Вектор бест вич инструкция по применению

Вектор бест тест на вич

Журнал «Новости Вектор-Бест»

Новый набор для дифференциального выявления IgG к S- и N-белкам SARS-CoV-2. Подробнее

Обновлен буклет «Диагностика паразитарных болезней». Подробнее

Вебинар «Диагностика вирусных кишечных инфекций». Уважаемые коллеги! Приглашаем вас на вебинар, который состоится 5 июля в 09:00 (мск). Подробнее

Новое видео «Количественное определение антител к SARS-CoV-2». Подробнее

Набор для внутрилабораторного контроля качества ИФА «Сыворотка, содержащая антитела к ВИЧ-1».

ВИЧ (-) стандартная панель сывороток

Набор образцов сывороток крови, не содержащих антитела к вирусам иммунодефицита человека 1, 2 типов и антиген р24 ВИЧ-1.

ВИЧ-1 АТ(+) стандартная панель сывороток

Набор образцов сывороток крови, содержащих антитела к вирусу иммунодефицита человека 1 типа.

ВИЧ-2 АТ(+) стандартная панель сывороток

Набор образцов сывороток крови, содержащих антитела к вирусу иммунодефицита человека 2 типа.

ВИЧ-1 р24-антиген (+) стандартная панель сывороток

Набор образцов сывороток крови, содержащих антиген р24 ВИЧ-1 в различных концентрациях.

КомбиБест ВИЧ-1,2 АГ/АТ-авто (комплект 2/Чароит)

Набор реагентов для иммуноферментного выявления антител к ВИЧ-1,2 и антигена р24 ВИЧ-1 для автоматических анализаторов.

КомбиБест ВИЧ-1,2 АГ/АТ-авто (комплект 1)

Набор реагентов для иммуноферментного выявления антител к ВИЧ-1,2 и антигена р24 ВИЧ-1 для автоматических анализаторов.

Срок годности: 12 месяцев

КомбиБест ВИЧ-1,2 АГ/АТ (комплект 1)

Набор реагентов для иммуноферментного выявления антител к ВИЧ-1,2 и антигена р24 ВИЧ-1.

Срок годности: 12 месяцев

КомбиБест ВИЧ-1,2 АГ/АТ (комплект 2)

Набор реагентов для иммуноферментного выявления антител к ВИЧ-1,2 и антигена р24 ВИЧ-1.

Срок годности: 12 месяцев

КомбиБест анти-ВИЧ-1+2 (комплект 3/авто)

Набор реагентов для иммуноферментного выявления антител к вирусам иммунодефицита человека 1 и 2 типов. Выявляет антитела к ВИЧ-1,2 всех классов.

Срок годности: 18 месяцев

КомбиБест анти-ВИЧ-1+2 (комплект 1)

Набор реагентов для иммуноферментного выявления антител к вирусам иммунодефицита человека 1 и 2 типов. Выявляет антитела к ВИЧ-1,2 всех классов.

Срок годности: 18 месяцев

КомбиБест анти-ВИЧ-1+2 (комплект 2)

Набор реагентов для иммуноферментного выявления антител к вирусам иммунодефицита человека 1 и 2 типов. Выявляет антитела к ВИЧ-1,2 всех классов.

Срок годности: 18 месяцев

КомбиБест анти-ВИЧ-1+2 (комплект 1/стрип)

Набор реагентов для иммуноферментного выявления антител к вирусам иммунодефицита человека 1 и 2 типов. Выявляет антитела к ВИЧ-1,2 всех классов.

Срок годности: 18 месяцев

УниБест ВИЧ-1,2 АТ (комплект 3/авто)

Набор реагентов для иммуноферментного выявления суммарных антител к ВИЧ-1,2. Двухстадийный вариант.

Срок годности: 18 месяцев

УниБест ВИЧ-1,2 АТ (комплект 1)

Набор реагентов для иммуноферментного выявления суммарных антител к ВИЧ-1,2. Двухстадийный вариант.

Срок годности: 18 месяцев

УниБест ВИЧ-1,2 АТ (комплект 1/стрип)

Набор реагентов для иммуноферментного выявления суммарных антител к ВИЧ-1,2. Двухстадийный вариант.

Срок годности: 18 месяцев

УниБест ВИЧ-1,2 АТ (комплект 2)

Набор реагентов для иммуноферментного выявления суммарных антител к ВИЧ-1,2. Двухстадийный вариант.

Срок годности: 18 месяцев

ЛИА-Блот ВИЧ-1,2 БЕСТ

Набор реагентов для подтверждения наличия антител к антигенам вируса иммунодефицита человека 1 и 2 типов методом иммунного блоттинга.

Вектор бест тест на вич

ВИЧ-инфекция – медленно текущая ретровирусная инфекция, характеризующаяся пандемическим распространением, развитием синдрома приобретенного иммунодефицита и летальным исходом. Поэтому своевременная и точная лабораторная диагностика этого заболевания имеет важное значение. Она основана прежде всего на идентификации вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) и выявлении специфических противовирусных антител. (3, 6, 8, 9)

При массовом скрининге доноров крови и групп риска с целью выявления специфических противовирусных антител используется метод иммуноферментного анализа (ИФА). Метод основан на иммобилизации вирусных антигенов на твердой фазе, сорбции на них антител и выявлении комплексов антиген-антитело с помощью конъюгата антивидового иммуноглобулина с ферментом (8). Преимущества данного метода: можно анализировать большие партии образцов при массовом обследовании населения, возможность автоматизации, использование оборудования, доступного для большинства лабораторий.

Основными показателями качества иммуноферментной тест-системы являются чувствительность и специфичность. Чувствительность – доля больных, для которых получен положительный результат в данной тест-системе, от общего количества обследованных больных. Специфичность – доля здоровых, для которых получен отрицательный результат в данной тест-системе, от общего количества обследованных здоровых (2, 10). Понятия “чувствительность” и “специфичность” тесно связаны с понятиями “ложноотрицательный” и “ложноположительный” результат. Таким образом, более чувствительной является та система, которая дает меньше ложноотрицательных результатов, а более специфичной – та, которая дает меньше ложноположительных результатов (4, 10, 11) .

Причинами ложноположительных результатов могут быть наличие у пациентов аутоиммунных, онкологических и инфекционных заболеваний. Сыворотки беременных женщин и пожилых людей при постановке ИФА также могут давать серопозитивные результаты (1, 2, 5, 7). Ложноотрицательные результаты возможны в случаях раннего инфицирования, когда уровень антител очень низкий, или в терминальной стадии болезни, характеризующейся глубоким поражением иммунной системы (3).

Целью данной работы является сравнительная оценка чувствительности и специфичности 8 иммуноферментных тест-систем для обнаружения антител к ВИЧ, используемых при скрининге.

В работе были использованы следующие диагностикумы: “ЭКОлаб-Вироностика IV” (“ЭКОлаб”), “ЭКОлаб-ЖЕНЕЛАВИЯ-Микст” (“ЭКОлаб”), “КомбиБест-анти-ВИЧ-1+2” (ЗАО “Вектор-Бест”), “ВИЧ-1, ВИЧ-2-ИФА-Авиценна” (СПб “Авиценна”), “СКРИН-ВИЧ” (ЗАО ПКБ им. И.И.Мечникова), “ПЕПТОСКРИН-2” (ООО “АмерКарД”), “ЭКОлаб-ТЕСТ-ВИЧ-1,2” (ЭКОлаб”), “Амеркард Анти-ВИЧ-1/2К” (ООО АмерКард”). Характеристика тест-систем представлена в таблице 1. Постановку ИФА и учет результатов проводