона анализа рабочих проб.

Б.3.2 Порядок проведения эксперимента и форма представления результатов

Б.3.2.1 В соответствии с требованиями НД на методику анализа получают L результатов анализа аттестованной характеристики в пробах ОО, используемых при проведении эксперимента. Число результатов анализа устанавливают достаточным для обеспечения достоверной оценки характеристики систематической погрешности лаборатории <3> [может быть определено по приложению И (см. таблицу И.3) <4>].

<3> Оценку систематической погрешности лаборатории признают достоверной, если ее неопределенность не превышает 0,33.

<4> При оценке характеристики случайной погрешности результатов анализа с использованием рабочих проб число результатов анализа может быть определено по таблице И.2.

При анализе каждого ОО соблюдают условия внутрилабораторной прецизионности, реализуемые в лаборатории (разные операторы, разное время, разные партии реактивов одного типа, разные наборы мерной посуды и т.д.). При этом число результатов единичного анализа, полученных в условиях повторяемости (параллельных определений) для результата анализа, соответствует установленному в методике для анализируемых проб.

Примечания

1 Если методикой анализа не предусмотрено проведение параллельных определений, то для целей эксперимента в условиях повторяемости получают два результата единичного анализа (n = 2).

2 В том случае, если в процессе обработки результатов анализа и исключения резко выпадающих результатов данных для оценивания показателей качества оказывается недостаточно для их достоверной оценки, дополнительно получают необходимое число результатов анализа.

Б.3.2.2 Экспериментальные данные заносят в таблицу по форме таблицы Б.1.

Примечание — Если методикой анализа предусмотрено внесение соответствующей поправки в результаты анализа, то в таблице Б.1 представляют исправленные результаты.

Таблица Б.1

Результаты единичного анализа образцов для оценивания

Б.3.2.3 Оценка показателя повторяемости результатов анализа

Б.3.2.3.1 Рассчитывают среднеарифметическое значение и выборочную дисперсию результатов единичного анализа содержаний компонента в m-м ОО, полученных в условиях повторяемости (параллельных определений):

m = 1, …, M; l = 1, …, L.

Б.3.2.3.2 На основе полученных значений выборочных дисперсий , …, в m-м ОО проверяют гипотезу о равенстве генеральных дисперсий, используя критерий Кохрена.

Значение критерия Кохрена рассчитывают по формуле

и сравнивают его с табличным значением этого критерия для числа степеней свободы , соответствующего максимальной дисперсии, и f = L, соответствующего числу суммируемых дисперсий, и принятой доверительной вероятности P = 0,95 (значения приведены в таблице В.1).

Если > , то соответствующее из дальнейших расчетов исключают и процедуру повторяют для следующего по величине и т.д. до тех пор, пока не станет меньше либо равно .

Примечание — Целесообразно исключать из расчетов не более двух дисперсий, в противном случае необходимо проанализировать полученные данные.

Б.3.2.3.3 Неисключенные из расчетов считают однородными и по ним оценивают СКО <5>, характеризующие повторяемость результатов единичного анализа (параллельных определений), полученных для содержания, соответствующего содержанию компонента в m-м ОО. Эти СКО рассчитывают по формуле

<5> Стандартное отклонение повторяемости по [1].

где в числе слагаемых нет отброшенных значений — число неотброшенных дисперсий <6>.

<6> Далее используют результаты анализа, соответствующие неотброшенным дисперсиям, при этом в настоящих рекомендациях использовано обозначение L, соответствующее числу неотброшенных дисперсий .

Б.3.2.3.4 Показатель повторяемости результатов анализа в виде СКО для содержаний, соответствующих содержанию компонента в m-м ОО, устанавливают, принимая равным

. (Б.5)

Б.3.2.3.5 Установленные значения сравнивают со значениями показателя повторяемости методики анализа .

В том случае, если > , делают вывод о недостаточном внедрении в лаборатории конкретной методики анализа и определяют мероприятия по проверке соблюдения процедуры анализа.

В том случае, если > , показатель повторяемости результатов анализа принимают равным .

Б.3.2.3.6 Показатель повторяемости методики анализа в виде предела повторяемости <7> — для содержания, соответствующего содержанию компонента в m-м ОО, рассчитывают по формуле

<7> Значение предела повторяемости рассчитывают в том случае, если методикой анализа предусмотрено проведение параллельных определений, и используют при проверке приемлемости результатов единичного анализа, полученных в условиях повторяемости.

, (Б.6)

где n — число параллельных определений, предусмотренных методикой анализа для получения результата анализа.

Значения Q(P, n) для P = 0,95 приведены в таблице 4.

Б.3.2.4 Оценка показателя внутрилабораторной прецизионности результатов анализа

Б.3.2.4.1 Проводят проверку средних значений, полученных в условиях внутрилабораторной прецизионности, на наличие выбросов по критерию Граббса.

а) Для результатов анализа каждого ОО {, l = 1, …, L} находят максимальное и минимальное значения.

Рассчитывают — общее среднее значение результатов анализа, полученных в условиях внутрилабораторной прецизионности и их СКО по формулам:

б) Рассчитывают статистики Граббса:

и сравнивают их с критическим значением для числа степеней свободы f = L, соответствующего числу серий результатов анализа, и принятой доверительной вероятности P = 0,95 (значения приведены в таблице Г.3 приложения Г).

Если > или/и > , то соответствующие результаты или/и из дальнейших расчетов исключают.

в) Расчет по а) и б) продолжают до тех пор, пока не будут выполнены условия:

. (Б.12), (Б.13)

Примечания

1 Целесообразно исключать из расчетов не более двух результатов, в противном случае необходимо проанализировать полученные данные.

2 Допустима проверка на наличие выбросов с использованием других критериев.

Б.3.2.4.2 Показатель внутрилабораторной прецизионности в виде СКО для содержаний, соответствующих содержанию компонента в m-м ОО, устанавливают, принимая равным СКО средних арифметических значений по серии неисключенных (по Б.3.2.4.1) результатов анализа — :

. (Б.14)

Примечания

1 Если методикой не предусмотрено проведение параллельных определений для получения результата анализа, то показатель внутрилабораторной прецизионности рассчитывают по формуле

2 Если полученные значения показателя внутрилабораторной прецизионности меньше соответствующих значений показателя повторяемости, то допускается значения показателя внутрилабораторной прецизионности принимать равными значениям показателя повторяемости.

Показатель внутрилабораторной прецизионности в виде предела внутрилабораторной прецизионности для содержания, соответствующего содержанию компонента в m-м ОО, рассчитывают по формуле, аналогично приведенной в 5.13.4:

. (Б.16)

Б.3.2.4.3 Значения показателей прецизионности результатов анализа для всего диапазона действия методики анализа могут быть определены в соответствии с Б.3.2.8.

Б.3.2.5 Оценка показателя правильности результатов анализа

Б.3.2.5.1 Рассчитывают значение смещения — лаборатории как разность между средним арифметическим значением результатов анализа и аттестованным значением m-го ОО

. (Б.17)

Б.3.2.5.2 Рассчитывают значение :

где — погрешность аттестованного значения m-го ОО.

Полученное значение сравнивают с при числе степеней свободы f = L — 1 для доверительной вероятности P = 0,95. Значения приведены в таблице В.2 приложения В.

В электронном документе текст соответствует официальному источнику.

Б.3.2.5.3 Если <=, то смещение незначимо на фоне случайного разброса, и в этом случае его принимают равным нулю ( = 0).

Б.3.2.5.4 Если > , то смещение значимо на фоне случайного разброса.

В этом случае необходимо дополнительно проверить качество результатов проведенного эксперимента.

Б.3.2.5.5 При незначимости показатель правильности результатов анализа (для содержаний, соответствующих содержанию определяемого компонента в m-м ОО) для принятой вероятности P = 0,95 рассчитывают по формуле

, (Б.19)

где 1,96 — здесь и далее, квантиль нормального распределения при доверительной вероятности P = 0,95.

Б.3.2.5.6 При значимости смещения на фоне случайного разброса показатель правильности результатов анализа может быть рассчитан по формуле

(Б.20)

при условии, что учет не приведет к превышению показателя точности результатов анализа над показателем точности методики анализа.

Б.3.2.5.7 Если имеется информация о наличии значимых дополнительных факторов, влияющих на значение показателя правильности, но не учтенных при выполнении эксперимента, например информация о неадекватности используемых ОО объекту анализа, неоднородности объекта анализа по сравнению с ОО, то необходимо оценку степени влияния таких факторов провести с помощью отдельных экспериментов <8> или с использованием априорной информации и расчет показателя правильности выполнить с учетом результатов проведенной оценки.

<8> Эксперимент может быть проведен аналогично В.3.

В электронном документе текст соответствует официальному источнику.

Б.3.2.6 Оценка показателя точности результатов анализа

Показатель точности результатов анализа (для содержания, соответствующего содержанию определяемого компонента в m-м ОО) при получении экспериментальных данных в условиях внутрилабораторной прецизионности для принятой вероятности P = 0,95 рассчитывают по формуле

. (Б.21)

Примечания

1 Здесь и далее при выполнении условия

показатель точности может быть рассчитан по формуле

. (Б.22)

2 При значимости смещения на фоне случайного разброса показатель точности результатов анализа может быть рассчитан по формуле

. (Б.23)

Б.3.2.7 Установленные значения сравнивают с приписанной характеристикой погрешности . В том случае, если > , делают вывод о недостаточном внедрении в лаборатории конкретной методики анализа и определяют мероприятия по проверке соблюдения процедуры анализа.

Б.3.2.8 Установление характеристики погрешности результатов анализа во всем диапазоне анализа рабочих проб

Б.3.2.8.1 Устанавливают функциональную зависимость показателя точности результатов анализа при реализации методики анализа от содержаний определяемого компонента по значениям , (m = 1, …, M), проверяя при этом с использованием статистических критериев (например, r*-критерия) адекватность устанавливаемой зависимости экспериментальным данным (, ).

Так, если определена линейная зависимость погрешности от содержаний определяемого компонента, то для расчета показателя точности результатов анализа в любой точке диапазона анализа рабочих проб используют выражение

, (Б.24)

где параметры и могут быть найдены методом наименьших квадратов.

Б.3.2.8.2 Диапазон анализа рабочих проб (для практического удобства использования значений показателей качества результатов анализа) может быть разбит на поддиапазоны, в пределах которых изменением значений показателей качества результатов анализа от содержаний определяемого компонента можно пренебречь. Разбивку на поддиапазоны осуществляют на основе показателя внутрилабораторной прецизионности . С этой целью осуществляют следующее:

— определяют во всем диапазоне анализа вид зависимости от аналогично Б.3.2.8.1;

— устанавливают границы поддиапазонов, для которых значения , соответствующие верхней и нижней границам поддиапазона, можно признать однородными, т.е. отношение максимальной дисперсии к минимальной не превосходит двух;

— на основе установленного вида зависимости (С) определяют значения , соответствующие серединам поддиапазонов, на которые был разбит весь диапазон анализа рабочих проб (по значениям ). Найденные значения принимают постоянными в пределах установленных поддиапазонов.

Б.3.2.8.3 Если оценка характеристики случайной погрешности результатов анализа проведена с использованием рабочих проб, то необходимое число образцов для оценивания характеристики систематической погрешности лаборатории устанавливают с учетом числа поддиапазонов, на которые разбивают диапазон анализа рабочих проб (по значениям ).

Б.3.2.8.4 При отсутствии выявляемой зависимости от устанавливают одно значение показателя внутрилабораторной прецизионности для всего диапазона. В этом случае для оценки показателя правильности допускают использование одного образца для оценивания.

Б.4 Метод оценки показателей качества результатов анализа с применением метода добавок

Б.4.1 Применение метода добавок позволяет провести оценивание мультипликативной (пропорционально изменяющейся) части систематической погрешности лаборатории.

Примечание — Использование способа допустимо, если на стадии предварительных исследований или по априорным данным установлено, что аддитивная (постоянная) часть систематической погрешности не вносит статистически значимого вклада в погрешность результата анализа.

Б.4.1.1 Образцами для оценивания служат рабочие пробы вещества (материала) и рабочие пробы вещества (материала) с известной величиной добавки <9>. Специально приготовленные пробы с известной добавкой должны быть однородными, соответствовать составу проб веществ (материалов), погрешность (неопределенность) их приготовления не должна вносить дополнительную статистически значимую погрешность (неопределенность) в значения показателя правильности результатов анализа. Содержание определяемого компонента в пробе с добавкой не должно превышать верхней границы поддиапазона, в котором принято постоянство показателя воспроизводимости. Наименьшие допускаемые значения величины добавки в зависимости от значений показателя воспроизводимости в относительных единицах приведены в РМГ 61 (см. таблицу К.1 приложения К, вторая графа) <10>. Рекомендации по определению массы (объема) вещества (материала) добавки приведены в приложении Е.

<9> В качестве добавки используют СО или АС.

<10> Для методик, значение точечной оценки показателя воспроизводимости которых превышает 25% содержания компонента в исходной пробе, применение метода добавок для оценки показателя правильности не рекомендуется.

Распределение погрешности величины добавки (распределение возможных значений величины добавки) принимают равномерным.

Б.4.2 Оценка показателей повторяемости и внутрилабораторной прецизионности результатов анализа

Б.4.2.1 Оценку показателей повторяемости и внутрилабораторной прецизионности результатов анализа проводят с использованием рабочих проб <11>. Общие требования к организации эксперимента и методы оценки аналогичны рассмотренным в Б.3.1 — Б.3.2 и приложении А.

<11> При этом используемые пробы должны быть однородны и стабильны во все время проведения эксперимента.

Б.4.2.2 На основе установленной зависимости от содержания определяемого компонента с учетом Б.3.2.8.2 диапазон измерений разбивают на поддиапазоны, в пределах которых можно принять постоянство .

Б.4.3. Оценка показателя правильности результатов анализа

Б.4.3.1 Для оценки показателя правильности результатов анализа используют рабочие пробы вещества (материала) и рабочие пробы вещества (материала) с известной добавкой <10>. Специально приготавливаемые пробы с известной добавкой однородны и соответствуют составу проб веществ (материалов). Погрешность их приготовления не вносит дополнительную систематически значимую погрешность в характеристику систематической погрешности лаборатории. Содержание определяемого компонента в пробе с добавкой не превышает верхней границы поддиапазона, в котором наблюдается (принято) постоянство характеристики внутрилабораторной прецизионности результатов анализа. При этом величина добавки удовлетворяет условию .

<10> Для методик, значение точечной оценки показателя воспроизводимости которых превышает 25% содержания компонента в исходной пробе, применение метода добавок для оценки показателя правильности не рекомендуется.

В общем случае объем (масса) каждой пробы, отобранной для приготовления образцов для оценивания, должен быть не менее 2L объема (массы), необходимого для получения одного результата анализа (L — предполагаемое число результатов анализа одного образца для оценивания).

Необходимый для расчета массив экспериментальных данных для каждого m-го поддиапазона с принятым постоянным значением показателя внутрилабораторной прецизионности результатов анализа получают в соответствии с методикой анализа в виде серии L результатов анализа определяемого компонента в пробе без добавки и в пробе с добавкой , максимально варьируя при этом условия проведения анализа: разное время, разные операторы, разные наборы мерной посуды и т.д.

Примечание — Если методикой предусмотрено выполнение параллельных определений для получения результата анализа, то и представляют собой результаты анализа, средние из результатов параллельных определений.

Анализ пробы без добавки и пробы с добавкой проводят в одинаковых условиях, причем число L результатов анализа пробы и пробы с добавкой должно совпадать.

Выбор числа L результатов анализа осуществляют в соответствии с приложением И в зависимости от возможной неопределенности оценки показателя правильности методики анализа.

Таблица Б.2

Результаты анализа проб и проб с добавкой при использовании метода добавок

В электронном документе текст соответствует официальному источнику.

Б.4.3.2 Рассчитывают следующие величины:

— среднее значение результатов анализа пробы без добавки;

— среднее значение результатов анализа пробы с добавкой;

— среднее значение экспериментально найденной величины добавки;

— СКО, характеризующее случайный разброс результатов анализа пробы без добавки;

— СКО, характеризующее случайный разброс результатов анализа пробы с добавкой;

значение смещения, где — величина добавки;

— рассчитанное значение t-критерия, где — погрешность аттестованного значения добавки к пробе.

Б.4.3.3 Расчетное значение t сравнивают с при числе степеней свободы f = L — 1 (значения приведены в таблице В.2 приложения В).

В электронном документе текст соответствует официальному источнику.

Б.4.3.4 Если t <= , то значение смещения незначимо на фоне случайного разброса, и в этом случае его принимают равным нулю ( = 0), систематическую погрешность лаборатории рассчитывают по формуле

. (Б.32)

Б.4.3.5 При значимости смещения на фоне случайного разброса показатель правильности результатов анализа может быть рассчитан по формуле

(Б.33)

при условии, что учет не приведет к превышению показателя точности результатов анализа над показателем точности методики анализа.

Б.4.4 Оценка показателя точности результатов анализа

Б.4.4.1 Показатель точности результатов анализа при получении экспериментальных данных в условиях внутрилабораторной прецизионности для принятой вероятности P = 0,95 рассчитывают по формуле

. (Б.34)

Примечание — При значимости смещения на фоне случайного разброса показатель точности результатов анализа может быть рассчитан по формуле

. (Б.35)

Б.4.4.2 Проводят сравнение с аналогично Б.3.2.7.

Б.4.4.3 При необходимости по найденным для каждого из поддиапазонов измерений значениям устанавливают функциональную зависимость от содержания определяемого компонента для всего диапазона измерений с учетом Б.3.2.8.

Приложение В
(справочное)

ПРИМЕР ВЫБОРА КОНТРОЛИРУЕМЫХ СОСТАВЛЯЮЩИХ БЮДЖЕТА НЕОПРЕДЕЛЕННОСТИ

Методика: Аттестованная методика измерений массовой доли кобальта в материале СО никелевых сплавов методом атомно-эмиссионной спектрометрии.

Методика обладает следующими метрологическими характеристиками:

— диапазон измерений массовой доли кобальта от 0,01% до 1,0% включительно;

— относительное значение предела повторяемости для пяти результатов единичных измерений составляет 9,4% ( = 9,4%);

— относительная расширенная неопределенность результатов измерений массовой доли кобальта при k = 2 для всего диапазона измерений составляет 4,9% (= 4,9%, k = 2).

Бюджет неопределенности измерений массовой доли кобальта приведен в таблице В.1.

Таблица В.1

Бюджет неопределенности измерений массовой доли кобальта в материале СО состава никелевых сплавов

Методика измерений внедрена в лаборатории, по результатам внедрения установлено, что показатель точности результатов анализа не превышает показателя точности методики анализа и принят равным показателю точности методики анализа.

Внутренний контроль качества результатов измерений для рассматриваемой методики может осуществляться:

— на основе контроля качества всей процедуры измерений с использованием ОК (в этом случае, например, при реализации оперативного контроля процедуры анализа норматив оперативного контроля точности принимают равным значению расширенной неопределенности, соответствующей аттестованному значению ОК);

— путем проведения контроля только значимых составляющих бюджета неопределенности (при невозможности или экономической нецелесообразности создания или получения ОК). Анализ бюджета неопределенности, приведенного в таблице В.1, показал, что значимой составляющей бюджета неопределенности результатов измерений массовой доли кобальта в материале СО является прецизионность единичных измерений в условиях повторяемости. В этом случае целесообразно проводить контроль одной составляющей бюджета неопределенности — прецизионности единичных измерений в условиях повторяемости.

Приложение Г
(справочное)

СТАТИСТИЧЕСКИЕ ТАБЛИЦЫ

В данном приложении представлены таблицы, в которых приведены статистические данные.

Таблица Г.1

Критерий Кохрена. Критические значения для доверительной вероятности P = 0,95

Таблица Г.2

Процентные точки распределения Стьюдента для доверительной вероятности P = 0,95 (двусторонний критерий)

Таблица Г.3

Критерий Граббса. Критические значения для доверительной вероятности P = 0,95

Приложение Д
(справочное)

ПРИМЕРЫ РЕАЛИЗАЦИИ ВНУТРЕННЕГО КОНТРОЛЯ КАЧЕСТВА РЕЗУЛЬТАТОВ АНАЛИЗА

Д.1 Пример оперативного контроля процедуры анализа с применением ОК

Методика: Методика измерений массовой доли железа в никеле (по ГОСТ 849) методом химико-атомно-эмиссионного спектрального анализа с дугой постоянного тока в качестве источника возбуждения спектра (приведена в разделе 5 ГОСТ 6012).

Диапазон измерений массовой доли железа по методике составляет от 0,001% до 1,0% включительно.

Для контроля используют ОК, представляющий собой межгосударственный СО состава никеля МСО 1132:2005 (комплект VSN2, индекс СО VSN2-6).

СО VSN 2-6 обладает следующими метрологическими характеристиками (для элемента железо):

— аттестованное значение массовой доли железа 0,0102% (C = 0,0102%);

— границы абсолютной погрешности аттестованного значения массовой доли железа при P = 0,95 составляют +/- 0,0006% ( ± 0,0006%, P = 0,95), что согласно РМГ 93 соответствует расширенной неопределенности при коэффициенте охвата, равном 2).

Показатель точности (расширенная неопределенность) методики анализа, соответствующий значению массовой доли железа, равному 0,010%, согласно таблице 2 ГОСТ 6012 составляет 0,002% (U = 0,002%, k = 2).

Результаты контрольных измерений ОК получают на основе двух параллельных определений, расхождения между которыми не превышают предела повторяемости, установленного в таблице 2 ГОСТ 6012. Наименьшие разряды результатов измерений принимают такими же, как и наименьший разряд значения показателя точности.

Методика измерений внедрена в лаборатории, по результатам внедрения установлено, что показатель точности результатов анализа не превышает показателя точности методики анализа и принят равным показателю точности методики анализа.

Неопределенность аттестованного значения выбранного СО позволяет реализовать алгоритм оперативного контроля процедуры измерений массовой доли железа с применением ОК, так как она не значима на фоне показателя точности методики измерений.

В качестве норматива оперативного контроля процедуры анализа используют значения расширенной неопределенности (при k = 2). Норматив контроля К составляет 0,002%.

Согласно методике измерений проведено контрольное измерение массовой доли железа в ОК и получен результат контрольного измерения, равный 0,011% ( = 0,011%).

Результат контрольной процедуры равен

, (Д.1)

. (Д.2)

Норматив контроля рассчитывают по формуле

, (Д.3)

. (Д.4)

Сопоставляют результат контрольной процедуры с нормативом контроля. Результат контрольной процедуры удовлетворяет условию

, (Д.5)

. (Д.6)

Процедуру измерений массовой доли железа в никеле признают удовлетворительной.

Д.2 Примеры построения контрольных карт Шухарта

Д.2.1 Пример 1

Построение контрольных карт Шухарта по контролю точности, внутрилабораторной прецизионности и повторяемости с использованием образца для контроля в относительных величинах и расчет новых значений показателей качества результатов анализа для методики определения содержания кадмия в сухом молоке.

1) Методика: используется аттестованная методика измерений определения содержания токсичных элементов (кадмия, свинца, меди и цинка) в продуктах пищевых и продовольственном сырье инверсионно-вольтамперометрическими методами.

2) Метрологические характеристики методики приведены в таблице Д.1.

Таблица Д.1

За результат анализа принимают среднее значение из результатов двух параллельных определений.

3) Средство контроля: в качестве ОК используют СО сухого молока с массовой долей кадмия (C = 0,015 мг/кг).

4) Расчет числа результатов контрольных процедур, необходимых для достоверной оценки новых значений показателей качества результатов анализа, осуществляют следующим образом:

а) Рассчитывают величину , (Д.7)

где n — число результатов параллельных определений, заданное в методике:

б) Число результатов контрольных процедур L, необходимых для достоверной оценки новых значений показателей качества результатов анализа, определяют по таблицам приложения И или рассчитывают по формулам приложения К:

— для оценки показателя правильности — 23;

— для оценки показателя внутрилабораторной прецизионности — 11;

— для оценки показателя повторяемости — 18.

5) Расчет границ регулирования контрольных карт Шухарта производят следующим образом:

а) Для контрольной карты для контроля повторяемости:

средняя линия, ;

предел предупреждения, ;

предел действия, .

б) Для контрольной карты для контроля внутрилабораторной прецизионности:

средняя линия, ;

предел предупреждения, ;

предел действия, .

в) Для контрольной карты для контроля точности:

пределы предупреждения ;

пределы действия .

Данные для построения контрольных карт Шухарта приведены в таблице Д.3. Контрольные карты представлены на рисунках Д.1, Д.2, Д.3.

Контрольная карта Шухарта.
Контроль точности результатов измерений с использованием ОК (в относительных единицах). Определение содержания кадмия в сухом молоке

Рисунок Д.1

Контрольная карта Шухарта.
Контроль стабильности внутрилабораторной прецизионности результатов измерений с использованием ОК (в относительных единицах). Определение содержания кадмия в сухом молоке

Рисунок Д.2

Контрольная карта Шухарта.
Контроль повторяемости результатов измерений с использованием ОК (в относительных единицах). Определение содержания кадмия в сухом молоке

Рисунок Д.3

6) Расчет новых значений показателей качества результатов анализа выполняют следующим образом:

а) Расчет новых значений показателей качества результатов анализа проводят в соответствии с 6.3.2.5, 6.3.2.6, 6.3.3.5 — 6.3.3.10 с использованием значений результатов контрольных процедур, приведенных в таблице Д.3:

Официальный источник электронного документа содержит неточность: пункт 6.3.2.6 отсутствует.

; (Д.17)

; (Д.18)

; (Д.19)

(число результатов контрольных процедур — 29, исключен результат контрольной процедуры l = 10, вышедший за предел действия).

7) Сравнение показателей качества результатов анализа с ранее установленными представлено в нижеследующей таблице Д.2.

Таблица Д.2

<1> Показатель СКО воспроизводимости.

<2> Показатель внутрилабораторной прецизионности.

Таблица Д.3

Данные для построения контрольных карт Шухарта для контроля точности, для контроля внутрилабораторной прецизионности и повторяемости результатов измерений с использованием ОК (расчет величин в относительных единицах) и результаты интерпретации данных контрольных карт

Д.2.2 Пример 2

Построение контрольных карт Шухарта по контролю точности и внутрилабораторной прецизионности с использованием разных рабочих проб методом добавок в единицах измеряемых содержаний и расчет новых значений показателей качества результатов анализа для методики определения бензойной кислоты (консервант E 210) в продуктах переработки плодов и овощей (кетчуп).

1) Методика: в соответствии с техническим регламентом таможенного союза ТР ТС 021/2011 «О безопасности пищевой продукции» используется ГОСТ 30669.

2) Метрологические характеристики методики представлены в таблице Д.4.

Таблица Д.4

За результат анализа принимают среднее значение из результатов двух параллельных определений, округленное до целого значения.

3) В качестве средств контроля используют рабочие пробы кетчупа, содержащие бензойную кислоту, используемую как консервант. В качестве добавки использована бензойная кислота, соответствующая ГОСТ 10521, квалификации ч.д.а. Навеску бензойной кислоты добавляют в навеску кетчупа, после чего смесь тщательно перемешивают и анализируют.

4) Контролируемый диапазон

1-й контролируемый диапазон: массовая доля бензойной кислоты, мг/кг, от 100 до 500 включ.

Рассчитывают (с учетом примечания 4.5.3) величину показателя точности результатов анализа, СКО внутрилабораторной прецизионности, СКО повторяемости:

; (Д.22)

; (Д.23)

; (Д.24)

. (Д.25)

2-й контролируемый диапазон: массовая доля бензойной кислоты, мг/кг, свыше 500 до 1000 мг/кг включ.

Рассчитывают (с учетом примечания 4.5.3) величину показателя точности результатов анализа, СКО внутрилабораторной прецизионности, СКО повторяемости:

; (Д.26)

; (Д.27)

; (Д.28)

. (Д.29)

5) Расчет величины добавок

Величина добавки должна удовлетворять условию

,

В электронном документе текст соответствует официальному источнику.

где — показатель точности результата анализа пробы без добавки;

— показатель точности результата анализа пробы с добавкой (расчетное значение).

1-й контролируемый диапазон: результаты анализа проб с добавкой и без добавки должны находиться в первом контролируемом диапазоне:

.

Выбирают величину добавки для каждой из проб, с содержанием бензойной кислоты в границах 1-го диапазона, от 70 до 100 мг/кг, с учетом того, чтобы содержание бензойной кислоты в пробе с добавкой не превысило значение верхней границы диапазона.

2-й контролируемый диапазон: результаты анализа проб с добавкой и без добавки должны находиться во 2-м контролируемом диапазоне:

.

Выбирают величину добавки, постоянную для всех проб с содержанием бензойной кислоты в границах 2-го диапазона, 230 мг/кг, с учетом того, чтобы содержание бензойной кислоты в пробе с добавкой не превысило значение верхней границы диапазона.

6) Расчет числа результатов контрольных процедур, необходимых для достоверной оценки новых значений показателей качества результатов анализа.

1-й контролируемый диапазон:

; (Д.30)

. (Д.31)

Число результатов контрольных процедур L, необходимых для достоверной оценки новых значений показателей качества результатов анализа, определяют по таблицам приложения ИК или рассчитывают по формулам приложения К:

Официальный источник электронного документа содержит неточность: приложение ИК отсутствует.

— для оценки показателя правильности — 23;

— для оценки показателя внутрилабораторной прецизионности — 11.

2-й контролируемый диапазон:

; (Д.32)

. (Д.33)

— для оценки показателя правильности — 24;

— для оценки показателя внутрилабораторной прецизионности — 11.

7) Определение порядка получения результатов контрольных процедур

Для 1-го контролируемого диапазона получают результаты контрольных процедур для контроля внутрилабораторной прецизионности по нечетным контрольным процедурам.

Расчет параметров контрольных карт

1-й контролируемый диапазон: для контроля точности: пределы предупреждения

(в данном случае показатели точности результатов анализа для проб без добавки и проб с добавкой равны);

пределы действия ;

для контроля внутрилабораторной прецизионности: средняя линия ;

предел предупреждения ;

предел действия ;

2-й контролируемый диапазон: для контроля точности:

пределы предупреждения

(в данном случае показатели точности результатов анализа для проб без добавки и проб с добавкой равны);

пределы действия ;

для контроля внутрилабораторной прецизионности:

средняя линия ;

предел предупреждения ;

предел действия .

Данные для построения контрольных карт Шухарта для контроля точности, для контроля внутрилабораторной прецизионности результатов анализа рабочих проб (расчет величин в единицах измеряемых содержаний) и результаты интерпретации данных контрольных карт приведены в таблицах Д.5 и Д.6. Контрольные карты приведены на рисунках Д.4 — Д.7.

Таблица Д.5

Данные для построения контрольных карт Шухарта для контроля точности, для контроля внутрилабораторной прецизионности результатов испытаний кетчупа с использованием рабочих проб в интервале содержаний бензойной кислоты от 100 до 500 мг/кг (в единицах измеряемых содержаний) и результаты интерпретации данных контрольных карт

Таблица Д.6

Данные для построения контрольных карт Шухарта для контроля точности, для контроля внутрилабораторной прецизионности результатов измерений с использованием рабочих проб кетчупа в интервале содержаний бензойной кислоты от 500 до 1000 мг/кг (в единицах измеряемых содержаний) и результаты интерпретации данных контрольных карт

Контрольная карта Шухарта.
Контроль точности результатов анализа методом добавок (в единицах измеряемых содержаний). Определение бензойной кислоты в кетчупе (интервал от 100 до 500 мл/кг)

Рисунок Д.4

Контрольная карта Шухарта (метод добавок).
Контроль стабильности внутрилабораторной прецизионности (в единицах измеряемых содержаний). Определение бензойной кислоты в кетчупе (диапазон от 100 до 500 мг/кг)

Рисунок Д.5

Контрольная карта Шухарта.
Контроль точности результатов анализа методом добавок (в единицах измеряемых содержаний). Определение бензойной кислоты в кетчупе (диапазон от 500 до 1000 мг/кг)

Рисунок Д.6

Контрольная карта Шухарта (метод добавок).
Контроль внутрилабораторной прецизионности (в единицах измеряемых содержаний). Определение бензойной кислоты в кетчупе (диапазон от 500 до 1000 мг/кг)

Рисунок Д.7

9) Расчет новых значений показателей качества результатов анализа

Расчет новых значений показателей качества результатов анализа проводят в соответствии с 6.3.2.5, 6.3.2.6, 6.3.3.5 — 6.3.3.10 с использованием значений результатов контрольных процедур, приведенных в таблицах Д.5 (1-й контролируемый диапазон) и Д.6 (2-й контролируемый диапазон):

Официальный источник электронного документа содержит неточность: пункт 6.3.2.6 отсутствует.

1-й контролируемый диапазон

(по 15 результатам карты по контролю внутрилабораторной прецизионности, см. таблицу Д.5);

2-й контролируемый диапазон:

(без результата контрольной процедуры N 10);

(без результата контрольной процедуры N 10);

(по 17 результатам карты по контролю внутрилабораторной прецизионности, см. таблицу Д.6);

; (Д.43)

; (Д.44)

; (Д.45)

; (Д.46)

. (Д.47)

10) Сравнение показателей качества результатов анализа с ранее установленными необходимо производить в соответствии с таблицей Д.7.

Таблица Д.7

Приложение Е
(рекомендуемое)

РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ МАССЫ (ОБЪЕМА) ВЕЩЕСТВА (МАТЕРИАЛА) ДОБАВКИ

Е.1 В качестве добавки могут быть использованы твердые или жидкие СО или АС. Содержание определяемого компонента в веществе (материале) добавки должно быть таким, чтобы изменением объема (массы) пробы с добавкой по отношению к объему (массе) пробы без добавки можно было пренебречь.

Примечание — Допустимо использование твердых или жидких СО, реактивов с известным содержанием основного вещества (определяемого компонента).

Е.2 Определение объема вещества (материала) добавки в том случае, если проба и добавка представляют собой растворы

Е.2.1 Вещество (материал) добавки должно быть более концентрированным по определяемому компоненту, чем проба. В общем случае должно быть выполнено следующее условие:

, (Е.1)

где — содержание определяемого компонента в веществе (материале) добавки (например, массовая концентрация, мг/дм3);

— содержание определяемого компонента в пробе без добавки (например, массовая концентрация, мг/дм3);

— увеличение содержания определяемого компонента в пробе с добавкой, % содержания определяемого компонента в пробе без добавки (в соответствии с настоящим приложением).

Е.2.2 Объем добавки , см3, рассчитывают по формуле

где — объем пробы без добавки, см3.

Примечание — Формулу Е.1 используют для расчета объема добавки в том случае, если содержание компонента в пробе без добавки и в веществе (материале) добавки представлено в одних и тех же единицах величин: массовой концентрации, молярной концентрации, объемной доли.

Е.2.3 В том случае, если в качестве вещества (материала) добавки используют жидкость (СО, АС, реактив) с известными значениями плотности и массовой доли основного вещества, объем добавки рассчитывают по формуле

где C — аттестованное значение (массовая доля) СО или АС, массовая доля основного вещества в реактиве, %;

— плотность жидкого СО или АС (реактива), г/см3;

— массовая концентрация определяемого компонента в пробе без добавки, мг/дм3.

Е.2.4 Содержание определяемого компонента в пробе с добавкой рассчитывают по формуле

. (Е.4)

Е.3 Определение массы вещества (материала) добавки в том случае, если проба представляет собой раствор, добавка — твердый СО (реактив) с известным содержанием основного вещества (определяемого компонента).

Е.3.1 Массу добавки , мг, рассчитывают по формуле

(Е.5)

где — массовая концентрация определяемого компонента в пробе без добавки, мг/дм3;

— объем пробы без добавки, см3.

Е.3.2 Содержание компонента в пробе с добавкой может быть рассчитано по формуле (Е.3).

Е.4 Определение массы вещества (материала) добавки в том случае, если проба представляет собой твердое вещество, добавка — твердый СО (реактив) с известным содержанием основного вещества (определяемого компонента) или жидкий раствор определяемого компонента (СО или АС).

Е.4.1 Проба представляет собой твердое вещество, добавка — твердый СО (реактив) с известным содержанием основного вещества (определяемого компонента).

Массу добавки , мг, рассчитывают по формуле

где mпроб — масса пробы, мг.

Примечание — Формулу (Е.5) используют для расчета массы добавки, только если содержание компонента в пробе без добавки и в веществе (материале) добавки представлено в одних и тех же единицах величины — единицах массовой доли.

Е.4.2 Содержание компонента в пробе с добавкой может быть рассчитано по формуле (Е.3).

Е.4.3 Проба представляет собой твердое вещество, добавка — жидкий раствор определяемого компонента (СО или АС).

Объем добавки , дм3, рассчитывают по формуле

где — массовая доля определяемого компонента в пробе без добавки, %;

— массовая концентрация определяемого компонента в веществе (материале) добавки, мг/дм3.

Е.4.4 Содержание определяемого компонента в пробе с добавкой может быть рассчитано по формуле (Е.3).

Приложение Ж
(рекомендуемое)

ФОРМЫ РЕГИСТРАЦИИ РЕЗУЛЬТАТОВ ОПЕРАТИВНОГО КОНТРОЛЯ ПРОЦЕДУРЫ АНАЛИЗА

В данном приложении представлены формы регистрации результатов оперативного контроля процедуры анализа, приведенные в таблицах Ж.1 — Ж.8.

Таблица Ж.1

Форма регистрации результатов контроля повторяемости при получении результатов контрольных измерений

Таблица Ж.2

Форма регистрации результатов оперативного контроля процедуры анализа (с применением ОК)

Таблица Ж.3

Форма регистрации результатов оперативного контроля процедуры анализа (с использованием метода разбавления в сочетании с методом добавок)

Таблица Ж.4

Форма регистрации результатов оперативного контроля процедуры анализа (с использованием метода добавок)

Таблица Ж.5

Форма регистрации результатов оперативного контроля
процедуры анализа (с использованием метода разбавления)

 
Таблица Ж.6

Форма журнала регистрации результатов оперативного контроля процедуры анализа (с использованием метода варьирования навески)

Таблица Ж.7

Форма регистрации результатов оперативного контроля
процедуры анализа (с использованием контрольной методики)

Таблица Ж.8

Форма журнала регистрации результатов контроля внутрилабораторной прецизионности

Приложение И
(справочное)

ЗНАЧЕНИЯ НЕОПРЕДЕЛЕННОСТИ ОЦЕНОК КОНТРОЛИРУЕМЫХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ КАЧЕСТВА РЕЗУЛЬТАТОВ АНАЛИЗА

В данном приложении представлены таблицы И.1 — И.3, в которых значения неопределенности оценок контролируемых показателей качества результатов анализа установлены с учетом 6.3 и таблиц 1 и 2 [1].

Таблица И.1

Значения неопределенности A оценок СКО повторяемости

Таблица И.2

Значения неопределенности A’ оценок среднеквадратических отклонений внутрилабораторной прецизионности

Таблица И.3

Значения неопределенности A’ оценок систематической погрешности лаборатории

Примечания

1

, (И.1)

где

; (И.2)

— точечная оценка показателя внутрилабораторной прецизионности результатов анализа ( — при отсутствии информации о значении );

— точечная оценка показателя воспроизводимости методики анализа;

— точечная оценка показателя повторяемости методики анализа;

n — число параллельных определений, установленное в методике измерений.

2 При других значениях число результатов контрольных процедур (серий результатов анализа) L может быть установлено с использованием формул расчета неопределенности оценки показателей по приложению К.

3 Число результатов контрольных процедур (серий результатов анализа), меньшее числа, указанного в таблицах И.1 — И.3, приводит к худшим значениям неопределенности оценок показателей.

4 Число результатов контрольных процедур (серий результатов анализа), превышающее число, указанное в таблицах И.1 — И.3, приводит к лучшим значениям неопределенности оценок показателей.

Приложение К
(справочное)

ФОРМУЛЫ ДЛЯ РАСЧЕТА НЕОПРЕДЕЛЕННОСТИ ОЦЕНОК ПОКАЗАТЕЛЕЙ ТОЧНОСТИ РЕЗУЛЬТАТОВ АНАЛИЗА

К.1 Расчет неопределенности оценок показателя повторяемости проводят по формуле (9) [1]:

, (К.1)

где A — значение неопределенности оценки показателя повторяемости;

n — число параллельных определений, установленное в методике анализа;

L — число результатов контрольных процедур (серий результатов анализа).

К.2 Расчет неопределенности оценок показателя внутрилабораторной прецизионности проводят по формуле (10) [1]:

, (К.2)

где A’ — значение неопределенности оценки показателя внутрилабораторной прецизионности;

n — число параллельных определений, установленное в методике анализа;

L — число результатов контрольных процедур (серий результатов анализа);

, (К.3)

, (К.4)

где — точечная оценка показателя внутрилабораторной прецизионности результатов анализа (допустимо — при отсутствии информации о значении );

— точечная оценка показателя воспроизводимости методики анализа;

— точечная оценка показателя повторяемости методики анализа.

К.3 Расчет неопределенности оценок показателя правильности результатов анализа проводят по формуле (13) [1]:

, (К.5)

где — значение неопределенности показателя правильности результатов анализа.

Приложение Л
(справочное)

ОЦЕНКА ПОКАЗАТЕЛЕЙ КАЧЕСТВА РЕЗУЛЬТАТОВ АНАЛИЗА В ВИДЕ РАСШИРЕННОЙ НЕОПРЕДЕЛЕННОСТИ И ЕЕ СОСТАВЛЯЮЩИХ НА ОСНОВЕ РЕЗУЛЬТАТОВ КОНТРОЛЬНЫХ ПРОЦЕДУР

Л.1 Оценка показателя внутрилабораторной прецизионности

Л.1.1 На основе результатов контрольных процедур (рассчитанных в единицах измеряемых содержаний), полученных при построении одной контрольной карты для контроля внутрилабораторной прецизионности в течение временного диапазона, может быть найдена точечная оценка показателя внутрилабораторной прецизионности по формуле <1>

<1> Для результатов контрольных процедур, рассчитанных как текущие расхождения результатов контрольных измерений, l = 2, …, L + 1.

где — расхождение результатов контрольных измерений одной пробы — результат контрольной процедуры в соответствии с 6.2.2;

L — число используемых контрольных процедур, достаточное для достоверной оценки показателя внутрилабораторной прецизионности.

Примечания

1 Оценке показателя внутрилабораторной прецизионности должен предшествовать анализ полученных данных. Не рекомендуется использование результатов контрольных процедур, выходящих за предел действия.

2 Если результаты контрольных процедур были рассчитаны в относительных единицах, то точечная оценка показателя внутрилабораторной прецизионности в относительных единицах, %, может быть найдена по формуле

3 На основе результатов контрольных процедур, полученных при построении контрольных карт для контроля повторяемости, по аналогичным формулам могут быть рассчитаны точечные оценки показателя повторяемости результатов анализа.

Л.1.2 Оцененное значение () сравнивают с точечной оценкой показателя внутрилабораторной прецизионности ().

Если , то для следующего временного диапазона может быть принято значение показателя внутрилабораторной прецизионности из диапазона от () до (). Границы регулирования для построения контрольных карт рассчитывают с использованием принятого значения.

Если анализируют процесс измерений с учетом результатов контроля точности по 6.3.3 и принимают решение на основе рекомендаций Л.4 — Л.6.

Л.2 Оценка показателя правильности результатов анализа

Л.2.1 На основе результатов контрольных процедур, рассчитанных в единицах измеряемых содержаний или в относительных единицах и полученных в течение временного диапазона при построении одной контрольной карты для контроля точности, находят (при необходимости) интервальную оценку показателя правильности результатов анализа (в единицах измеряемых содержаний) или (в относительных единицах).

Л.2.2 В единицах измеряемых содержаний оценку смещения и точечную оценку показателя правильности результатов анализа рассчитывают по формулам:

где — результат контрольной процедуры в соответствии с 6.2.3 в зависимости от выбранного алгоритма реализации контрольной процедуры;

L — число используемых контрольных процедур, достаточное для достоверной оценки показателя правильности результатов анализа.

Оценку смещения и точечную оценку показателя правильности результатов анализа в относительных единицах, %, рассчитывают по формулам:

где — результат контрольной процедуры в относительных величинах.

Примечание — Оценке смещения и точечной оценки показателя правильности результатов анализа должен предшествовать анализ полученных данных. Не рекомендуется использование результатов контрольных процедур, выходящих за предел действия.

Л.2.3 Рассчитывают значение критерия Стьюдента t по формуле

(Л.5)

— в единицах измеряемых содержаний, или по формуле

(Л.6)

— в относительных единицах.

Полученное значение t сравнивают с при числе степеней свободы f = L — 1 для доверительной вероятности P = 0,95. Значения указаны в таблице Г.2 приложения Г.

Л.2.4 Если t <= , то смещение незначимо на фоне случайного разброса, и в этом случае его принимают равным нулю.

Л.2.5 Интервальную оценку показателя правильности результатов анализа в единицах измеряемых содержаний определяют по формуле (при коэффициенте охвата = 2)

(Л.7)

или по формуле

. (Л.8)

Интервальную оценку показателя правильности результатов анализа в относительных единицах, %, определяют по формуле

(Л.9)

или по формуле

. (Л.10)

Л.3 На основе определенных по результатам контрольных процедур за временной диапазон оценок показателей внутрилабораторной прецизионности и правильности результатов анализа устанавливают оценку показателя точности результатов анализа.

Интервальную оценку показателя точности результатов анализа в единицах измеряемых содержаний определяют по формуле (при коэффициенте охвата = 2)

(Л.11)

или по формуле

. (Л.12)

Интервальную оценку показателя точности результатов анализа в относительных единицах, %, определяют по формуле

(Л.13)

или по формуле

. (Л.14)

Л.4 Полученную интервальную оценку показателя точности результатов анализа в единицах измеряемых содержаний сравнивают с ранее принятым значением интервальной оценки показателя точности результатов анализа .

Если удовлетворяет условию , то для следующего временного диапазона может быть принято значение показателя точности результатов анализа из диапазона от до . Границы регулирования для построения контрольных карт рассчитывают с использованием принятого значения.

Если удовлетворяет условию (где U — интервальная оценка показателя точности методики анализа, — интервальная оценка показателя точности результатов анализа, установленная согласно 4.5.3 на основе показателя точности методики анализа), то для следующего временного диапазона устанавливают интервальную оценку показателя точности из диапазона от до U.

Примечание — Если интервальная оценка показателя точности результатов анализа была установлена в относительных единицах, %, то ее сравнивают со значениями интервальных оценок показателя точности результатов анализа и показателя точности методики анализа в относительных единицах, %.

Л.5 Установленное значение показателя точности результатов анализа и соответствующих ему показателей внутрилабораторной прецизионности и правильности результатов анализа оформляют протоколом по А.6 приложения А.

Л.6 Если удовлетворяет условию (где — значение интервальной оценки показателя точности результатов анализа, экспериментально установленное в лаборатории), то процесс анализа приостанавливают <2>, выясняют причины сложившейся ситуации и осуществляют корректирующие действия.

<2> Если , процесс анализа допустимо не приостанавливать. В этом случае необходимо выяснить причины сложившейся ситуации и принять решение о значении показателя точности результатов анализа для следующего временного диапазона.

Приложение М
(рекомендуемое)

ФОРМЫ РЕГИСТРАЦИИ РЕЗУЛЬТАТОВ КОНТРОЛЯ ПРИ ПЕРИОДИЧЕСКОЙ ПРОВЕРКЕ ПОДКОНТРОЛЬНОСТИ ПРОЦЕДУРЫ ВЫПОЛНЕНИЯ АНАЛИЗА

В данном приложении представлены формы регистрации результатов контроля при периодической проверке подконтрольности процедуры выполнения анализа, приведенные в таблицах М.1 — М.4.

Таблица М.1

Форма регистрации результатов контроля при периодической проверке подконтрольности процедуры выполнения анализа с применением образцов для контроля

Таблица М.2

Форма регистрации результатов контроля при периодической проверке подконтрольности процедуры выполнения анализа с применением метода добавок с использованием одной рабочей пробы

Таблица М.3

Форма регистрации результатов контроля при периодической проверке подконтрольности процедуры выполнения анализа с применением метода добавок с использованием нескольких рабочих проб

Таблица М.4

Форма регистрации результатов контроля при периодической проверке подконтрольности процедуры выполнения анализа с применением метода разбавления пробы с использованием нескольких рабочих проб

Примечание — В журналах контроля стабильности результатов анализа наряду с данными, отраженными в таблицах М.1 — М.4, приводят информацию о исполнителе, дате проведения анализа и др. данные, необходимые для идентификации контрольных измерений, а также проведенные корректирующие действия или ссылку на внутренний документ лаборатории, в котором эти действия отражены.

Приложение Н
(рекомендуемое)

ФОРМА РЕГИСТРАЦИИ РЕЗУЛЬТАТОВ ВЫБОРОЧНОГО СТАТИСТИЧЕСКОГО КОНТРОЛЯ ВНУТРИЛАБОРАТОРНОЙ ПРЕЦИЗИОННОСТИ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ РАБОЧИХ ПРОБ

Таблица Н.1

Примечание — В журналах контроля стабильности результатов анализа наряду с данными, отраженными в таблице Н.1, приводят информацию о исполнителе, дате проведения анализа и другие данные, необходимые для идентификации контрольных измерений, а также проведенные корректирующие действия или ссылку на внутренний документ лаборатории, в котором эти действия отражены.

БИБЛИОГРАФИЯ

  ГОСТ Р 70152-2022

 НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

 КАЧЕСТВО ВОДЫ

 Методы внутреннего лабораторного контроля качества проведения микробиологических и паразитологических исследований

 Water quality. Methods of internal laboratory quality control for conducting microbiological and parasitological studies

ОКС 13.060.70

Дата введения 2023-01-01

 Предисловие

1 РАЗРАБОТАН Российской ассоциацией водоснабжения и водоотведения (РАВВ) совместно с Федеральным государственным бюджетным учреждением «Центр стратегического планирования и управления медико-биологическими рисками здоровью» Федерального медико-биологического агентства «Научно-исследовательский институт экологии человека и гигиены окружающей среды им.А.Н.Сысина» (ФГБУ «ЦСП» ФМБА России)

2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 343 «Качество воды»

3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 17 июня 2022 г. N 483-ст

4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Правила применения настоящего стандарта установлены в статье 26 Федерального закона от 29 июня 2015 г. N 162-ФЗ «О стандартизации в Российской Федерации». Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном (по состоянию на 1 января текущего года) информационном указателе «Национальные стандарты», а официальный текст изменений и поправок — в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ближайшем выпуске ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (www.rst.gov.ru)

      1 Область применения

Настоящий стандарт предназначен для осуществления внутреннего лабораторного контроля с целью оценки достоверности полученных результатов при проведении бактериологических, вирусологических, микологических и паразитологических исследований объектов окружающей среды, в том числе воды централизованного горячего и холодного, нецентрализованного и хозяйственно-бытового водоснабжения, воды, расфасованной в емкости, источников питьевого водоснабжения, воды в зонах рекреации, воды бассейнов и аквапарков, сточных и технических вод, воды для орошения и полива.

      2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 18963 Вода питьевая. Методы санитарно-бактериологического анализа

ГОСТ 24849 Вода. Методы санитарно-бактериологического анализа для полевых условий

ГОСТ 26670 Продукты пищевые. Методы культивирования микроорганизмов

ГОСТ 30813 Вода и водоподготовка. Термины и определения

ГОСТ 31942 (ISO 19458:2006) Вода. Отбор проб для микробиологического анализа

ГОСТ 31955.1 (ISO 9308-1:2000) Вода питьевая. Обнаружение и количественный учет Escherichia coli и колиформных бактерий. Часть 1. Метод мембранной фильтрации

ГОСТ 34786 Вода питьевая. Методы определения общего числа микроорганизмов, колиформных бактерий, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa и энтерококков

ГОСТ ISO 11133 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

ГОСТ Р 58144 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ Р ИСО 15882 Стерилизация медицинской продукции. Химические индикаторы. Руководство по выбору, использованию и интерпретации результатов

ГОСТ Р ИСО 21748 Руководство по использованию оценок повторяемости, воспроизводимости и правильности при оценке неопределенности измерений

Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты» за текущий год. Если заменен ссылочный стандарт, на который дана недатированная ссылка, то рекомендуется использовать действующую версию этого стандарта с учетом всех внесенных в данную версию изменений. Если заменен ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, то рекомендуется использовать версию этого стандарта с указанным выше годом утверждения (принятия). Если после утверждения настоящего стандарта в ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, внесено изменение, затрагивающее положение, на которое дана ссылка, то это положение рекомендуется применять без учета данного изменения. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, рекомендуется применять в части, не затрагивающей эту ссылку.

      3 Термины и определения

В настоящем стандарте применены термины по ГОСТ 30813, а также следующие термины с соответствующими определениями:

3.1 бокс (боксированное помещение): Специальным образом устроенное изолированное помещение, состоящее из собственно бокса и предбокса, предназначенное для создания асептических условий при проведении исследований, а также для предотвращения микробного загрязнения внешней среды.

3.2 бокс биологической безопасности (ламинарное укрытие, ламинарный шкаф): Конструкция, используемая для физической изоляции (удержания и контролируемого удаления из рабочей зоны) микроорганизмов с целью предотвращения возможности заражения персонала и контаминации воздуха рабочей зоны и окружающей среды.

3.3 запас рабочей культуры: Культура эталонного штамма в условиях временного хранения в полужидком агаре при температуре от 4°С до 8°С.

3.4 запас эталонного штамма: Штамм, находящийся в условиях длительного хранения при температуре минус (70±10)°С или в жидком азоте.

3.5 лиофилизированная культура: Высушенная под вакуумом из замороженного состояния культура эталонного штамма.

3.6 культура для целевого использования: Культура эталонного штамма, прошедшая не более 2 пассажей после высева со среды временного хранения (из запасов рабочей культуры), предназначенная для использования в анализе.

3.7 контрольные процедуры: Действия и мероприятия, направленные на минимизацию рисков на всех этапах выполнения микробиологического и паразитологического анализа.

3.8 патогенные биологические агенты; ПБА: Патогенные для человека микроорганизмы, генно-инженерно-модифицированные микроорганизмы, яды биологического происхождения (токсины), гельминты, а также материал, подозрительный на содержание перечисленных агентов (включая биологические жидкости и объекты окружающей среды).

3.9 посевная: Рабочее помещение, предназначенное для выполнения первого этапа санитарно-микробиологического исследования воды: концентрирования, разведения и/или посева в питательные среды.

3.10 посевная доза: Объем конкретного разведения, содержащий необходимое для посева количество жизнеспособных клеток тестового микроорганизма.

3.11 разбавитель: Жидкость определенного состава, служащая для приготовления серийных разведений исследуемой воды или модельных бактериальных культур.

3.12 субкультура: Культура бактерий, полученная путем пассажа через полноценные питательные среды.

3.13 испытательное оборудование: Средство испытаний, представляющее собой техническое устройство для воспроизведения условий испытаний.

3.14 вспомогательное оборудование: Оборудование, предназначенное для обеспечения работоспособности основного оборудования, не участвующее в исследованиях.

3.15 измерительное оборудование: Средства измерений, в том числе эталоны единиц физических величин, стандартные образцы, программное обеспечение (кроме входящего в состав средств измерений) и вспомогательная аппаратура или их комбинации, необходимые для реализации процесса измерений.

      4 Организация внутреннего контроля качества на всех этапах выполнения микробиологического и паразитологического анализа

4.1 Основными направлениями организации внутреннего контроля качества являются:

— контроль за соблюдением требований к условиям проведения анализа (лабораторные помещения, воздушная среда, температурные режимы инкубации и хранения, режимы дезинфекции и стерилизации и т.д.);

— выполнение регламентированных процедур ведения тестовых культур;

— контроль качества питательных сред;

— контроль качества мембранных фильтров и фильтрующих материалов для микробиологического анализа;

— контроль качества дистиллированной воды;

— систематическая оценка результатов контрольных процедур, выполняемых в соответствии с планом внутрилабораторного контроля.

4.2 Описание процедур контроля соблюдения требований к условиям проведения анализа, ведения эталонных бактериальных культур, контроля качества питательных сред и мембранных фильтров, постановки положительных и отрицательных контролей представлены в настоящем стандарте.

4.3 Документальное оформление результатов проведенных контрольных процедур осуществляется в произвольной форме, удобной исполнителю и наглядной для других специалистов, привлекаемых к участию в различных комиссиях по проверке работы лаборатории (по аттестации, аккредитации и др.). При этом могут быть использованы журнальные формы учета или формы отдельных контрольных листов, которые впоследствии брошюруются за определенный период времени (месяц, квартал, год) в зависимости от кратности и вида контроля. Примеры формуляров для записи результатов внутреннего контроля качества приведены в приложении А.

4.4 Регистрация и хранение контрольных результатов могут осуществляться на электронных носителях.

4.5 Обязательным разделом внутреннего контроля качества является проведение периодического, но не реже 1 раза в год, анализа результатов выполненных контрольных процедур, с учетом которого осуществляется корректировка мероприятий, направленных на повышение качества внутрилабораторного контроля.

4.6 Обеспечение качества выполняемых исследований возможно только при наличии квалифицированного персонала. К выполнению всех технологических операций (подготовка проб, исследование и обработка результатов) допускаются лица с высшим или средним специальным образованием, прошедшие подготовку (обучение) периодичностью один раз в пять лет по специальностям, отвечающим требованиям и характеру работ, в области микробиологии (бактериологии, вирусологии, микологии) и паразитологии, а также один раз в пять лет курс повышения квалификации кадров по безопасности работы с ПБА III-IV группы патогенности (опасности) в соответствии с действующими на территории Российской Федерации санитарными правилами и нормами. Проверку квалификации работающего персонала необходимо проводить в соответствии с разработанным в лаборатории и утвержденным в организации планом производственного контроля.

4.7 Требования к набору помещений и их размещению, организации и безопасности работ микробиологических лабораторий с патогенными биологическими агентами изложены в [1].

4.8 Во избежание загрязнения проб и питательных сред, а также риска инфицирования персонала в лаборатории следует соблюдать меры личной гигиены:

— лабораторная одежда должна быть застегнутой надлежащим способом, чистой, в хорошем состоянии, изготовленной из ткани, ограничивающей риск воспламенения. Эту одежду не следует носить вне рабочей зоны и, в частности, в ней нельзя выходить в туалет;

— на волосяной покров головы следует надевать медицинскую шапочку из хлопчатобумажной ткани или одноразовую из нетканого материала. На лицо, при необходимости, надеть маску или защитный экран/очки;

— ногти следует содержать в чистоте и желательно короткими;

— необходимо мыть руки теплой водой желательно в раковине, оснащенной не регулируемым вручную смесителем (например, с локтевым, ножным или сенсорным управлением), до и после микробиологических исследований, а также после посещения туалета. Рекомендуется использовать жидкое или порошковое мыло, или другое дезинфицирующее средство, поступающее из дозатора, поддерживаемого в чистом состоянии. Для сушки рук следует использовать одноразовые бумажные или матерчатые салфетки или полотенца;

— при работе с открытыми пробами, питательными средами и при посеве материала не допускается разговаривать, кашлять и т.д.;

— люди, имеющие инфекционные заболевания кожи или страдающие заболеваниями кожи, должны предпринимать меры предосторожности, если микроорганизмы от них способны инфицировать пробы, что может отразиться на результатах исследований;

— в лаборатории нельзя принимать пищу, пить, оставлять пищевые продукты для личного потребления в лабораторных холодильниках или морозильных камерах;

— недопустимо осуществлять пипетирование ртом.

      5 Контроль физических параметров окружающей среды

5.1 Условия окружающей среды помещений лаборатории не должны оказывать негативного воздействия на достоверность результатов, полученных в результате исследований. Лабораторные помещения содержать в состоянии, пригодном для проведения исследований, уборку и дезинфекцию следует выполнять постоянно. Загрязненные или потенциально зараженные поверхности следует продезинфицировать, для чего необходимо использовать дезинфицирующие средства, обладающие способностью уничтожать бактерии, вирусы, паразитарные агенты и грибы.

Примечание — Комнаты и оборудование могут быть продезинфицированы с использованием «холодного тумана» — путем распыления воздуха со взвешенными в нем частичками дезинфицирующей жидкости, при этом дезинфекционное облако распространяется по обрабатываемой площади, проникая в щели и труднодоступные места.

Обеззараживание системы вентиляции с фильтрами следует проводить 2 раза в год.

Техническое обслуживание системы вентиляции следует проводить 1 раз в год, при необходимости, с заменой фильтров на новые.

5.2 В лаборатории должен осуществляться мониторинг физических параметров условий окружающей среды (температуры, влажности).

Перечень параметров определяется индивидуально каждой лабораторией и зависит от технических требований к эксплуатируемому оборудованию и применяемых методов. Данные параметры измеряются приборами, зарегистрированными в Госреестре, которые должны проходить ежегодную поверку в аккредитованных организациях.

Проводить измерения физических параметров (температура, влажность) должен подготовленный сотрудник, который прошел соответствующее обучение. Возможно привлечение сотрудников не из штата лаборатории, допуск которого оформляется приказом по организации. Измерения проводят в начале рабочего дня в посевных, комнате приготовления питательных сред и в помещениях, где хранятся сухие среды, и где этого требуют технические условия применяемых методов и методик.

Результаты мониторинга должны быть задокументированы в журналах (формулярах) и подписаны сотрудником, проводившим измерения.

5.3 В лабораториях должны осуществлять мониторинг источников УФ излучения и оценки эффективности УФ бактерицидного излучения. Мощность бактерицидного излучения определяет качество обеззараживания воздуха. Количество облучателей и эффективность их функционирования определяют мощность бактерицидного излучения [2].

Количество облучателей определяется при организации лаборатории для каждого помещения в соответствии с Паспортом облучателя, объемом помещения и требованиями актуальной нормативной документации, действующей на территории РФ.

В каждом помещении, где используются УФ облучатели, должен вестись журнал (формуляр), в котором фиксируют паспортные данные лампы, ее ресурс, объем облучаемого помещения, дату начала эксплуатации, учет времени работы лампы. Осуществляют замену после выработки ресурса лампы. Отмечают также дату протирки лампы, проводимую не менее 1 раза в месяц только при отключенной сети.

Методика оценки эффективности применения ультрафиолетового бактерицидного излучения для обеззараживания воздуха в помещениях осуществляется путем проверки микробной обсемененности помещений, описанной в 7.2.

Если нормативы превышены, то выполняют генеральную уборку помещения с обработкой всех поверхностей дезинфицирующими средствами и повторно обеззараживают воздух УФ облучением.

Затем проводят повторное исследование микробной обсемененности воздуха.

При получении неудовлетворительных результатов контроля ставят в известность руководителя лаборатории и принимают меры по выяснению причин недостаточной эффективности обеззараживания.

Если при повторном определении уровень обсемененности воздуха снова превышает нормативы, определяют бактерицидную эффективность облучения.

Применение ультрафиолетового бактерицидного излучения для обеззараживания воздуха считают эффективным, если бактерицидная эффективность составляет не менее 99%.

5.4 Контроль температуры в термостате (испытательном оборудовании) осуществляют с помощью одного термометра или с помощью записывающих тонкопроволочных термопар, позволяющих фиксировать выход температуры инкубации за границы допустимого отклонения. Контроль температуры в термостатах проводят ежедневно до начала работы поверенными термометрами и результаты фиксируются в журнале (формуляре). С этой целью каждый термостат должен включать не менее одного термометра, шарик которого погружен в глицерин (или в другую подходящую теплопоглощающую жидкость). Можно использовать другие системы проверки работы с равноценными характеристиками. Цена деления термометра не должна превышать четверти величины допустимого отклонения температуры инкубации. Так, для контроля температуры (36±2)°С необходимо использовать термометр с ценой деления не более 0,5°С. Термометр размещают в центре камеры термостата. Если в процессе аттестации были выявлены экстремальные точки, то термометры размещают в этих точках. В журнале (формуляре) для каждого термостата должно быть указано помещение, в котором находится оборудование, номер термостата, номер термометра, требуемый температурный режим и допустимые отклонения. В журнале (формуляре) отмечается дата учета и обработка термостата. Все записи заверяются подписью исполнителя.

Раз в месяц термостаты очищают и проводят санитарную обработку внешних и внутренних стенок термостата и, если необходимо, удаляют пыль из системы вентиляции или по инструкции производителя.

5.5 Проверка температуры в холодильниках проводится поверенными средствами измерения — термометрами ежедневно в каждой камере, используя термометр или постоянно установленный датчик. Результаты фиксируются в журнале (формуляре) и заверяются подписью исполнителя. Там же фиксируются даты санитарной обработки внутренних поверхностей холодильника. Точность, требуемая для контролирующего температуру устройства, зависит от цели, с которой эта камера используется.

При загрузке холодильных камер для поддержания циркуляции воздуха и во избежание перекрестного загрязнения используют разные камеры, контейнеры.

Примечание — Стоит обратить внимание, что в холодильниках, оснащенных электронным табло, бывает, что температура на табло и внутри камеры по показаниям термометра отличаются.

5.6 Температуру каждой морозильной камеры и установки для глубокого замораживания проверяют утром и вечером, используя подходящие устройства, контролирующие температуру, 1 раз в месяц — удаляют пыль с лопастей мотора и с внешних пластин термообменника (если возможно). Если морозильные камеры и установки для глубокого замораживания имеют встроенные устройства измерения температуры, информация с которых выводится на лицевую панель устройства, то достаточно контролировать температуру внешним термометром 2 раза в год и после разморозки и очистки холодильника для контроля работы встроенного термометра.

5.7 Контроль бани с терморегулятором требуется для поддержания необходимой температуры, обеспечивающей максимально допустимое отклонение, устанавливающегося для каждого используемого метода.

Перед началом работы баню необходимо заполнить жидкостью, предпочтительно следует использовать дистиллированную или деионизированную воду. Регулярно проверяют уровень жидкости, чтобы обеспечить правильное функционирование бани и надлежащее погружение помещенных в нее проб. Уровень жидкости должен всегда закрывать нагревательные элементы. Следует регулярно выливать жидкость из бани, очищать, санировать и снова заполнять баню жидкостью, в зависимости от частоты использования, а также после того, когда происходит разбрызгивание или протекание бани.

5.8 Микроволновая печь применяется для подогрева и плавления питательных сред и различных гелей, должна обеспечивать нагревание жидкостей и питательных сред в контролируемых условиях с помощью цикла микроволнового излучения.

Примечание — Не допускается нагревание сред, содержащих чувствительные к высокой температуре компоненты, если не проверено, что этот способ нагревания не оказывает влияния на свойства среды. Не допускается использовать микроволновые печи для стерилизации питательных сред. Не допускается использовать металлическое оборудование, включая металлические крышки.

5.9 Весы, используемые в микробиологической лаборатории для взвешивания, должны быть требуемого диапазона, зарегистрированные в установленном порядке на территории РФ, должны проходить ежегодную поверку каксредство измерения. Если нет других указаний, разрешающая способность весов должна быть не более 1%, чтобы обеспечить максимальную допустимую погрешность 5% по массе.

Оборудование устанавливают на устойчивую горизонтальную поверхность с защитой от вибраций.

Оборудование очищают и дезинфицируют после каждого использования или после проливания (рассыпания) при взвешивании с помощью подходящего не коррозирующего дезинфицирующего средства.

Обученный оператор должен проводить калибровку весов в соответствии с технической документацией на них.

5.10 pH-метр должен обеспечивать считывание показаний до ±0,01 ед. pH, а погрешность измерений должна составлять 0,1 ед. pH. Он должен быть оснащен ручным или автоматическим определителем температуры.

pH-метр регулируют в соответствии с инструкцией изготовителя для измерения значения pH при стандартизированной температуре, например 25°С. Значение pH считывают после того, как стабилизируется показание. Калибровку pH-метра проводят в соответствии с инструкцией производителя, используя не менее двух, а лучше трех стандартных буферных растворов перед началом работы. При этой проверке определяют максимально допустимые погрешности, которые должны быть более строгими, чем погрешность, допустимая при обычном использовании. Буферные растворы должны быть прослеживаемыми и иметь значения pH, определяемые с точностью до двух знаков после запятой при температуре измерения (как правило, pH 7,00, pH 4,00 и/или pH 9,00 при 25°С, в соответствии с инструкцией изготовителя).

Измеряемое значение pH должно находиться между значениями pH стандартных растворов.

Значение pH записывают с точностью до двух знаков после запятой в соответствующий журнал (формуляр).

Значение водородного показателя измеряют у стерилизованной среды, а при работе с плотной средой — измеряют у стерилизованной среды после ее отвердения. При измерении pH для контроля питательных сред применяют индикаторную бумагу с шагом 0,3 ед.

Отклонение pH среды за пределы диапазона, указанного в паспорте, приводит к ухудшению ее биологических свойств, вплоть до полной непригодности. Отклонения водородного показателя или другие проблемы с pH могут быть вызваны: перегревом; недостаточным перемешиванием; чрезмерной стерилизацией; использованием щелочного стекла; загрязнением емкостей, в которых готовилась среда; дистиллированной водой низкого качества.

5.11 Процедура подготовки к работе и контроля стерильности фильтровальных установок при проведении микробиологических исследований воды

5.11.1 Процедура подготовки к работе и контроля стерильности фильтровальных установок при проведении бактериологических исследований воды

Воронки и фритты обжигают фламбированием с применением пинцета с ватой или марлей, смоченной 96%-ным спиртом и отжатой, или с применением ручной горелки.

Обеззараживание фильтровальной установки проводится после каждого проведения концентрирования пробы воды.

Контроль стерильности фильтровальных установок проводят перед началом посева методом мембранной фильтрации.

Подготовительный этап

Для контроля используют:

— плотную полноценную неселективную среду (питательный агар, ГРМ-агар и др.) проверенной ранее серии (раздел 11);

— стерильные мембранные фильтры (нитрат- или ацетат-целлюлозные) для микробиологических целей с диаметром пор 0,45 мкм, проверенной ранее партии (5.12);

— стерильную водопроводную воду;

— спирт-ректификат 96%-ный.

Накануне исследования питательный агар проверенной серии разливают в чашки Петри слоем не менее 2 мм и проверяют на стерильность. Для этого одну чашку из приготовленной среды инкубируют при температуре (37±1)°С в течение 24 ч. При наличии роста микроорганизмов приготовленную среду выбраковывают.

Методика контроля

На воронках должны быть нанесены риски, определяющие объем фильтруемой жидкости. Внутренние поверхности воронки и фильтровальный столик смачивают 96%-ным спиртом и фламбируют. После сгорания спирта и остывания воронок с помощью стерильного пинцета помещают мембранный фильтр на основание держателя фильтра, затем устанавливают фильтровальную воронку в гнездо фильтровального столика. Допускается фламбирование фильтровального столика и внутренней поверхности воронки газовым пистолетом.

При отключенном вакууме воронку заполняют стерильной водой таким образом, чтобы вода обмыла внутренние стенки воронки. Объем стерильной воды должен составлять не менее половины максимального объема воронки.

Включают вакуум и отфильтровывают содержимое воронки. Вакуум отключают, снимают фильтровальную воронку и стерильным пинцетом переносят мембранный фильтр с основания на чашку со средой. Между мембранным фильтром и поверхностью агара не должно быть пузырьков воздуха. Чашки с посевами переворачивают и инкубируют в термостате при (36±2)°С в течение (24±2) ч.

Рост микроорганизмов свидетельствует о неэффективной обработке фильтровальной установки. Результаты заносят в журнал контроля стерильности фильтровальных установок и визируют подписью сотрудника, выполнившего контроль. Обо всех случаях нестерильности фильтровальных установок ставят в известность руководителя подразделения.

5.11.2 Процедура подготовки к работе и контроля стерильности фильтровальных установок при проведении вирусологических исследований воды

Обработка фильтровальной установки

Обеззараживание фильтровальной установки проводится после каждого проведения концентрирования пробы воды.

Контроль стерильности фильтровальных установок проводят перед началом концентрирования методом смыва непатогенного биологического трейсера дистиллированной водой.

Подготовительный этап

Для контроля используют:

— плотную полноценную неселективную среду МПА проверенной ранее серии (раздел 11);

— стерильную дистиллированную воду.

Накануне исследования питательный агар проверенной серии разливают в чашки Петри слоем не менее 2 мм и проверяют на стерильность. Для этого одну чашку из приготовленной среды инкубируют при температуре 37°С в течение 24 ч. При наличии роста микроорганизмов приготовленную среду выбраковывают.

Методика контроля

Обнаружение в пробе колифагов свидетельствует о неэффективной обработке фильтровальной установки. В случае обнаружения фагов обеззараживание фильтродержателя производятся повторно с последующим контролем. Результаты заносят в журнал контроля стерильности фильтровальных установок и визируют подписью сотрудника, выполнившего контроль. В случаях выявления нестерильности фильтровальных установок ставят в известность руководителя подразделения, и результаты проведенных исследований, проведенные с использованием данной нестерильной фильтровальной установки, считаются не действительными.

5.11.3 Процедура подготовки к работе и фильтровальных установок при проведении паразитологических исследований воды проводится согласно рекомендациям производителя.

Пример — При проведении паразитологических исследований могут использоваться вакуумные фильтровальные установки типа ПВФ-142, ПВФ-142Б, ПВФ-142Б(К), ПВФ-35, ПВФ-47, ПВФ-142П, установки напорного фильтрования типа ПНФ-70, УППВ.

5.12 Контроль эффективности фильтрующих материалов для проведения санитарно-микробиологических и санитарно-паразитологических исследований

В практике лабораторий, проводящих санитарно-вирусологический контроль воды, используются позитивно-заряженная микропористая капроновая мембрана с диаметром пор 0,2 мкм, подготовленная к использованию согласно с указаниями организации-изготовителя (листовка-аннотация, сопровождающая фильтры).

В практике лабораторий, проводящих санитарно-паразитологический контроль воды, используют трековую мембрану, на основе ацетатов целлюлозы типа МФАС-СПА с размерами пор от 2,5 до 3,0 мкм, МФАС-СПА-4 с размерами пор от 2,5 до 4,5 мкм или прозрачные аналитические трековые мембраны ATM на основе полиэтилентерефталата с размерами пор от 1,5 до 4,5 и более мкм. Диаметр фильтровальных дисков 25, 35, 47, 70 и до 142 мкм, в зависимости от диаметра фритты фильтродержателя используемого фильтровального оборудования. Специальная подготовка для трековых мембран не требуется, так как трековая мембрана находится между бумажными прокладочными дисками, изготовленными из силиконизированной бумаги. Трековые мембраны извлекают пинцетом из заводской упаковки и помещают на фритту фильтродержателя прибора для фильтрования (диаметр диска трековой мембраны подбирают в зависимости от имеющейся в лаборатории фильтровальной установки).

В практике лабораторий, проводящих санитарно-бактериологический контроль воды, используются фильтрующие материалы диаметром 47 или 35 мм и средним размером пор 0,45 мкм.

Фильтрующие материалы применяются при определении санитарно-бактериологических показателей, определяемых при контроле качества различных вод в соответствии с [3] с применением методов по ГОСТ 31955.1, ГОСТ 34786 и 6.4.1 настоящего стандарта:

— обобщенные колиформные бактерии;

— E. coli;

— энтерококки;

— P. aeruginosa;

— споры сульфитредуцирующих клостридий.

Качество используемых фильтрующих материалов может оказать существенное влияние на результаты анализа. При этом качество фильтрующих материалов одного производителя может меняться от партии к партии. При поступлении каждой новой партии фильтров, а также при необходимости принятия решения о возможности продления сроков годности осуществляется контроль эффективности фильтрующих материалов.

При наличии в поступившей партии нескольких серий фильтров контроль проводится для каждой серии.

Фильтрующие материалы, допущенные к проведению анализа, используются однократно. Повторное применение фильтрующих материалов запрещается.

Принцип метода

Эффективность фильтрующих материалов определяется путем сравнения числа колоний микроорганизмов, выросших на полноценной питательной среде в результате прямого поверхностного посева суспензии культуры контрольного микроорганизма, и числа колоний, выросших на этой же среде в результате посева способом мембранной фильтрации.

Оценка эффективности фильтрующих материалов осуществляется по показателю «процент извлекаемости». Фильтрующие материалы считаются пригодными, если при посеве способом мембранной фильтрации вырастает не менее 80% от числа колоний, полученных при прямом посеве.

Отбор фильтров для контрольного исследования должен проводиться «слепым» методом, т.е. фильтры для контроля необходимо отбирать произвольно из разных упаковок анализируемой партии.

5.13 Все автоматические дозаторы должны проходить ежегодную поверку в соответствии с описанием типа СИ.

5.14 Центрифуги, используемые для микробиологических и паразитологических исследований в качестве испытательного оборудования, аттестуют один раз в два года на скорость вращения, таймер, температуру для центрифуг с охлаждением, а также после ремонта проводят повторную аттестацию. Центрифугам, используемым в качестве вспомогательного оборудования, проводят техническое обслуживание, согласно рекомендациям производителя. Каждая лаборатория самостоятельно определяет принадлежность оборудования к испытательному и вспомогательному исходя из методов, которые в ней реализуются.

5.16 Проведение контроля в боксах биологической безопасности для микробиологических исследований

5.16.1 Бокс биологической безопасности для микробиологических исследований — это рабочее помещение, оснащенное установкой для горизонтального и вертикального ламинарных потоков воздуха, предназначенной для удаления пыли и других частиц из воздуха, в том числе микроорганизмов. Максимально допустимое количество частиц в кубическом метре с размером не менее или равным 0,5 мкм представляет класс устранения пыли из защитного бокса с очисткой воздуха. Для боксов, используемых в микробиологии пищевых продуктов, количество частиц должно быть не более 4000 в кубическом метре.

5.16.2 Для проведения микробиологических исследований допускаются боксы биологической безопасности не ниже II класса. Если это определено национальными регламентами, боксы биологической безопасности используют для любых видов работы с патогенными микроорганизмами. Боксы не должны загромождаться оборудованием. Все необходимое размещают до начала работы внутри бокса, чтобы свести к минимуму количество движений рук внутри и вне рабочей зоны. Расположение оборудования и материалов должно быть таким, чтобы свести к минимуму нарушение потока воздуха в рабочей зоне. Операторы должны быть обучены правильному использованию боксов, чтобы обеспечивать как их безопасность, так и сохранность пробы или культуры микроорганизмов.

5.16.3 После использования рабочую зону бокса очищают и обеззараживают с помощью соответствующего, не обладающего коррозийными свойствами, дезинфицирующего средства.

Боксы биологической безопасности следует дезинфицировать перед заменой фильтра или плановым обслуживанием.

После очистки бокса для обеззараживания можно использовать ультрафиолетовые (УФ) лампы. УФ лампы раз в месяц протирают 70%-ным спиртом или заменяют в соответствии с инструкциями изготовителя.

5.16.4 В процессе эксплуатации бокса биологической безопасности необходимо проверять эффективность бокса на биологическую безопасность при закупке и затем в соответствии с рекомендациями изготовителя, но не реже 1 раза в год, а также после любого ремонта или модификации. Проверку чистоты рабочей поверхности и стен бокса от любого микробиологического загрязнения следует проверять не реже 1 раза в месяц с соответствующей записью в лабораторном журнале, необходимо осуществлять перед каждой работой в боксе проверку числа микроорганизмов, циркулирующих в воздухе во время работы фильтров, используя метод седиментации.

      6 Требования к подготовке лабораторной посуды

6.1 Процедура подготовки лабораторной посуды к работе

В настоящем стандарте устанавливается порядок проведения и контроля подготовки стеклянной посуды многоразового использования в соответствии с требованиями ГОСТ 31942.

Стерилизованная посуда должна иметь маркировку с указанием даты стерилизации для последующего учета срока хранения.

Емкости для отбора проб питьевой воды, обеззараженной хлорированием или другими окислителями, должны быть стерилизованы с тиосульфатом натрия и соответствующим способом маркированы в соответствии с ГОСТ 24849.

Подготовка лабораторной посуды проводится в моечной, расположенной в «чистой» зоне.

Процесс подготовки дает возможность получить чистые и стерильные флаконы, бутылки, пипетки, чашки Петри и др.

Одним из факторов, оказывающих влияние на результаты проводимых исследований воды, является недостаточная чистота посуды, поэтому вся посуда должна быть перед стерилизацией тщательно вымыта и высушена в соответствии с ГОСТ 18963.

Под механическими включениями подразумеваются посторонние нерастворимые частицы или волокна, видимые невооруженным глазом в смывах с внутренней поверхности стерильной лабораторной посуды.

Под стерильностью посуды подразумевается отсутствие микроорганизмов на их поверхностях после стерилизации.

Вся лабораторная посуда, вышедшая после проведения исследования (чашки, колбы, пробирки со средами), помещается в специальные биксы или ведра с крышками и обеззараживается автоклавированием при температуре (126±2)°С и давлении 0,15 МПа в течение 60 мин или при температуре (132±2)°С и давлении 0,2 МПа в течение 20 мин с момента достижения указанной температуры; при росте споровой микрофлоры — при температуре (132±2)°С и давлении 0,2 МПа в течение 90 мин с момента достижения указанной температуры. Категорически запрещается освобождать использованную посуду от содержимого (питательных сред, растворов с посевами) до обеззараживания.

Перед стерилизацией посуда для микробиологического анализа должна быть тщательно вымыта и высушена. Посуду стерилизуют в сушильном шкафу сухим жаром одним из способов:

— при температуре (180±3)°С — в течение 1 ч с момента достижения указанной температуры;

— при температуре (160±5)°С — в течение 2,5 ч с момента достижения указанной температуры.

Материалы и лабораторную посуду, разрушающиеся при температуре от 160°С до 180°С (резина и т.п.), следует стерилизовать в паровом стерилизаторе при температуре (121±3)°С в течение 20 мин.

В исключительных случаях допускается обеззараживание кипячением в 2%-ном растворе пищевой соды или 0,5%-ном растворе нейтрального моющего средства в течение 60 мин с момента закипания. Кипячение должно происходить в закрытой емкости с полным погружением в раствор.

Отработанные пипетки обеззараживают с полным погружением в дезраствор. Продолжительность обеззараживания зависит от применяемого дезсредства.

Методика проверки эффективности обработки стеклянной лабораторной посуды: качество промывки лабораторной посуды от моющих средств и подбора режима мытья посуды при использовании нового моющего средства оценивают посредством визуального осмотра и по оценке наличия щелочных и кислых остатков, проверяемых посредством определения pH, которое должно быть в пределах диапазона 5,0-7,3.

Лабораторную посуду (флаконы, пробирки, бутылки, колбы) закрывают силиконовыми пробками. Поверх пробки (кроме пробирок) надевают бумажный (из фольги) колпачок.

Бумажный колпачок обвязывают вокруг горлышка ниткой или закрепляют резиновым кольцом.

Чашки Петри, пипетки стерилизуют завернутыми в плотную оберточную бумагу или в пеналах.

При использовании специальной лабораторной посуды и расходных материалов (флаконов с завинчивающимися пробками, металлических или силиконовых колпачков, выдерживающих автоклавирование, микробиологических пробок многоразового использования и других материалов) следует руководствоваться рекомендациями производителя.

После стерилизации посуду хранят до использования в закрытом шкафу или ящиках с крышками не более 10 сут при ненарушенной упаковке или невскрытом пенале.

Пробирки и другую лабораторную посуду до стерилизации следует хранить в чистых коробках или ящиках столов, выложенных чистой фильтровальной бумагой. Сверху подготовленную посуду также следует прикрыть фильтровальной бумагой от пыли и случайной грязи.

Вымытые предметные стекла вытирают чистой салфеткой и помещают в склянку с притертой пробкой с 96%-ным спиртом или со смесью Никифорова (смесь этилового спирта и эфира в соотношении 1:1).

6.2 Подготовка и обработка емкостей для отбора проб при санитарно-вирусологическом анализе воды различного вида водопользования

Для отбора проб воды используют специально предназначенную для этих целей одноразовую стерильную посуду или стерильные емкости многократного применения с притертыми или завинчивающимися крышками, изготовленными из материалов, не влияющих на жизнедеятельность, не оказывающих инактивирующего действия на микроорганизмы и обеспечивающих неизменность состава пробы. Посуда (емкости) многократного использования должна быть изготовлена из материалов, выдерживающих стерилизацию паром и давлением (например, стеклянные бутыли объемом 1 л или пластиковые канистры объемом 10-20 л), а также обработку химическими и/или физическими методами.

Для отбора проб различного вида вод водопользования при санитарно-вирусологическом исследовании используются стерильные емкости:

Стерилизацию лабораторной посуды сухим жаром проводят в суховоздушном шкафу одним из способов:

— при температуре (180±3)°С — в течение 1 ч с момента достижения указанной температуры;

— при температуре (160±5)°С — в течение 2,5 ч с момента достижения указанной температуры.

Материалы и лабораторную посуду (емкости), разрушающиеся при температуре от 160°С до 180°С (резина и т.п.), следует стерилизовать в паровом стерилизаторе при температуре (121±3)°С в течение 20 мин. После окончания анализа использованную лабораторную посуду (емкости) с содержимым обеззараживают автоклавированием при температуре (126±2)°С и давлении 0,15 МПа в течение 60 мин с момента достижения указанной температуры; при росте споровой микрофлоры — при температуре (132±2)°С и давлении 0,2 МПа в течение 90 мин с момента достижения указанной температуры.

При автоклавировании завинчивающиеся крышки не закручивают до конца, чтобы обеспечить замещение воздуха в бутыли паром во время повышения температуры. После стерилизации бутыли плотно закрывают завинчивающимися крышками.

После высушивания вирусологическую посуду многократного применения укладывают в металлические пеналы или заворачивают в бумагу. Бумага, используемая для обертывания лабораторной посуды, не должна разрушаться при стерилизации (например, пакеты из крафт-бумаги самоклеящиеся для паровой, воздушной, пароформальдегидной, этиленоксидной и радиационной стерилизации).

После окончания стерилизации лабораторная посуда маркируется с указанием даты стерилизации.

Срок хранения стерильной лабораторной посуды, укупоренной в бумагу или металлические пеналы, составляет не более 30 дней.

6.3 Обработка силиконовых пробок

Новые пробки кипятят в течение 30 мин в 2%-ном растворе бикарбоната натрия, многократно промывают горячей проточной водопроводной водой (кипячение и промывание повторяют дважды). Затем пробки кипятят 30 мин в дистиллированной воде, промывают и высушивают.

Пробки, бывшие в употреблении, после кипячения в 2%-ном растворе бикарбоната натрия ополаскивают проточной водопроводной водой, кипятят 30 мин в дистиллированной воде, ополаскивают дистиллированной водой, высушивают.

Резиновые пробки для флаконов заворачивают в бумагу или фольгу и стерилизуют автоклавированием по 6.1.

6.4 Порядок проведения контроля обсемененности флаконов, предназначенных для отбора проб

Контролю подвергаются все виды флаконов, используемые для отбора проб: стеклянные многоразового использования после стерилизации и пластиковые одноразового использования, поступающие стерильными от производителя.

Анализ проводят в боксе для разливки сред или в посевных комнатах (боксах) для посева питьевой воды.

Непосредственно перед исследованием проводят дезинфекционную обработку помещения (мытье бокса). После дезобработки включают дополнительно бактерицидные лампы в соответствии с 5.3.

Спецодежду для проведения анализа (халат, шапочку, четырехслойную марлевую маску) стерилизуют. Режим стерилизации спецодежды: автоклавирование при температуре (120±2)°С в течение 45 мин, (126±1)°С в течение 30 мин или при температуре (132±2)°С в течение 20 мин.

Перед входом в бокс сотрудник, проводящий испытания, тщательно моет руки теплой водой с мылом и щеткой, вытирает стерильно полотенцем, одевается в стерильный халат, шапочку, маску, надевает перчатки, обрабатывает их 70%-ным этиловым спиртом.

При наличии ламинарного укрытия исследование выполняют в спецодежде с использованием стерильных перчаток.

Во время испытаний проводят контроль воздуха на обсемененность в соответствии с процедурой, описанной в разделе 7. Результаты контроля заносят в протокол испытания.

6.4.1 Контроль обсемененности стеклянных флаконов для отбора проб при санитарно-бактериологическом анализе воды различного вида водопользования

Проводится контроль на общую обсемененность, контроль на наличие спор сульфитредуцирующих клостридий (кроме флаконов для отбора проб сточных вод).

При проведении контроля режимов суховоздушной стерилизации в полном объеме (биологический, термический, химический) с рекомендуемой периодичностью, контроль обсемененности стеклянных флаконов для отбора проб проводят не реже 1 раз в квартал.

Для каждого вида анализа отбирают флаконы в количестве 1%, но не менее 3 от общего количества партии стерилизованной посуды. Партией флаконов считают все флаконы, прошедшие стерилизацию за один цикл работы одного стерилизатора.

В случае получения результата, свидетельствующего о нестерильности хотя бы одного флакона, все партии флаконов, прошедшие обработку в данном стерилизаторе, бракуют. Забракованные партии флаконов подлежат повторной стерилизации. Выясняют возможные причины нарушения стерильности. Проводят комплексную проверку стерилизатора с одновременным использованием химического, термического (в 5 точках) и биологического контроля согласно 10.3.

Подготовительный этап

Для контроля используют:

— жидкую полноценную неселективную среду (питательный бульон, ГРМ-бульон и др.), проверенной ранее серии (раздел 11);

— плотную полноценную неселективную среду (питательный агар, ГРМ-агар и др.), проверенной ранее серии (раздел 11);

— железосульфитный агар, приготовленный согласно инструкции производителя отечественного или зарубежного производства, предназначенный для определения сульфитредуцирующих клостридий в воде;

— стерильные мембранные фильтры (нитрат- или ацетат-целлюлозные) для микробиологических целей с диаметром пор 0,45 мкм, проверенной ранее партии;

— стерильные чашки Петри диаметром 90 мм;

— стерильную водопроводную воду;

— спирт-ректификат 96%-ный для фламбирования;

— спирт-ректификат 70%-ный для дезинфекции.

Питательный бульон предварительно проверяют на стерильность. Для этого 2 пробирки от приготовленной партии среды инкубируют при температуре 37°С в течение 48 ч — учитывают наличие (отсутствие) пророста среды. При наличии пророста партию бульона выбраковывают. Контроль стерильности питательного агара и железосульфитного агара проводят в процессе исследования путем постановки отрицательного контроля.

6.5 Дистиллированная вода, применяемая в микробиологических лабораториях, и периодичность ее контроля должны соответствовать требованиям ГОСТ Р 58144.

Хранить дистиллированную воду следует в стеклянных или пластиковых бутылях, желательно с нижним сливом, закрытых крышками или пробками.

      7 Санитарно-микробиологический контроль воздуха

7.1 Санитарно-микробиологический контроль воздуха в микробиологической и паразитологической лабораториях

7.1.1 Отбор проб

Санитарно-микробиологический контроль воздуха в микробиологической лаборатории.

Лабораторные исследования воздуха в помещениях на общее микробное число (ОМЧ) проводят ежедневно с целью получения оперативной информации о санитарном состоянии воздушной среды. Контроль воздуха осуществляют аспирационным или седиментационным методами.

При получении неудовлетворительных результатов контроля исследования воздуха в помещениях лабораторий, проводят исследование качественного и количественного состава микрофлоры, с которой работает лаборатория, в соответствии с проверяемыми объектами. После анализа полученных результатов проводят мероприятия, исключающие обсеменение воздуха и поверхностей, в том числе обработку поверхностей растворами дезинфицирующих средств, активных в отношении выявленной микрофлоры, и обработку воздуха и поверхностей ультрафиолетовым облучением.

7.1.2 Аспирационный метод

Отбор проб проводят в посевных комнатах лаборатории с помощью пробоотборных устройств воздуха для бактериологического анализа, разрешенных к применению в установленном порядке и поверяемых ежегодно аккредитованной организацией.

При переносе аппаратов и устройств для отбора проб воздуха из одного помещения в другое их поверхность обрабатывают раствором дезинфицирующего средства. Столик, внутренние стыки, крышку и прочие части прибора с внутренней и внешней стороны протирают 70%-ным спиртом. Аспирационный метод не применяется для контроля воздуха укрытий с ламинарным потоком.

7.1.3 Седиментационный метод

Контроль данным методом проводят в боксах и ламинарных шкафах. Две открытые чашки Петри с питательным агаром расставляют в боксах и ламинарных шкафах на 15 мин. После экспозиции чашки закрывают, переворачивают и помещают в термостат. Инкубируют при температуре (36±2)°С. Через (24±2) ч проводят учет количества выросших колоний.

7.2 Исследования бактериальной обсемененности воздушной среды

7.2.4 Схема бактериологического исследования на стафилококк

Первый день

Для определения наличия S. aureus забор проб проводят на желточно-солевые среды на основе сред: элективно-солевой агар, стафилококк-агар, маннитолагар или среда N 10 по ГФ XII, агар Байд-Паркер. Чашки с посевами инкубируют в термостате при (36±2)°С в течение (48±2) ч.

Второй-третий день

На вышеуказанных средах стафилококк растет в виде круглых, блестящих, маслянистых, выпуклых, пигментированных колоний. Следует учитывать, что стафилококки, выделенные от человека, дают положительную лецитовителазную реакцию в 60-70% случаев. Снимают на скошенный агар для дальнейшего исследования не менее 2 колоний, подозрительных на стафилококк. Для исследования пересевают прежде всего колонии, дающие положительную лецитовителазную реакцию (образование радужного венчика). При отсутствии на чашкахтаких колоний дальнейшему исследованию подвергаются пигментированные колонии, схожие по морфологии со стафилококком. При одновременном наличии на чашках колоний стафилококка, отличающихся по пигменту, следует отвивать не менее двух колоний различного вида. Пробирки с посевом помещают в термостат при (36±2)°С на (24±2) ч.

Четвертый день

После инкубации у выделенных штаммов проверяют морфологию, тинкториальные свойства (окраска по Граму) и наличие плазмокоагулирующей активности в реакции плазмокоагуляции (РПК). Окраску по Граму проводят общепринятым методом. Если культура обладает только плазмокоагулирующей или только лецитовителазной активностью, то для окончательного ответа требуется учитывать другие признаки, позволяющие определить принадлежность штамма к виду S. aureus (ферментация маннита). При необходимости, после выделения чистой культуры, проводят определение чувствительности/устойчивости к антибиотикам, дезинфицирующим средствам, бактериофагам.

Пятый день

Учет результатов дополнительных тестов. Окончательная выдача ответа.

Исследования и учет результатов проводят по действующим нормативным документам. Полученные результаты должны регистрироваться в утвержденных по форме журналах (формулярах). В случаях превышения верхних лимитов бактериальной нагрузки в контролируемых помещениях, работы приостанавливаются. Проводят внеплановую генеральную уборку помещения с обработкой всех поверхностей дезинфицирующими средствами и обеззараживанием воздуха ультрафиолетовым облучением. Отбор повторяют после окончания проведенных мероприятий. Результаты регистрируются.

7.2.5 Для определения дрожжевых и плесневых грибов в воздухе используют отбор проб воздуха на среду Сабуро. Чашки с посевами термостатируют при температуре (24±1)°С в течение 5 сут дном вверх.

Через 3 сут термостатирования проводят предварительный учет типичных колоний или появления характерных признаков роста на жидких питательных средах.

Если в посевах на агаризованных средах присутствуют мукоровые, очень быстро растущие грибы, то снятие предварительных результатов необходимо проводить очень осторожно, не допуская того, чтобы споры этих грибов осыпались и дали рост вторичных колоний. Через 5 сут проводят окончательный учет результатов термостатирования посевов. Колонии дрожжей и плесневых грибов разделяют визуально.

Рост дрожжей на агаризованных средах сопровождается образованием крупных, выпуклых, блестящих, серовато-белых колоний с гладкой поверхностью и ровным краем. Развитие дрожжей в жидкой среде сопровождается появлением мути, запаха брожения и газа.

Развитие плесневых грибов на питательных средах сопровождается появлением мицелия различной окраски.

Для количественного подсчета отбирают чашки, на которых выросло от 15 до 150 колоний дрожжей и/или от 5 до 50 колоний плесневых грибов.

При необходимости для разделения колоний дрожжей и плесневых грибов проводят микроскопические исследования. Для этого из отдельных колоний или из посевов на жидкую среду готовят препараты методом раздавленной капли. На предметное стекло наносят каплю стерильной водопроводной воды. Затем в эту каплю прокаленной иглой вносится часть колонии или петлей наносят каплю культуральной жидкости. Полученная суспензия покрывается покровным стеклом.

Если при исследовании на питательных средах обнаружен рост дрожжей и плесневых грибов и их присутствие подтверждено микроскопированием, то данные фиксируют в журнале (формуляре) и проводят мероприятия, исключающие обсеменение воздуха и поверхностей плесневыми грибами. Затем проводят повторный отбор воздуха.

      8 Санитарно-паразитологический контроль воздуха в паразитологической лаборатории

8.1 При получении неудовлетворительных результатов проб при осуществлении контроля проверяемых объектов каждая лаборатория самостоятельно определяет номенклатуру паразитологических показателей для контроля воздуха. Исследования обсемененности воздушной среды на яйца гельминтов и цисты простейших проводят в помещениях в зависимости от их функционального назначения, в соответствии с планом производственного контроля в паразитологических лабораториях, в которых возникает необходимость контроля воздушной среды по паразитологическим показателям.

8.3 Если препарат получился плотным, его просветляют 1-2 каплями воды или 50% раствора глицерина. Под микроскопом среди пылевых частиц хорошо видны яйца гельминтов. Микроскопирование препаратов может производиться на обследуемом объекте сразу после отбора проб. Сбор проб пыли и воздуха непосредственно на предметное стекло, покрытое клейкой смазкой, исключает использование фильтров, центрифугирование, приготовление мазков и другие действия, во время которых могут быть потери яиц гельминтов или нарушение их целостности. Кроме того, использование клейких стекол ускоряет время отбора проб и позволяет сразу составить план мероприятий по предупреждению загрязнения и дегельминтизации внешней среды, если такие загрязнения будут выявлены.

      9 Методы исследования микробной и паразитарной обсемененности поверхностей

9.1 Для контроля микробной контаминации рабочих поверхностей используется метод смывов.

9.1.1 Смывы берут перед работой не реже 1 раза в месяц на стафилококк и микроорганизмы, с которыми работает данная лаборатория. В лабораториях, проводящих паразитологические исследования, дополнительно берут смывы на наличие яиц гельминтов, цист и ооцист патогенных простейших и т.д. Пробы отбирают с поверхности рабочих столов, ручек ящиков на каждом рабочем месте, ручек и полок холодильников, термостатов, наружных деталей приборов, со стен бокса, с дверных ручек и т.д., определяя потенциально критические точки. Методы санитарно-паразитологического исследования смывов с поверхностей приведены в приложении Б.

9.1.2 Для контроля используют пробирки с 0,1%-ной пептонной водой, допускается стерильный физиологический раствор 0,85% или другая разрешенная транспортная среда с вмонтированными стерильными палочками с ватными тампонами на конце. Возможно использование стерильных зонд-тампонов (свабов, тупферов и т.д.) промышленного производства.

9.1.4 При применении дезинфицирующего агента используется нейтрализатор — стерильный раствор, химический состав которого зависит от действующих веществ дезинфицирующих средств:

— для галоидоактивных (хлор-, бром- и йодактивные) и кислородактивных (перекись водорода, ее комплексы солями, надуксусная кислота, озон) — 0,1-1%-е растворы тиосульфата натрия;

— для четвертичных аммониевых солей (алкилдиметилбензиламмоний хлорид, дидецилдиметиламмоний хлорид и др.), аминов производных гуанидина (полигексаметиленгуанидин гидрохлорид, хлоргексидин биглюконат и др.) — универсальный нейтрализатор, содержащий Твин 80 (3%), сапонин (0,3-3%), гистидин (0,1%), цистеин (0,1%);

— для альдегидов (глутаровый альдегид, глиоксаль, формальдегид, ортофалевый альдегид) — 1%-ный раствор пиросульфита (метабисульфита) натрия или указанный выше универсальный нейтрализатор;

— для кислот — щелочи в эквивалентном количестве;

— для щелочей — кислоты в эквивалентном количестве;

— для спиртов — вода;

— для композиционных средств — универсальный нейтрализатор;

— в случае если в состав дезсредства входят окислители, в нейтрализатор добавляют тиосульфат натрия (0,1-1%).

Пробы с отобранными смывами с поверхностей помещают в термостат и термостатируют при температуре (36±2)°С в течение 18-24 ч. Проросшие чашки не используют. Через сутки тампоном из пробирки со смывом пробы проводят несколько раз по поверхности питательной среды на двух параллельных чашках Петри, затем чашки Петри помещают в термостат для инкубации и проводят исследования.

9.2 Методика исследования смывов на бактериальную обсемененность поверхностей бактериями группы кишечной палочки (БГКП)

9.3 Методика исследования смывов для обнаружения стафилококков

9.3.2 У выросших микроорганизмов определяют отношение к окраске по Граму, способность коагулировать плазму крови кроликов, образовывать каталазу, ацетон, ферментировать мальтозу в аэробных условиях. Вместо мальтозы можно использовать маннит.

9.3.3 Если в посеве обнаружены характерные колонии микроорганизмов, являющиеся грамположительными кокками, обладающими лецитиновой и плазмокоагулирующей активностью, образующими каталазу, ферментирующими мальтозу (или маннит) в аэробных условиях, выдается ответ: «Staphylococcus aureus обнаружен». Если из вышеперечисленных признаков отсутствует лецитиназная или плазмокоагулирующая способность, в ответе следует указать: «Обнаружен коагулазоположительный стафилококк, не обладающий лецитиназной активностью» или «Обнаружен лецитиназоположительный стафилококк, не обладающий плазмокоагулирующей активностью».

9.4 Методика исследования смывов для обнаружения синегнойной палочки

— на среде N 9 — обнаруживается пигмент синегнойной палочки пиоцианин;

— на среде «Блеск» — колонии сплошь покрыты золотистым налетом или имеют золотистые вкрапления, максимально проявляется пигмент через 42±2 ч;

— на агаре стриклозаном бактерии вида Pseudomonas aeruginosa образуют колонии синие, сине-зеленые, желто-зеленые или зеленые;

— на агаре с цетримидом бактерии вида Pseudomonas aeruginosa образуют колонии голубого, сине-зеленого, желто-зеленого цвета или могут быть непигментированными.

Для последующей идентификации подозрительные колонии пересевают на скошенный агар.

9.5 Методика исследования смывов для обнаружения плесневых и дрожжеподобных грибов

Исследования и учет результатов проводят по 7.2.5.

9.6 Методы исследования паразитарного загрязнения поверхностей

9.6.1 Определение загрязнения возбудителями паразитарных болезней лабораторных поверхностей (стены, столы, поверхности микроскопа, лабораторное оборудование, ручки кранов, рабочие поверхности вытяжных шкафов, халатов, спецодежды, рук персонала и т.д.) проводится не реже 1 раза в месяц, отбирается не менее 10 проб смывов с поверхностей на 1 помещение, в котором проводятся паразитологические исследования в соответствии приложением Б. При взятии проб необходимо соблюдать определенную очередность. Например, пробы вначале берут в комнатах с рабочих поверхностей, оборудования, столов, рук персонала, затем с кранов раковин, дверных ручек и в санузле лаборатории.

9.6.2 Для отбора смывов применяют кисточки из плотной щетины (типа беличьих), смоченные в 1%-ном растворе едкого натра, или в 10%-ном растворе глицерина, или 1%-ном растворе стирального порошка. В центрифужные пробирки наливают до половины объема 10%-ный раствор глицерина.

9.6.3 Для каждой группы лабораторных предметов или поверхностей берут отдельную промаркированную центрифужную пробирку и кисточку, которые нумеруются (номер кисточки и пробирки должны совпадать). В одну пробу, т.е. в пробирку, рекомендуется собирать смывы с нескольких однородных предметов.

9.6.4 Смывы с рук персонала берут у каждого отдельно, чтобы при обнаружении яиц гельминтов или/и цист/ооцист кишечных простейших можно было знать, какой именно сотрудник нарушает правила гигиены.

Для снятия яиц гельминтов с рук рекомендуется мыть их раствором питьевой соды или 1%-ным раствором едкого натра; смывные воды центрифугируют, осадок можно также профильтровать в аппарате Гольдмана и затем исследовать фильтры.

9.6.5 Исследование смывов на яйца гельминтов. Метод центрифугирования

Ход исследования

Кисточки со смывами ополаскивают в жидкости пробирки. Центрифугируют полученные пробы в этих же пробирках, надосадочную жидкость сливают. Осадок помещают на предметное стекло и микро-скопируют. Плотный осадок делят на несколько предметных стекол.

9.6.5.1 Исследование смывов на яйца гельминтов

Ход исследования

В пробирку доливают флотационный раствор до образования выпуклого мениска, накрывают ее обезжиренным покровным стеклом до полного соприкосновения с поверхностной пленкой раствора. Время экспозиции 12-15 мин. При использовании флотационного раствора хлорида натрия — 20-25 мин. Затем покровное стекло снимают пинцетом и полученную висячую каплю на покровном стекле аккуратно переносят на предметное стекло в каплю 50%-ного раствора глицерина. Полученный препарат микроскопируют при 80-150-кратном увеличении.

Готовить пробы к исследованию одновременно следует партиями не более 5-6 пробирок, так как при большом количестве пробирок увеличивается время экспозиции, и яйца, поднявшиеся в поверхностную пленку, покрываются кристаллами соли, что затрудняет их обнаружение.

Методы исследования смывов на цисты/ооцисты простейших представлены в приложении Б.

9.7 Санитарно-вирусологический методы исследования поверхностей в вирусологических лабораториях

Смывы в микроцентрифужных пробирках в фосфатно-солевом буфере (PBS) готовы для экстракции рибонуклеиновой кислоты (РНК) (выделение из 200 мкл образца). Смывы хранению не подлежат и сразу направляются на исследование с использованием методов амплификации нуклеиновых кислот на наличие энтеровирусов человека, вирусов гепатита А, ротавирусов, норовирусов.

      10 Порядок проведения контроля качества осуществления стерилизации и обеззараживания

Плановый контроль работы всех стерилизаторов в объектах надзора проводят в порядке государственного санитарного надзора не реже 2 раз в год. Самоконтроль работы стерилизатора проводят при каждой загрузке аппарата.

Критическими параметрами, существенными для достижения надежной стерилизации и требующими контроля, являются:

— для паровой стерилизации — температура стерилизации, время стерилизационной выдержки и наличие насыщенного водяного пара;

— для воздушной стерилизации — температура стерилизации и время стерилизационной выдержки.

Контроль температурного параметра режимов работы паровых стерилизаторов осуществляют с использованием термометра ртутного стеклянного максимального с диапазоном измерения от 0 до 150°С (ТП-7). Погрешность измерения не должна превышать ±1°С.

Упакованные термометры нумеруют и размещают в контрольные точки 1 и 2 камеры паровых стерилизаторов в соответствии с 10.1.

По окончании цикла стерилизации регистрируют показания термометров и сопоставляют их между собой, а также с номинальной температурой стерилизации, и фиксируют показания в журнале.

Ежедневно перед началом рабочей смены проводят визуальный контроль состояния уплотнителей камеры стерилизатора. При работе стерилизатора осуществляют контроль за отсутствием выпуска пара из-под уплотнителя и установку давления на манометре парового стерилизатора.

Не допускается использование одного стерилизатора для режимов стерилизации лабораторной посуды, одежды и питательных сред и обеззараживания патогенного материала.

10.1 Химический тестовый контроль режимов паровой стерилизации

Химический контроль проводят каждый цикл. Для контроля используют бумажные индикаторы стерилизации 4-5 класса (НПФ «Винар» или аналог) в соответствии с ГОСТ Р ИСО 15882 или запаянную ампулу или трубку, заполненную смесью химического соединения с органическим красителем или только химическим соединением (веществом), изменяющим цвет при достижении определенной для него температуры, позволяющие обнаружить несоблюдение условий стерилизации, обусловленное технической неисправностью стерилизаторов, нарушением правил их загрузки и упаковывания изделий, ошибкой в установке параметров режимов или их сбоем.

Методика контроля паровой стерилизации

В контрольных точках рабочей камеры укладывают индикаторные полоски или ампулы, которые прикрепляются снаружи стерилизационной упаковки или на бирке стерилизационной коробки во всех контрольных точках (см. таблицу 1) или внутри стерилизуемых изделий.

Таблица 1 — Число контрольных точек в зависимости от емкости камеры

Емкость камеры парового стерилизатора (дм )	Число контрольных точек в стерилизационной камере
100	5
100-750	15
Св. 750	20

— в горизонтальном паровом стерилизаторе точка 1 должна находиться у загрузочной двери, точка 2 — у противоположной стенки, точки 3-5 должны быть равномерно распределены по длине;

— в вертикальном паровом стерилизаторе точка 1 должна находиться в верхней части камеры, точка 2 — в нижней части камеры, точки 3-5 должны быть равномерно распределены по высоте камеры.

В точках 1 и 2 индикаторные полоски или ампулы располагают вне стерилизуемых изделий. В остальных точках индикаторные полоски или ампулы располагают в центре и прикрепляют к изделиям, подготовленным для стерилизации.

Методика контроля суховоздушной стерилизации

В контрольных точках рабочей камеры укладывают герметично запаянные ампулы-флаконы с химическим тестовым веществом или индикаторные полоски (см. таблицу 2), которые прикрепляют к упаковкам или стерилизуемым изделиям.

Таблица 2 — Число контрольных точек в зависимости от емкости камеры

Емкость камеры воздушного стерилизатора (дм )	Число контрольных точек в стерилизационной камере
До 80	5
Св. 80 однокамерные	15
Св. 80 двухкамерные	30

В случае 5 точек — точка 1 располагается в центре камеры, а точки 2, 3, 4 и 5 располагаются в нижней части камеры по углам. Точки 2 и 5 находятся перед загрузочной дверью справа и слева (соответственно), а точки 3 и 4 в глубине камеры у задней стенки также справа и слева.

В случае 15 точек — точки 1, 2 и 3 располагаются в центре камеры на трех уровнях (полках) сверху вниз соответственно, а точки 4-15 по углам также на трех уровнях (точки 4-7 — низ; точки 8-11 — середина; точки 12-15 — верх). Угловые точки нумеруются против часовой стрелки, начиная с правого ближнего угла.

В случае 30 точек — расположение как для 15 точек повторяется для каждой камеры.

Каждая контрольная точка должна быть расположена на расстоянии не ближе 5 см от стенок камеры.

Учет результатов

По окончании цикла стерилизации цвет индикаторной метки индикаторов сравнивают с цветом эталона. При соблюдении условий паровой и суховоздушной стерилизации в точке размещения индикатора индикаторная метка изменяет свой цвет на темно-фиолетовый, соответствующий цвету эталона (конечный цвет) или темнее его. Если индикаторная метка полностью или частично сохранила красно-оранжевый цвет или в пробирке остался нерасплавленный химический тест в какой-либо точке, то указывают на неэффективную стерилизацию. При обнаружении неудовлетворительной работы стерилизатора партию стерилизуемых объектов считают непростерилизованной.

«Наружные» индикаторы подлежат осмотру непосредственно после завершения цикла стерилизации с последующим подклеиванием в журнал контроля работы стерилизаторов.

«Внутренние» индикаторы подлежат осмотру после вскрытия стерилизационной упаковки/стерилизационной коробки перед применением стерилизованных изделий. Эти индикаторы подклеивают в журнал контроля после использования стерильных упаковок.

10.2 Термический контроль

Термический контроль проводят 2 раза в месяц. Для контроля используют поверенный максимальный термометр с ценой деления не более 1°С и диапазоном измерений, превышающим контролируемую температуру. Термометр размещают в середине стерилизационной камеры. После окончания цикла стерилизации и остывания снимают показания термометра. Для определения истинного значения максимальной температуры цикла стерилизации к снятому с термометра показанию прибавляют соответствующую поправку, указанную в паспорте на данный термометр.

Результаты заносят в журнал по регистрации режимов стерилизации и заверяют подписями исполнителя.

10.3 Биологический контроль

Биологический контроль осуществляется 2 раза в год. При выполнении биологического контроля используют биотесты, предназначенные для конкретного вида паровой или суховоздушной стерилизации, разрешенные к применению на территории РФ. Бактериологический метод контроля предназначен для контроля эффективности работы стерилизаторов на основании выявления гибели спор тест-культур.

После термостатирования проводят учет изменения цвета питательной среды. В отрицательном контроле (стерильная пробирка) цвет среды не должен измениться. В пробирке с контролем культуры цвет среды должен измениться на цвет, указанный в паспорте, что свидетельствует о наличии жизнеспособных спор.

Работа парового стерилизатора считается удовлетворительной, если цвет питательной среды во всех биотестах, подвергавшихся стерилизации, остался неизменным. Если цвет изменился хотя бы в одном тесте, стерилизация признается неэффективной.

Результаты заносят в журнал по регистрации режимов стерилизации и заверяют подписью исполнителя.

10.4 Обеззараживание отходов с применением СВЧ-установки

Отходы в микробиологических лабораториях, соответствующие классу опасности Б, собираются непосредственно на местах их образования в одноразовые полимерные термостойкие пакеты с красной или желтой маркировкой, которые предварительно помещают внутрь стандартных жестких, термостойких, герметично закрывающихся полимерных баков (контейнеров) многоразового использования (поставляются в комплекте с СВЧ-установкой). Герметично закрытые в баках (контейнерах) отходы доставляются к месту их обеззараживания в СВЧ-установке. Предварительной дезинфекции отходов не требуется.

Кроме СВЧ-установки для обеззараживания отходов применяются методы в соответствии с [1].

Порядок работы на местах сбора медицинских отходов:

— термостойкие пакеты с красной или желтой маркировкой расправляются и вкладываются внутрь стандартных термостойких контейнеров-баков;

— верхние кромки пакета отгибают наружу за края бака;

— производят сбор инфицированных отходов и укладку их (без уплотнения) в приготовленный пакет (бак).

10.4.1 Контроль эффективности обеззараживания отходов осуществляется термохимическим и бактериологическим методами. Для контроля применяются в установке одноразовые индикаторы с липким слоем с нанесенными на них двумя цветными метками — индикаторной меткой и эталоном сравнения.

Пример — В качестве индикаторов может быть использован СанИС-3 132/90 (134/60) или аналоги.

Красно-оранжевый цвет индикаторной метки необратимо меняется в зависимости от соблюдения или несоблюдения требуемых условий дезинфекции.

Темно-фиолетовый эталон сравнения показывает конечный цвет индикаторной метки при соблюдении условий дезинфекции.

При соблюдении условий дезинфекции в точке размещения индикатора индикаторная метка изменяет свой цвет на темно-фиолетовый, соответствующий цвету эталона (конечный цвет) или темнее его.

Если индикаторная метка полностью или частично сохранила красно-оранжевый цвет, то условия дезинфекции не были соблюдены.

При получении неудовлетворительного результата контроля проверяют правильность установки параметров и соблюдение правил и норм загрузки в соответствии с инструкцией по эксплуатации. Установку разрешается использовать после устранения причин неудовлетворительной работы и получения положительных результатов контроля. Использованные индикаторы подклеиваются в журнал контроля работы СВЧ-установки в выделенные для этого колонки.

Контроль обеззараживания отходов в установке с помощью термохимических индикаторов осуществляется при каждой закладке с дальнейшей регистрацией результатов в журнале (формуляре).

Бактериологический метод контроля работы установки осуществляется с помощью типовых биотестов. Биотесты размещают в контрольные точки среди обеззараживаемого материала (3-5 точек на разных уровнях).

После окончания процесса обеззараживания биотесты высевают на питательные среды.

Контроль с помощью биотестов проводится не реже 2 раз в год, и результаты также регистрируются в установленном порядке.

      11 Порядок проведения контроля за питательными средами

Контроль качества питательных сред должен осуществляться на всех этапах технологического процесса, начиная от момента закупки среды до непосредственного использования в анализе и включать следующие этапы:

— проверку документации и визуальный контроль питательных сред при их получении;

— контроль условий и сроков хранения питательных сред;

— контроль питательных сред на этапе приготовления;

— контроль биологических свойств питательных сред;

— контроль на этапе использования питательных сред.

Применение питательных сред без подтверждения их качества не допускается. Результаты выполнения процедур контроля качества должны быть документально зафиксированы.

11.1 Проверка документации и визуальный контроль питательных сред

Контроль осуществляют при каждом поступлении в лабораторию новых сред.

Обязательным условием поставки питательных сред является наличие следующих сопроводительных документов:

— регистрационного удостоверения;

— паспорта отдела контроля организации-изготовителя на реализуемую серию препарата;

— инструкций по применению на русском языке;

— этикеток на русском языке.

Среды импортного производства должны иметь сертификаты качества серии ИСО 9000.

При получении питательных сред необходимо проверить целостность упаковки (оценивается визуально) и наличие сопроводительной документации, которая должна содержать следующую информацию:

— название среды и ее назначение;

— название предприятия-изготовителя;

— номер серии;

— номер протокола контрольных испытаний;

— дату изготовления;

— срок годности;

— состав среды;

— условия хранения;

— рецептуру приготовления;

— описание внешнего вида и консистенции сухой и готовой среды;

— условия и длительность хранения готовой среды.

Обо всех обнаруженных отклонениях необходимо сообщить руководителю лаборатории.

11.2 Контроль условий и сроков хранения питательных сред

Данный этап контроля позволяет обеспечить правильность и постоянство условий хранения сред, а также своевременное пополнение их запаса.

Визуальный контроль питательных сред осуществляют 1 раз в неделю на отсутствие пророста, изменение цвета и прозрачности.

Сухие питательные среды и реактивы, если не указаны особые условия хранения, необходимо поместить в сухое, защищенное от света место, с температурой воздуха 10-25°С.

Материалы, требующие пониженной температуры хранения, необходимо поместить в холодильник с соответствующей степенью охлаждения.

Особое внимание следует уделить сохранению герметичности вскрытых упаковок со средами, так как повышение влажности и комкование сухой питательной среды существенно ухудшает ее качество. Если питательная среда упакована в пакет из ламинированной бумаги и весь объем среды не используется за 1 раз, то после вскрытия пакета оставшуюся часть среды желательно перенести в чистую сухую емкость оранжевого стекла (или другого светозащитного инертного материала) с плотно закрывающейся крышкой.

Готовые питательные среды хранят при температуре 2-8°С. Срок хранения готовой питательной среды определяется изготовителем.

Сухие питательные среды с истекшим сроком годности, но с не изменившимся цветом и консистенцией, подвергают количественным методам контроля питательных сред по биологическим показателям с целью принятия решения о продлении срока годности.

Все приготовленные среды следует промаркировать с указанием названия среды, а также даты приготовления и срока годности. Дату приготовления питательной среды заносят в журнал.

Параметры микроклимата в местах хранения питательных сред проверяют ежедневно и результаты проверки заносят в журнал (формуляр) и заверяют подписью исполнителя.

11.3 Контроль питательных сред на этапе приготовления

Для приготовления питательных сред и растворов, используемых в микробиологическом анализе, допускается применение химических веществ по степени чистоты не ниже ЧДА. Требования к качеству воды для приготовления питательных сред для микробиологических анализов изложены в ГОСТ Р 58144.

При условии, что приобретена продукция надлежащего качества, одним из основных факторов, определяющих качество и дальнейшую пригодность питательной среды, является правильность ее приготовления.

Приготовление сред должно осуществляться со строгим соблюдением рецептуры приготовления и условий стерилизации, определенных изготовителем.

Контроль питательных сред на этапе приготовления включает:

— оценку внешнего вида готовой среды;

— измерение pH готовой среды;

— определение стерильности (отсутствия контаминации) готовой среды;

— постановку качественного контроля биологических свойств среды (раздел 11).

Контроль питательных сред на этапе приготовления проводят при каждом приготовлении среды.

11.3.1 Оценка внешнего вида готовой среды (визуальный контроль)

Оценку внешнего вида питательной среды проводят визуально по ниже приведенным параметрам.

Цвет, прозрачность и консистенция сухой и приготовленной среды должны быть типичны для данного продукта и соответствовать описанию изготовителя. Несоответствие заявленным в паспорте параметрам среды свидетельствует о ее непригодности.

Некоторыми очевидными ошибками при приготовлении сред являются:

— потемнение среды вследствие перегревания и недостаточного перемешивания;

— неполное растворение порошкообразной среды;

— образование осадка.

В агаризованных средах осадок может образовываться вследствие продолжительной стерилизации, повторных плавлений твердого агара или длительного содержания расплавленного агара при высокой температуре. В этих случаях появление осадка свидетельствует о непригодности питательной среды.

Кроме того, агаризованные среды могут образовывать хлопьевидный осадок, если расплавленная среда остается в водяной бане при температуре от 43 до 45°С более 30 мин, вследствие начинающегося процесса застывания агара. Такой хлопьевидный осадок агара можно рассеять путем повторного нагревания среды до 60°С. Если осадок не рассеялся, это свидетельствует о непригодности питательной среды.

11.3.2 Измерение pH

Значение водородного показателя определяют с помощью pH-метра по 5.10. Возможно использование бумажной индикаторной системы с шагом измеряемого диапазона не более 0,3 единиц при промежуточных измерениях в ходе приготовления питательной среды.

В готовых жидких средах и гидролизатах определение pH проводят непосредственно в растворе.

В готовых плотных агаровых средах pH определяют после их охлаждения до 45-50°С. При этом необходимо особо тщательно отмывать электрод после измерения pH в агаризованных средах теплой дистиллированной водой.

11.3.3 Определение стерильности

Определение стерильности (для стерилизуемых сред) и отсутствия контаминации (для нестерилизуемых сред) проводят путем инкубации чашки или пробирки с исследуемой средой в термостате, при температуре и в течение времени, определенных для этих сред методическими документами по исследованию воды.

По истечении срока инкубации на (в) исследуемых питательных средах должны отсутствовать визуально определяемые признаки роста микроорганизмов. Результаты регистрируют в журнале.

11.4 Контроль биологических свойств питательных сред

Оценка биологических (ростовых) свойств питательных сред проводится по следующим показателям.

Чувствительность — максимальное разведение тестовой культуры, при котором на всех засеянных чашках (во всех пробирках) обнаруживается рост.

Скорость роста — минимальное время инкубации после посева культур, достаточное для визуального выявления роста (выражается в часах).

Дифференцирующие свойства — оцениваются по выраженности основных отличительных признаков, характеризующих рост тестовых штаммов на данной питательной среде.

Кроме того, для дифференциальных сред необходимо определять ингибирующее действие среды. Ингибирующее действие среды определяется как в отношении основного тестового микроорганизма, так и по отношению к сопутствующим микроорганизмам.

Оценка ингибирующих свойств не проводится для жидких и полужидких сред (например, для полужидких сред Гисса, лактозопептонной среды, глюкозопептонной среды).

Оценка ингибирующих свойств проводится по двум показателям:

— процент извлекаемости — процентное соотношение среднего значения количества колоний, выросших на исследуемой среде, к среднему значению количества колоний, выросших на контрольной среде;

— показатель ингибиции — степень подавляющего воздействия на постороннюю микрофлору, выражается минимальным разведением, при котором полностью отсутствует рост посторонней флоры.

Основным тестовым микроорганизмом для оценки биологических свойств среды, используемых для текущего санитарно-бактериологического контроля воды, является E. coli. Дополнительно используются следующие тест-штаммы:

— для выявления дифференцирующих свойств среды — Salmonella typhimurium (на среде Эндо круглые, бледно-розовые колонии) или Shigella sonnei «S-form» (на среде Эндо круглые, прозрачные, бледно-розовые) в качестве вида, не ферментирующего лактозу; Enterococcus faecalis; Pseudomonas aeruginosa или Pseudomonas fluorescens; Staphylococcus aureus; Aspergillus brasiliensis; Candida albicans;

— при определении показателя ингибиции посторонней микрофлоры, например на среде Эндо — Staphylococcus aureus.

Контроль биологических свойств готовых питательных сред включает два этапа: качественный и количественный контроль, каждый из которых имеет свое целевое предназначение.

Задачей качественного контроля является выявление грубых нарушений технологии приготовления, приводящих к выраженному снижению ростовых и/или дифференцирующих свойств. Качественный контроль проводят после каждой варки среды.

Количественный контроль позволяет выявлять относительные изменения (ухудшение) ростовых свойств из-за ряда причин, возникающих на этапах транспортирования, хранения, приготовления, стерилизации, а также при изменении технологических требований в процессе производства питательных сред, в результате которых они оказываются менее эффективными.

Количественный контроль выполняется:

— при поступлении каждой новой партии среды;

— при необходимости решения вопроса о продлении срока годности среды либо возможности ее дальнейшего использования в случае выявления нарушений условий хранения.

Учитывая, что разные серии питательных сред одного производителя иногда имеют различие по качеству, контролю подлежит каждая серия среды поступившей партии.

Количественный контроль также может служить инструментом выбора более эффективной среды серии продукции, предлагаемой на современном рынке.

11.4.1 Качественный контроль

В процессе качественного контроля оценивают принципиальную способность основного тестового штамма расти на данной среде, а также наличие характерных дифференцирующих признаков для специфических сред.

Качественный контроль выполняется лабораторией после каждой варки питательной среды.

11.4.1.1 Методика исследования

Накануне исследования тестовую культуру готовят, как указано в 13.3.4.

Контроль выполняют путем посева тестового штамма в жидкие, полужидкие или на плотные питательные среды с помощью общепринятых методик. Для плотных сред метод посева должен обеспечивать получение изолированных колоний микроорганизмов (например, метода «штриха»). Пробирки и чашки с посевами инкубируют в термостате при (36±2)°С в течение 18-24 ч.

11.4.1.2 Оценка результатов качественного контроля

Среду считают пригодной, если по истечении срока инкубации тестовый штамм дает хорошо различаемый рост, со всеми типичными для него отличительными признаками, которые предполагается выявлять на данной среде.

Этими признаками могут быть: помутнение жидкой или полужидкой среды, изменение цвета, образование газа, отличительная форма, структура, окраска колоний, наличие и диаметр зоны изменения цвета и прозрачности среды вокруг колоний. Результаты качественного контроля заносят в журнал.

11.4.2 Количественный контроль

Выполнение количественного контроля должно осуществляться лабораторией, имеющей лицензию на работу с необходимыми патогенными микроорганизмами, аттестованной (аккредитованной) в этой области и располагающей персоналом соответствующей квалификации.

11.4.2.1 Подготовительный этап

11.4.2.1.1 Питательные среды

Для исследования следует использовать свежеприготовленные среды одной варки. Исследуемые и контрольные среды готовят согласно инструкции изготовителя.

Среды, предназначенные для прямого поверхностного посева, разливают в чашки Петри слоем не менее 2 мм и предварительно асептически подсушивают одним из следующих способов.

Перевернутые чашки Петри с открытыми крышками выдерживают в термостате или сушильном шкафу при температуре 25-50°С до исчезновения капель влаги с поверхности агара. Не пересушивать.

Закрытые неперевернутые чашки Петри выдерживают в ламинарном боксе в течение ночи.

Во избежание загрязнения и когда слои среды высушивают не в ламинарном боксе, среду всегда высушивают таким образом, чтобы поверхность среды, инокуляция которой будет проводиться, была перевернута вниз.

В качестве неселективной среды при определении ингибирующихи дифференцирующих свойств контролируемой среды, используют мясопептонный агар, питательный агар, ГРМ-агар, триптон-соевый агар или их аналоги.

11.4.2.1.2 Разбавитель

Для исследования необходимо использовать стерильный физиологический раствор, содержащий 0,1% (по массе) пептона. При невозможности приготовления данного разбавителя допускается использование стерильного физиологического раствора без пептона.

11.4.2.1.3 Подготовка инокулята

В случае если концентрация микроорганизмов в разведениях значительно отклоняется от расчетной и/или не соблюдена кратность разведения, данный инокулят тестового штамма непригоден для дальнейшего использования. Подготовку инокулята необходимо повторить.

Для показателей, требующих определения количества внесенных микроорганизмов, рассчитывают посевную дозу. Посевная доза — объем конкретного разведения, содержащий необходимое для посева количество жизнеспособных клеток тестового микроорганизма. В контрольном посеве должно вырастать не менее 25 колоний. Расчет дозы выполняют основываясь на ранее определенных концентрациях тестового микроорганизма в 6-м и 7-м разведениях, исходя из требований, что посев на одну чашку не должен превышать 50-100 микробных клеток. При правильно выполненном разведении посевная доза составляет 50-100 мкл суспензии из 6-го разведения.

После расчета посевной дозы определяют необходимое количество повторов посевов (не менее 5) исходя из расчета, что суммарное количество колоний на всех чашках на одной среде должно составлять не менее 200 КОЕ.

Приготовленные суспензии можно использовать, если они были охлаждены сразу же после приготовления и произведения контрольных высевов, и не хранились более 24 ч. Перед исследованием инокулят следует тщательно перемешивать, чтобы добиться однородности суспензии микроорганизмов.

11.4.2.2 Методики посевов

11.4.2.2.1 Посев в жидкую питательную среду

Данный метод посева используется при количественном определении показателей ростовых и дифференцирующих свойств жидких и полужидких питательных сред. Суспензию нужного разведения тестовой культуры тщательно перемешивают, чтобы добиться ее однородности. Посевную дозу суспензии асептически помещают при помощи пипетки в пробирку с исследуемой питательной средой и перемешивают. Инкубируют в термостате при (36±2)°С в течение 18-24 ч.

11.4.2.2.2 Посев прямым поверхностным методом

Суспензию нужного разведения тестовой культуры тщательно перемешивают, чтобы добиться ее однородности. Посевную дозу суспензии асептически помещают при помощи пипетки, на поверхность заранее подготовленной питательной среды (11.4.2.1.1). Стерильным шпателем культуру распределяют по поверхности питательного агара, чтобы добиться равномерного распределения инокулята. После впитывания инокулята чашки переворачивают и инкубируют в термостате при (37±1)°С в течение 18-24 ч.

11.4.3 Определение показателей «чувствительности» и «скорости роста»

11.4.3.1 Методика исследования

Посев каждой дозы инокулята выполняют не менее чем на 3 чашки или пробирки в соответствии с 11.4.2.1.3 Посевы инкубируют при (36±2)°С в течение 24 ч. Визуальный учет скорости роста культуры в каждом взятом в опыт разведении микробной взвеси производят для плотных сред через 12 и 24, а для жидких — через 3, 6 и т.д. часов инкубации.

11.4.3.2 Оценка результата

При отсутствии роста в одной пробирке или на одной чашке с посевом разведения, указанного в паспорте как чувствительность, опыт повторяется на удвоенном числе пробирок или чашек. Приемлемым считается наличие роста в 5-ти посевах оцениваемого разведения из 6-ти. Если при повторном исследовании чувствительность среды не соответствует паспортному значению, то ее бракуют.

Скорость роста контрольной культуры — минимальное время инкубации посевов, за которое при соответствующем разведении обеспечен отчетливый видимый невооруженным глазом рост культуры во всех пробирках с жидкими питательными средами (помутнение, наличие пленки, изменение цвета среды) или формирование типичных, легко дифференцируемых колоний на чашках с плотной средой.

Скорость роста не должна превышать время инкубации, указанное в нормативных документах для исследований, в которых эта среда используется.

Результат заносят в протокол оценки питательной среды по биологическим показателям.

11.4.3.3 Оценка дифференцирующих свойств на примере среды Эндо и ее аналогов

Для оценки дифференцирующих свойств сред используют два тестовых штамма, отличающихся по основному дифференцируемому признаку ферментации лактозы E. coli (Lac+) и Shigella sonnei или Salmonella typhimurium (Lac-).

11.4.3.4 Подготовка инокулятов

Разведения тестовых штаммов готовят, как указано в 11.4.2.1.3. Посевная доза должна содержать 50-100 микробных клеток на чашку, рассчитанная по контрольному посеву.

11.4.3.5 Методика исследования

Приготовленные смеси тщательно перемешивают. Из каждой смеси в соответствии с рассчитанной посевной дозой (по 50-100 мкл) засевают поверхностным методом не менее чем на 3 чашки с исследуемой средой. Посевы инкубируют при (37±1)°С в течение 18-24 ч.

По окончании инкубации учитывают выраженность дифференциальных признаков при росте колоний тестового микроорганизма E. coli (Lac+), ферментирующего лактозу на исследуемой среде (характерный цвет колоний, среды) и их отсутствие в посевах тестового штамма Shigella sonnei или штамма Salmonella typhimurium (Lac-), не обладающего способностью к ферментации лактозы.

11.4.3.6 Оценка результатов

Дифференцирующие свойства среды считают удовлетворительными, если она обеспечивает определенный в паспорте перечень признаков и степень их выраженности у тестового штамма, обладающего искомыми свойствами. Результат заносится в журнал оценки питательной среды по биологическим показателям.

11.4.4 Определение процента извлекаемости (% всхожести)

Этот показатель позволяет выявить и оценить наличие и степень ингибирующего влияния исследуемой среды на E. coli по сравнению с контрольной средой. В качестве контрольной используют ранее проведенную неселективную среду.

Определение процента извлекаемости (% всхожести) особенно важно для сред, используемых в методах прямого количественного подсчета (прямой посев исследуемой воды на чашку или фильтр), где наличие даже относительного ингибирующего влияния среды на искомые микроорганизмы будет искажать результат и снижать чувствительность метода.

11.4.4.1 Методика исследования

Готовят инокуляты для посева и осуществляют расчет посевной дозы как указано в 11.4.2.1.3.

11.4.4.2 Посев на контрольную и исследуемую среду выполняют прямым посевом согласно 11.4.2.2.2.

11.4.4.3 Чашки с посевами инкубируют в термостате при (36±2)°С в течение 18-24 ч.

После инкубации подсчитывают количество колоний, выросших на каждой чашке. Общее количество колоний во всех повторах (не менее 5) на контрольной неселективной среде должно быть не менее 200. Вычисляют среднее арифметическое значение количества колоний, выросших на контрольной и исследуемой средах.

11.4.4.4 Обработка результатов

Процент извлекаемости рассчитывают по формуле:

11.4.4.5 Оценка результатов

Среда признается приемлемой при условии, что различие между средними значениями количества колоний на контрольной и исследуемой средах не достоверно. При этом, как правило, % извлекаемости (всхожести) составляет не менее 80%.

Расчет достоверности различий средних значений количества колоний, выросших на контрольной и исследуемой средах, приведен в приложении В.

Результат заносится в журнал (формуляр) количественной оценки питательной среды по биологическим показателям (приложение А).

В случае получения достоверного различия результатов, исследование повторяют, удваивая количество повторов: не менее 10 чашек с общей численностью количества учитываемых колоний на неселективной среде не менее 400.

11.4.4.6 Оценка показателя ингибиции

Для оценки ингибирующих свойств среды Эндо (и ее аналогов) по отношению к микробамассоциантам используют тестовый штамм Staphylococcus aureus.

11.4.4.7 Подготовка инокулята

Разведения тестового штамма готовят и контролируют, как указано в 11.4.2.1.3.

11.4.4.8 Методика контроля

11.4.4.9 Оценка результатов

11.5 Контроль на этапе использования питательных сред

В процедуре анализа возможны нарушения использования питательных сред (перегрев, чрезмерная инкубация при высокой температуре и т.д.), приводящие к ухудшению их ростовых свойств. Кроме того, возможно неверное толкование полученного результата, вследствие слабой выраженности признака у исследуемого микроорганизма. Контроль на этом этапе позволяет минимизировать подобные проблемы.

Контроль сред на этапе использования включает:

— контроль температурного режима водяных бань, предназначенных для поддержания плотных питательных сред в расплавленном состоянии;

— учет времени нахождения среды в расплавленном состоянии;

— постановку положительного и отрицательного контролей каждой партии приготовленной питательной среды.

Данный вид контроля проводится при каждом использовании питательных сред.

11.5.1 Контроль времени нахождения питательной среды в расплавленном состоянии

Питательная среда не должна находиться в расплавленном состоянии более 8 ч. Повторное плавление плотной питательной среды не допускается.

11.5.2 Постановка положительного и отрицательного контролей

Постановку контролей осуществляют в процессе идентификации микроорганизмов при выполнении подтверждающих тестов.

11.5.2.1 Тестовые культуры

В качестве тестовых культур используют штаммы:

— E. coli (например, шт. М17-02 или шт. 1257, шт. АТСС 10536);

— Salmonella typhimurium (например, шт. 9640 или шт. АТСС 13311);

— Staphylococcus aureus (например, шт. 906 или шт. АТСС 6538);

— Pseudomonas aeruginosa (например, шт. АТСС 27853 или шт. АТСС 10145, шт. АТСС 15442);

— Aspergillus brasiliensis (например, шт. АТСС 16404);

— Candida albicans (например, шт. АТСС 10231 или шт. АТСС 24433);

— Enterococcus faecalis (например, шт. АТСС 29212);

— Pseudomonas fluorescens (например, шт. АТСС 948).

Накануне исследования тестовую культуру готовят, как указано в 13.3.4.

11.5.2.2 Методика контроля

Постановку положительного контроля осуществляют путем внесения одной петли агаровой культуры тестового штамма в пробирку с используемой средой (средами) для идентификации. Отрицательным контролем служит пробирка с аналогичной средой без посева. Обе пробирки маркируют и помещают в термостат вместе с посевами. Возможен метод посева по ГОСТ 26670.

11.5.2.3 Учет результатов

По истечении срока инкубации в пробирке с положительным контролем должен наблюдаться хорошо различаемый рост, со всеми типичными для него отличительными признаками, которые предполагается выявлять на данной среде. Цвет индикатора среды должен изменяться на цвет, определяемый в паспорте среды как положительный результат утилизации данного углевода. В пробирке с отрицательным контролем среда должна находиться без изменений. Результаты положительного и отрицательного контролей заносятся в рабочий журнал основного исследования.

      12 Правила приготовления серийных разведений

Разведением для микробиологических исследований служит раствор или суспензия исследуемого образца, смешанные с девятикратным количеством жидкости для разведения — разбавителем. Приготовление разведений необходимо:

— при исследовании загрязненных вод в целях снижения количества микроорганизмов на единицу объема, для обеспечения возможности наблюдения за их ростом или подсчетом колоний;

— для постановки исследований, требующих количественного учета используемых модельных микроорганизмов, например при количественной оценке качества питательных сред, мембранных фильтров и т.д.

Приемлемое для учета число микроорганизмов составляет:

— для метода подсчета колоний на чашках Петри (90-100 мм) — от 15 до 300 колоний;

— для учета колоний на фильтре (47-50 мм) — от 15 до 100 колоний;

— для учета колоний на фильтре (35 мм) — от 15 до 60 колоний.

Важным моментом в процедуре приготовления разведений является равномерность распределения внесенных микроорганизмов по объему разбавителя. Равномерность распределения достигается тщательным перемешиванием полученной смеси встряхиванием или пипетированием. Достичь более качественных результатов позволяет использование специальных приборов — встряхивателя или вортекса.

В процессе приготовления разведений каждый образец с помощью прибора тщательно перемешивается в течение 5-10 с.Частоту вращения подбирают так, чтобы жидкость, которая образует воронку, не доходила до края пробирки на 2-3 см.

12.1 Разбавители

В качестве разбавителей при приготовлении разведений используют:

Для приготовления разбавителя указанные компоненты растворяют в воде, при необходимости, с подогреванием. Доводят pH так, чтобы после стерилизации он был равен 7,0±0,2 при 25°С. Разливают разбавитель во флаконы. Стерилизуют при 121°С в течение 20 мин. Помимо перечисленных выше разбавителей, для приготовления разведений исследуемой воды допускается применение стерильной водопроводной воды.

12.2 Методика выполнения разведений исследуемой воды

Процедуру приготовления разведений продолжают по описанной схеме до получения суспензии с необходимой концентрацией исходного образца.

12.3 Методика приготовления суспензий с заданной концентрацией клеток тестовых микроорганизмов

При визуальном несоответствии мутности приготовленной суспензии стандарту, ее доводят либо добавлением агаровой культуры, либо добавлением разбавителя. После каждого вносимого изменения суспензию тщательно перемешивают.

Для получения суспензии с нужной концентрацией тестового микроорганизма выполняют серийные разведения полученной стандартной суспензии описанным выше способом.

Для контроля правильности приготовления суспензии, правильности выполнения разведений и расчета заражающей дозы проводят контрольный высев в соответствии с 11.4.2.1.3.

      13 Этапы сохранения микробиологических культур

13.1 Контрольные (референтные) штаммы микроорганизмов

В качестве контрольных (эталонных) штаммов используют тест-штаммы из официально признанных коллекций микроорганизмов, отличающиеся генетической стабильностью и изученными феноти-пическими характеристиками, в том числе чувствительностью к антибактериальным препаратам. В условиях лаборатории штаммы должны иметь паспорт и храниться в соответствии с действующими на территории Российской Федерации санитарными правилами и нормами при работе с микроорганизмами III-IV групп патогенности таким образом, чтобы возможность мутаций и контаминации культуры была минимальной.

Хранение культур осуществляется в соответствии с действующими на территории Российской Федерации санитарными правилами и нормами. Лаборатория должна иметь разрешение на работу с микроорганизмами III-IV групп патогенности. С учетом различной технической и материальной обеспеченности лабораторий возможны два варианты ведения эталонных бактериальных культур:

— без создания запаса эталонной культуры длительного хранения, не требующий специального оснащения;

— с созданием запаса эталонной культуры длительного хранения с применением криоконсерва-ции, который следует рассматривать как оптимальный.

13.2 Для непродолжительного хранения «рабочих» штаммов их выращивают в пробирке со скошенным агаром и хранят в холодильнике при температуре 2-8°С, субкультивируют в соответствии с ГОСТ ISO 11133 или другими утвержденными в установленном порядке методическими документами и стандартами или используют готовые культуры на петлях или в гранулах.

Рабочую культуру готовят накануне исследования. Для этого ее высевают со среды хранения (например, с полужидкого агара) в пробирки со скошенным питательным агаром, с питательным бульоном или на специальные питательные или дифференциальные среды (если готовые культуры на петлях или в гранулах).

Процесс ведения эталонных культур, в данном варианте, состоит из следующих блоков:

— восстановление и контроль лиофилизированной культуры;

— создание запаса рабочей культуры;

— хранение в полужидком агаре при температуре 4-8°С;

— восполнение запаса рабочей культуры;

— подготовка культуры для целевого использования;

— контроль видовых и паспортных свойств.

Хранение запаса рабочей культуры в полужидком агаре при (4-8)°С не требует специального оснащения, но порождает необходимость восполнения запасов рабочей культуры путем получения ее субкультур на среде хранения каждые 3 месяца. Дополнительные пассажи через питательные среды могут привести к диссоциации штамма и потере тестовых свойств. Восполнять запас рабочей культуры разрешается только 3 раза (конец 3, 6 и 9-го месяцев) с момента его создания. Это ограничивает срок использования эталонной культуры, полученной из 1 ампулы, 1 годом, по истечении которого необходимо вскрыть новую ампулу с тестовой культурой.

Для длительного хранения штаммы находятся в лиофилизированном виде при температуре 4-6°С или в виде суспензии микроорганизмов в стабилизирующем растворе в замороженном состоянии при температуре минус 70°С и ниже в морозильной камере или в жидком азоте.

В случае необходимости (при длительном хранении) для повышения активности культуры ее необходимо предварительно провести через питательные бульоны.

Если «рабочие» культуры были контаминированы или имеет место снижение чувствительности, необходимо вернуться к исходным культурам.

13.3 Подготовка тестовой культуры для целевого использования

13.3.1 Восстановление лиофилизированной эталонной культуры

Оттянутый конец ампулы с лиофилизированной культурой нагревают над пламенем горелки. Влажным концом стерильного ватного тампона прикасаются к нагретой части, в результате чего появляются трещины. Конец ампулы накрывают трехслойной марлевой салфеткой, смоченной 70%-ным этиловым спиртом и хорошо отжатой и обламывают пинцетом.

Одну пробирку с посевом используют для постановки тестов на соответствие полученного штамма видовым, паспортным свойствам. Второй посев на скошенном питательном агаре используют для создания запасов рабочей культуры.

Культура с измененными свойствами в работу не допускается.

13.3.2 Создание запасов рабочей культуры

Одну из пробирок с культурой, предназначенной для восполнения рабочих запасов, маркируют и хранят отдельно. Запасы рабочей культуры желательно хранить в отдельном холодильнике.

13.3.3 Восполнение запасов рабочей культуры

Восполнение запасов рабочей культуры производится в конце 3, 6 и 9-го месяца с момента вскрытия ампулы (каждые 3 месяца).

Для восполнения запасов рабочей культуры используется субкультура на среде хранения, полученная ранее при создании запасов или при очередном их восполнении. Из пробирки с культурой, предназначенной для восполнения запасов, производят посев в питательный бульон. Посевы инкубируют при (37±1)°С в течение 18-24 ч. Оставшуюся бульонную культуру (например, E. coli M17-02) используют для оценки степени диссоциации.

При наличии диссоциации (по размеру, S-R-диссоциация, др.) подсчитывают количество измененных колоний и общее количество просмотренных колоний. Общее количество просмотренных бактерий не должно быть менее 30. Затем рассчитывают процент диссоциации по формуле:

Если процент диссоциированных колоний превышает 25%, то данная культура не пригодна для дальнейшего использования.

Один из посевов используют для постановки тестов на соответствие полученного штамма видовым, паспортным свойствам. Второй посев на скошенном питательном агаре используют для восполнения запасов рабочей культуры.

При удовлетворительном прохождении контрольных тестов процедура закладки культуры на хранение осуществляется согласно 13.2, 13.3.5. Восполнение запасов рабочей культуры проводят только 3 раза. По истечении года использования необходимо получить новую эталонную культуру из коллекции микроорганизмов.

Контрольными тестами являются тесты на проверку жизнеспособности, оценку морфологических и биохимических свойств с применением селективных сред, возможно использование автоматических биохимических анализаторов или тест-систем для определения биохимических свойств.

13.3.4 Подготовка культуры для целевого использования в анализе

Культуру из одной пробирки используют по назначению с предварительной подготовкой согласно методическим документам. Вторая пробирка используется для получения культуры для работы на следующий (второй) день. При необходимости получения культуры тест-штамма на третий день высев снова производят с полужидкого агара.

13.3.5 Создание запасов эталонных штаммов

Параллельно с постановкой контрольных тестов из пробирки со скошенным питательным агаром культуру засевают в 2 пробирки с питательным бульоном или на две чашки Петри с агаром и инкубируют 18-24 ч при (37±1)°С.

При удовлетворительном прохождении контрольных тестов в пробирке с суточной культурой проводят подготовку для сохранения культур в условиях низких температур (криоконсервации) в соответствии с 13.4.2. Криопробирки с запасом эталонной культуры устанавливают в криобокс (штатив для криопробирок) и закладывают на хранение при температуре минус (70±10)°С. Альтернативным вариантом является хранение в жидком азоте при наличии соответствующего оборудования.

При инкубировании культур на чашках Петри с агаром процедуру подготовки и закладки для длительного хранения при температуре минус (70±10)°С или для хранения в жидком азоте проводят в соответствии с 13.4.3.

Закладку запасов эталонной культуры на длительное хранение осуществляют единожды на весь период ее использования и запасы эталонной культуры при хранении в условиях низких температур восполнению не подлежат.

Данный блок выполняет задачу накопителя биомассы эталонного штамма, что позволяет избежать необходимости восполнять запасы рабочей культуры за счет повторных пассажей эталонного штамма через питательные среды и удлиняет «срок службы» культуры, полученной из одной ампулы.

13.3.6 Создание запасов рабочей культуры

Один из посевов на скошенном питательном агаре используют для постановки тестов на соответствие полученного штамма паспортным (типовым) свойствам. Второй посев используют для создания запасов рабочей культуры.

При несоответствии штамма видовым и паспортным свойствам использование культуры не допускается. В этом случае необходимо разморозить еще одну емкость с эталонной культурой и подвергнуть ее аналогичному исследованию.

Если культура снова не прошла контроль, ее снимают с хранения и в дальнейшем не используют. Необходимо получить новую ампулу с эталонной культурой и начать процедуру ведения тестового штамма сначала.

При удовлетворительном прохождении тестов культуру из пробирки со скошенным питательным агаром засевают уколом в 3-6 пробирок с полужидким агаром из расчета 1-2 пробирки на месяц в зависимости от интенсивности работы лаборатории. Посев инкубируют 18-24 ч при 37°С. Пробирки закрывают резиновыми или силиконовыми пробками и хранят при 4-8°С.

Запасы рабочей культуры создают 1 раз в 3 месяца, используя для этой цели новую пробирку из запаса эталонной культуры. Повторное замораживание размороженной эталонной культуры запрещается. Запасы рабочей культуры желательно хранить в отдельном холодильнике.

13.4 Подготовка культур микроорганизмов к процессу длительного хранения при низких температурах(криоконсервации)

13.4.1 Оборудование, расходные материалы и реактивы

Оборудование:

— автоклав вертикальный;

— термостат;

— микровстряхиватель или вортекс;

— низкотемпературный морозильник на минус 80°С;

— одноканальный механический дозатор переменного объема (рабочий объем 100-1000 мкл) с набором наконечников;

— криохранилища или сосуд Дюара, обеспечивающий возможность хранения в жидком азоте;

— водяная баня.

Расходные материалы и реактивы:

— пробирки типа Эппендорф;

— криопробирки с юбками и без, с завинчивающимися крышками со штриховым кодом и без него с бусами и без бус;

— микробиологическая петля;

— спиртовка стеклянная;

— штатив пластиковый для пробирок;

— пластиковые коробки с ячейками;

— чашки Петри;

— этиловый спирт.

13.4.2 Подготовка культур микроорганизмов

Перед криоконсервацией из полученной бактериальной суспензии 100 мкл используют для определения жизнеспособности культуры. При этом бактериальную взвесь помещают на поверхность ага-ризованной среды, обеспечивающей оптимальный рост культуры, растирают шпателем с дальнейшим термостатированием при температуре инкубации, используемой для культивирования микроорганизма, который планируется сохранять.

После тщательного перемешивания на микровстряхивателе или на вортексе, заполненные крио-пробирки размещают в пластиковых контейнерах с ячейками, затем помещают в низкотемпературную камеру или морозильник на минус (70±10) °С или в жидкий азот на минус 196°С.

Перед использованием замороженный образец достают из места хранения, помещают на 45 с в водяную баню, прогретую заранее до (37±1)°С, затем достают и размораживают при комнатной температуре в анаэробных или аэробных условиях, требуемых для его культивирования.

При частой разморозке криопробирок титр микроорганизмов снижается, поэтому размораживать несколько раз криопробирки с культурами не рекомендуется.

13.4.3 Процесс длительного хранения при низких температурах (криоконсервация) микроорганизмов, выросших на поверхности агаризованных питательных сред

Микроорганизмы рассевают по всей поверхности чашки Петри на питательной среде. В начале стационарной фазы роста микроорганизмы собирают с поверхности агара одноразовой бактериологической петлей (при этом металлические петли использовать не рекомендуется из-за возможного повреждения клеточной стенки) или ватным тампоном и помещают в 800 мкл среды для криозаморозки или криопротекторы, суспендируют с помощью микровстряхивателя или вортекса, затем помещают в низкотемпературный морозильник на минус (70±10)°С или в жидкий азот.

13.4.4 Внутриклеточные криопротекторы и криозащитные среды

Выбор криопротектора или криозащитной среды зависит от вида бактерий. При замораживании новых штаммов следует предварительно проверить действие на них криопротектора.

13.4.4.1 Использование в качестве криопротектора 10%-ных растворов глицерина и ДМСО

13.4.4.2 Использование в качестве криопротектора составных криозащитных сред

10%-ный раствор глицерина готовят из концентрата глицерина путем разведения стерильной дистиллированной водой до соотношения 1:10 и стерилизуют в течение 20 мин при 121°С. Хранят при температуре 4-6°С в течение 30 дней.

Оттаивание криопробирок с бактериальными культурами производят непосредственно перед проведением исследований, для чего требуемые для исследования образцы вынимают из низкотемпературного хранилища, размораживают в течение 45 с на прогретой заранее до температуры 37°С водяной бане, затем образцы вынимают из водяной бани и оставляют при комнатной температуре до полного оттаивания. Затем содержимое пробирки высевают на чашки с питательными средами. Последующая заморозка после оттаивания микроорганизмов нежелательна.

13.5 Консервирование бактериальных культур высушиванием из замороженного состояния (лиофилизация)

13.5.1 Оборудование

В зависимости от способа размещения биопрепаратов при высушивании различают сублимационные установки коллекторного и камерного типа.

В коллекторных установках ампулу, флакон, колбу с биопрепаратом (каждый элемент в отдельности) во время сушки связывают с устройством для улавливания водяных паров (конденсатором) индивидуальным трубопроводом.

В камерных установках сосуды с препаратами помещают в общую сушильную камеру, где и осуществляется, как правило, весь цикл высушивания препарата.

По принципу работы сублимационные установки подразделяются на периодические, поточно-циклические и установки с непрерывным действием.

13.5.2 Подготовка культур к сушке

Качество лиофилизации зависит от качества используемых микробных клеток, от того, насколько они жизнеспособны и в каких условиях выросли.

13.5.3 Защитные среды

Для подготовки клеток к лиофилизации их суспендируют в среде, содержащей растворы защитных сред. В качестве криопротекторов используют:

— декстран (10%);

— инозит (5%);

— глутамат (5%);

— раффиноза (5%);

— пептон (0,1-10%);

— сахароза (10%);

— лактоза (10%);

— трегалоза (10%);

— обезжиренное молоко (10-20%);

— натрия глутамат (5%);

— гидролизат казеина;

— 12%-ный раствор сахарозы;

— лошадиная сыворотка;

— глюкозо-желатиновая среда;

— сахарозо-желатиновая среда.

13.5.4 Подготовка стабилизатора-носителя, в котором проводят лиофилизацию культур

Обезжиренное молоко готовят путем центрифугирования цельного молока (3500 об/мин, 40 мин), затем образовавшийся плотный слой жира удаляют и обезжиренное молоко (обрат) автоклавируют при температуре 117°С в течение 15 мин.

13.5.5 Способ приготовления сахарозо-желатиновой или глюкозо-желатиновой сред

К 100 мл дистиллированной воды добавляют 1 г желатина и 5 г сахарозы (5 г глюкозы). Дают постоять среде 2 ч при комнатной температуре. Затем стерилизуют в автоклаве при 120°С в течение 30 мин.

13.5.6 Заполнение ампул или пенициллиновых флаконов микробной суспензией

13.5.7 Процедура лиофилизации

Готовые для лиофилизации флаконы с защитной средой и микробными культурами непосредственно перед лиофилизацией помещают в морозильные камеры на минус (70±10)°С не менее чем на 16 ч, достают непосредственно перед процедурой лиофилизации и ставят в разогретую лиофильную камеру. Общая продолжительность цикла высушивания составляет не более 50 ч. После высушивания флаконы герметизируют в стерильных условиях.

13.5.8 Хранение

Лиофилизованные культуры хранят при температуре 4-6°С. С понижением температуры растет и сохраняемость микробных клеток. При комнатной температуре лиофилизованные культуры хранить не рекомендуется.

13.6 Восстановление (реактивация) культур из лиофилизата

13.7 Проверка жизнеспособности восстановленных бактерий после лиофилизации

Чтобы определить, насколько эффективен процесс высушивания бактерий из замороженного состояния, проверяют их жизнеспособность как до, так и после лиофилизации культуральным методом, а также методом покраски на живые и мертвые с применением набора для флуоресцентной окраски клеток или трипанового синего.

Для этого суспензию клеток стерильно разводят и делают посев штрихом на твердые среды. Пробирки и чашки со средой инкубируют при оптимальной для бактерий температуре и, как только начинается их рост, делают пересев на свежую среду, чтобы убедиться в чистоте культуры.

При использовании метода оценки живых и мертвых бактерий 100 мкл бактериальной суспензии смешивают 1:1 с флуоресцентной краской клеток или трипановым синим, пепетируют и проводят оценку в камере Горяева под микроскопом.

13.8 Консервирование высушиванием из жидкого состояния

13.8.1 Подготовка клеток для L-высушивания

13.8.2 Заполнение ампул микробной суспензией

13.8.3 Высушивание

Заполненные ампулы быстро ставят на металлический поддон, который переносят в металлическую камеру на водяной бане при температуре 20°С. После 20-30 мин эквилибрации образцов включают вакуумный насос, который отсасывает влагу из сушильной камеры. При этом влага конденсируется на холодной ловушке (приблизительно минус 35°С).

В технологии сушки из жидкого состояния различают две стадии — первичное и вторичное высушивание.

Приложение А

(рекомендуемое)

 Примеры формуляров для записи результатов контроля

А.1 Формуляр для записи результатов контроля микробной обсемененности воздуха

	Наименование организации	Формуляр ______
	Испытательный лабораторный центр Микробиологическая лаборатория	действует с: _______________ Стр ____ из _____
	Контроль обсемененности воздуха

Дата посева	Питательные среды. Результат	Дата окончания исследо- вания	Подпись исполни- теля	Дата посева	Питательные среды. Результат	Дата окончания исследо- вания	Подпись исполни- теля
	МПА				МПА
	ЖСА				ЖСА
	Сабуро				Сабуро
	МПА				МПА
	ЖСА				ЖСА
	Сабуро				Сабуро

		Составил:
Дата введения:
		Проверил:

А.2 Формуляр контроля паразитарной загрязненности воздуха и пыли

	Наименование организации	Формуляр ______
	Испытательный лабораторный центр Паразитологическая лаборатория	действует с: _______________ Стр ____ из _____
	Контроль паразитарной загрязненности воздуха и пыли в паразитологи-ческой лаборатории (комната, помещение или бокс и т.д.)

Дата	Вид	Всего	Приме-	НД на	Место	Яйца гельминтов	Фамилия
прове- дения иссле- дова- ния	иссле- дова- ния	коли- чество отоб- ранных проб для иссле- дова- ния	няемая мето- дика при иссле- дова- нии проб	методы иссле- дования	отбора пробы (назва- ние или номер помеще- ния, бокса и т.д.)	Обнаружено	Не обна- ружено	и подпись прово- дившего иссле- дование
						При обнаружении дается краткая характеристика объекта и указывается количество обнаружения в пробе

Примечание — Периодичность проведения контроля устанавливается в плане производственного контроля лаборатории.

А.3 Формуляр для записи результатов контроля микробной обсемененности лабораторной посуды

	Наименование организации	Формуляр ______
	Испытательный лабораторный центр Микробиологическая лаборатория	действует с: _______________ Стр ____ из _____
	Контроль обсемененности лабораторной посуды (ЛП)

Дата/	ОМЧ*	Сульфитредуцирующие	Резуль-	Дата	Под-
наимено- вание ЛП	МПБ (20% от объема флакона) 36±2°С 48 ч	МПА 36±2°С 48 ч	клостридии (железосульфатный агар 44°С 18 ч)»	тат	окон- чания иссле- дова- ния	пись испол- нителя
		Конт- роль посуды	Конт- роль среды	Сте- рильная водо- провод- ная вода (20% от объема флако- на)	Конт- роль посуды	Конт- роль сте- риль- ности водо- про- водной воды
Флаконы	100,0	1,0	1,0	100,0	100,0	100,0
		1,0
	100,0	1,0		100,0	100,0
		1,0
	100,0	1,0		100,0	100,0
		1,0
Чашки Петри	10,0	1,0
		1,0
	10,0	1,0
		1,0
	10,0	1,0
		1,0
Пробирки	5,0	1,0
		1,0
	5,0	1,0
		1,0
	5,0	1,0
		1,0
Пипетки	1,0	1,0
		1,0
	1,0	1,0
		1,0
	1,0	1,0
		1,0
* ОМЧ — 1 раз в неделю.
** Сульфитредуцирующие клостридии — 1 раз в квартал.

		Составил:
Дата введения:
		Проверил:

А.4 Формуляр для записи результатов контроля паразитарной загрязненности поверхностей в лаборатории

	Наименование организации	Формуляр ______
	Испытательный лабораторный центр Микробиологическая (паразитологическая) лаборатория	действует с: _______________ Стр ____ из _____
	Контроль качества проведения дезинфекционных мероприятий в паразитологической лаборатории (комната, помещение или бокс и т.д.) методом смыва

Дата прове-	Вид иссле-	Всего количество	Приме- няемая	НД на методы	Место/ поверх-	Результат исследования	Фамилия и
дения иссле- дова- ния	дова- ния	отобранных проб для исследования	методика при исследо- вании проб	иссле- дования	ность, с которого отбира- ется смыв	Яйца гель- мин- тов	Цисты/ ооцисты патоген- ных простей- ших	подпись прово- дившего иссле- дование
		В одном помещении рекомендуется отбирать не менее 10 проб

Примечание — Периодичность проведения контроля устанавливается в плане производственного контроля лаборатории.

А.5 Формуляр для записи результатов контроля качества питательных сред

	Наименование организации	Формуляр ______
	Испытательный лабораторный центр Микробиологическая лаборатория	действует с: _______________ Стр ____ из _____
	Результат внутренних испытаний питательных сред, приготовленных лабораторией

Наименование питательной среды:

Внешний вид упаковки:

Внешний вид питательной среды:

Этап взвешивания навески среды и

Этап кипячения,

Этап внесения

Режим стерили-

Этап внесения

Ожидаемый:

Наблюда- ется:

растворения. Приготовленный объем:

мин

добавок до стерилизации

зации: , мин

добавок после стерили- зации

Обезвоженная среда (и код) серия, срок годности:

Произво- дитель:

Коли- чество:

Коли- чество ДВ:

Добавка серия, срок годности:

Произво- дитель:

Коли- чество:

Коли- чество ДВ:

Физический контроль качества

Ожидаемое значение pH

Измерен- ный pH

Качество подтверждено:

Дефекты:

Дата/подпись

да

нет

Ожидаемое заполняющее количество и/или толщина слоя:

Наблюда- ется:

Качество подтверждено:

Дефекты:

Дата/подпись

да

нет

Ожидаемый цвет:

Наблюда- ется:

Качество подтверждено:

Дефекты:

Дата/подпись

да

нет

Ожидаемая прозрачность/ присутствие

Наблюда- ется:

Качество подтверждено:

Дефекты:

Дата/подпись

оптических

да

нет

артефактов:

Ожидаемые стабильность/ постоянство/

Наблюда- ется:

Качество подтверждено:

Дефекты:

Дата/подпись

влажность геля:

да

нет

Микробное загрязнение

Номера испытуемых чашек или пробирок:

Результат:

Качество подтверждено:

Номера загрязненных чашек или пробирок:

Дата/подпись

Инкубация:

да

нет

Микробиологический рост —

Производительность

Метод контроля: количественный

качественный

Штаммы:

Критерии:

Результат:

Качество подтверждено:

Дата/подпись

да

нет

Инкубация:

Эталонная среда:

Микробиологический рост —

Селективность

Метод контроля: количественный

качественный

Штаммы:

Критерии:

Результат:

Качество подтверждено:

Дата/подпись

да

нет

Инкубация:

Эталонная среда:

Микробиологический рост —

Специфичность

Метод контроля: количественный

качественный

Штаммы:

Критерии:

Результат:

Качество подтверждено:

Дата/подпись

да

нет

Инкубация:

Эталонная среда:

Выпуск партии

Подробности

Выпуск партии: да

нет

Дата/подпись

хранения

Результат внутренних испытаний питательных сред, приготовленных лабораторией

		Составил:
Дата введения:
		Проверил:

Приложение Б

(обязательное)

 Методы санитарно-паразитологического исследования смывов с поверхностей, воздуха и пыли для проведения внутрилабораторного контроля

Б.1 Исследование смывов с поверхностей при осуществлении внутрилабораторного контроля в паразитологических лабораториях (комнатах, помещениях)

Б.1.1 Отбор проб и подготовка к исследованию

При определении обсемененности возбудителями паразитарных болезней в лабораториях (комнатах, помещениях), задействованных в паразитологических исследованиях не реже 1 раза в месяц, отбираются смывы с поверхностей.

Смывы берут с любых поверхностей в лаборатории (комнате, помещении), непосредственно задействованных в паразитологических исследованиях (столы, стены, рабочие поверхности микроскопов, лотки, руки, халаты, спецодежда персонала, ручки дверей, ручки и поверхности раковин, поверхности фильтровальных установок, полы, санузел лаборатории и т.д.)

Для отбора смывов применяют кисточки из щетины, беличьи кисточки, смоченные в 1%-ном растворе едкого натра, или в 10%-ном растворе глицерина, или 1%-ном растворе стирального порошка. В центрифужные пробирки наливают до половины объема 10%-ный раствор глицерина. Для каждой группы предметов берут отдельную пробирку и кисточку, которые нумеруются (номер кисточки и пробирки должны совпадать). В одну пробу, т.е. в пробирку, можно собирать смывы с нескольких однородных предметов (например: столы, рабочие поверхности микроскопа, ручки дверей и т.д.).

Смывы с рук персонала берут у каждого отдельно, чтобы при обнаружении яиц гельминтов или/и цист кишечных простейших можно было знать, какой именно сотрудник нарушает правила гигиены.

Для снятия яиц гельминтов с рук персонала рекомендуется мыть их раствором питьевой соды или 1%-ным раствором едкого натра; смывные воды центрифугируют, осадок можно также профильтровать в аппарате Гольдмана и затем исследовать фильтры.

При взятии смывов с поверхностей кисточкой, смоченной в растворе, многократно и с нажимом проводят по поверхности однородных предметов обследуемого объекта. Причем кисточку в процессе отбора часто и тщательно ополаскивают в пробирке и вновь делают смывы с поверхности предметов.

После отбора проб пробирки с вложенными в них кисточками в штативах доставляются на паразитологическое исследование.

Этикетирование целесообразно проводить не для каждой отдельной пробирки.

Б.1.2 Исследование смывов на яйца гельминтов

Б.1.2.1 Метод центрифугирования

Ход исследования

Кисточки со смывами ополаскивают в жидкости пробирки.

Центрифугируют полученные пробы в этих же пробирках, надосадочную жидкость сливают.

Осадок помещают на предметное стекло и микроскопируют.

Плотный осадок делят на несколько предметных стекол.

Б.1.2.2 Флотационный метод

Ход исследования

В пробирку доливают флотационный раствор до образования выпуклого мениска, накрывают ее обезжиренным покровным стеклом до полного соприкосновения с поверхностной пленкой раствора.

Время экспозиции 12-15 мин.

При использовании флотационного раствора хлорида натрия — 20-25 мин. Затем покровное стекло снимают пинцетом и полученную висячую каплю на покровном стекле аккуратно переносят на предметное стекло в каплю 50%-ного раствора глицерина. Полученный препарат микроскопируют при 80-150-кратном увеличении.

Готовить пробы к исследованию одновременно следует партиями не более 5-6 пробирок, так как при большом количестве пробирок увеличивается время экспозиции, и яйца, поднявшиеся в поверхностную пленку, покрываются кристаллами соли, что затрудняет их обнаружение.

Б.1.3 Исследование смывов на цисты простейших

Б.1.3.1 Метод Романенко

Ход исследования

Б.1.3.2 Метод иммуномагнитного разделения и мечение флуоресцирующими антителами (ИМС) на определение цист и ооцист кишечных простейших.

Б.1.4 Материал, оборудование и реактивы

Магнитный штатив.

Автоматические пипетки на 1-10 мкл, 20-200 мкл и 100-1000 мкл.

Наконечники для автоматических пипеток.

Лабораторный вортекс.

Лабораторный ротатор.

Пробирки для иммуномагнитной сепарации (ИМС-пробирки или плоскостенные пробирки) или обычные центрифужные.

Штатив для ИМС-пробирок.

Штатив для пробирок типа Эппендорф.

Флуоресцентный микроскоп с набором необходимых фильтров и принадлежностей в рекомендованной комплектации или насадка на микроскоп ОптиЛюм.

Пастеровские пипетки.

Таблетированный фосфатный буфер PBS (6).

DAPI в метаноле.

Положительный контроль (10).

Контрастирующий краситель (11), С101.

Метанол.

0,1 Н раствор соляной кислоты.

1 Н раствор NaOH.

Примечание — Допускается использование материалов, оборудования и реактивов иных производителей с аналогичными характеристиками, но не ниже указанных.

Б.1.5 Подготовка проб (смывов) к исследованию

Примечание — Диагностические наборы с иммунореагентами и буферными растворами перед использованием выдержать в течение одного часа при комнатной температуре.

Б.1.6 Иммунохимическое связывание, магнитная сепарация и промывка

Остановив покачивание в вертикальном положении пробирки и не вынимая ее из магнитного штатива, осторожно вылить надосадочную жидкость из пробирки. Не вынимая ИМС-пробирку из штатива и не касаясь магнитного осадка на стенке, отобрать остатки жидкости со дна пробирки с помощью пастеровской пипетки.

Закрыть крышку пробирки типа Эппендорф и поместить ее в магнитный штатив. Бережно покачивать штатив с пробиркой вручную в течение 1 мин, поворачивая ее на 180° от себя/на себя, при этом пробирка должна находиться сверху.

Не вынимая пробирку типа Эппендорф из магнитного штатива и не касаясь суспензии на стенке пробирки, с помощью пастеровской пипетки осторожно отобрать всю жидкость из пробирки.

Б.1.7 Диссоциация

Извлечь пробирку типа Эппендорф из магнитного штатива, добавить в пробирку 50 мкл 0,1 Н раствора соляной кислоты. Перемешать суспензию на вортексе в течение 50 с.

Инкубировать пробирку в течение 10 мин при комнатной температуре.

Перемешать суспензию в микроцентрифужной пробирке на вортексе в течение 30 с.

Б.1.8 Подготовка к иммунофлуоресцентному мечению

Примечание — Для фиксации цист и ооцист на предметном стекле (слайде) внести в каждое окно предметного стекла (слайда) по 45 мкл абсолютного метанола и высушить (примерно 30 мин). После фиксации метанолом интенсивность флуоресценции DAPI возрастает.

Б.1.9 Флуоресцентное и иммунофлуоресцентное мечение

Поместить препараты в ячейку влажности и инкубировать не менее 25 мин при 37°С или не менее 40 мин при комнатной температуре. Допускается более длительное время инкубации.

Разложить препараты на наклонном штативе для предметных стекол (слайдов), подсушить в токе теплого воздуха.

Б.1.10 Люминесцентная микроскопия

Исследуют препараты не менее чем при 100-кратном общем увеличении на наличие яблочно-зеленой флюоресценции, микроскопируя все поля зрения лунки предметного стекла (слайда). При использовании каждой новой партии реагентов и перед началом микроскопии препаратов исследуемых проб следует предварительно просмотреть препарат положительного контроля, для чего используется контрольная суспензия с точно подсчитанными цистами лямблий и ооцистами криптоспоридий, прилагаемая в диагностическом наборе.

Результат:

— цисты лямблий — светящиеся и флюоресцирующие яблочно-зеленым светом объекты, от овальных до сферических (от 10 до 18 мкм в диаметре), с ярко подсвеченными краями;

— ооцисты криптоспоридий — сверкающие и флюоресцирующие яблочно-зеленым светом объекты, от овальных до сферических (от 2,5 до 6 мкм в диаметре), с ярко подсвеченными краями.

Б.2 Санитарно-паразитологическое исследование пыли и воздуха в помещениях для осуществления внутрилабораторного контроля

Б.2.1 Отбор проб и подготовка к исследованию

На одну сторону чистого предметного стекла (слайда) наносят тонкий слой 50%-ного раствора глицерина в виде полоски шириной 1,5-2,0 см и длиной 4-5 см. Предметное стекло (слайд) вставляют в камеру так, чтобы смазанная глицерином поверхность была обращена к всасывающему отверстию камеры. Камеру закрывают крышкой. Затем включают пылесос или другое всасывающее устройство и производят отбор пыли.

Сбор проб пыли и воздуха непосредственно на предметное стекло (слайд), покрытое клейкой смазкой, исключает использование фильтров, центрифугирование, приготовление мазков и другие действия, во время которых могут быть потери яиц гельминтов или нарушение их целостности. Кроме того, использование клейких предметных стекол (слайдов) ускоряет время отбора проб и позволяет, что особенно важно при обследовании детских учреждений, просматривать предметные стекла на местах обследования. Последнее дает возможность на местах составлять план мероприятий по предупреждению загрязнения и дегельминтизации внешней среды.

Б.2.2 Исследование пыли и воздуха на яйца гельминтов. Метод Каледина и Романенко (1982)

Для отбора и исследования проб пыли используют липкую прозрачную целлофановую ленту (скотч) со слоем клея до 3 мм.

Ленту шириной 20 мм и длиной 7-8 см приклеивают липким слоем к разным участкам исследуемой поверхности 6-8 раз, в зависимости от запыленности объекта, а затем ее помещают на предметное стекло (слайд). Липкой лентой нельзя делать отбор проб пыли с бумажных поверхностей (книги), мягких игрушек и очень загрязненных предметов (половики, коврики).

При проведении исследования ленту отклеивают на участках микроскопирования и вносят под нее несколько капель касторового или вазелинового масла (для устранения пузырьков воздуха), исследуют при малом увеличении микроскопа. Препарат может храниться несколько дней.

Приложение В

(обязательное)

 Расчет достоверности различий средних значений количества колоний, выросших на контрольной и исследуемой средах по Стьюденту-Фишеру

Достоверность различия средних значений количества колоний, выросших на контрольной и исследуемой средах/мембранных фильтрах, оценивают с использованием критерия Стьюдента для вероятности 95%.

Для определения достоверности различия средних величин двух вариационных рядов с использованием критерия Стьюдента сначала рассчитывают дисперсию для каждого сравниваемого ряда значений, далее вычисляется критерий Стьюдента (t).

В.1 Определение дисперсии

M — среднее арифметическое значение количества выросших колоний;

N — количество посевов в исследовании, выполненных на данной среде.

В.2 Расчет значения критерия Стьюдента

Критерий Стьюдента t вычисляется по формуле:

Если полученное значение критерия больше табличного, то различие между сравниваемыми средними величинами достоверно.

Число степеней вероятности свободы n	Требуемый уровень доверительного интервала средней p
	0,95	0,99
1	12,71	63,66
2	4,3	9,92
3	3,18	5,84
4	2,78	4,6
5	2,57	4,03
6	2,45	3,71
7	2,36	3,5
8	2,31	3,36
9	2,26	3,25
10	2,23	3,17
11	2,2	3,11
12	2,18	3,06
13	2,16	3,01
14	2,14	2,98
15	2,13	2,95
16	2,12	2,92
17	2,11	2,9
18	2,1	2,88
19	2,09	2,86
20	2,09	2,84
21	2,08	2,83
22	2,07	2,82
23	2,07	2,81
24	2,06	2,8
25	2,06	2,79
26	2,06	2,78
27	2,05	2,77
28	2,05	2,76
29	2,04	2,76
30	2,04	2,75
40	2,02	2,7
60	2	2,66
120	1,98	2,62
бесконечность	1,96	2,58

Оценку неопределенности измерений проводят в соответствии с ГОСТ Р ИСО 21748.

 Библиография

[1]	СанПиН 3.3686-21	Санитарно-эпидемиологические требования по профилактике инфекционных болезней
[2]	Р 3.5.1904-04	Использование ультрафиолетового бактерицидного излучения для обеззараживания воздуха в помещениях
[3]	СанПиН 1.2.3685-21	Гигиенические нормативы и требования к обеспечению безопасности и (или) безвредности для человека факторов среды обитания

УДК 543.63:544:632:006.354		ОКС 13.060.70
Ключевые слова: качество воды, вода питьевая, внутрилабораторный контроль, микробиологическая лаборатория, паразитологическая лаборатория, обсемененность, стерильность, дистиллированная вода, питательные среды, тест-микроорганизмы, криопротекторы, лиофилизация культур, криозаморозка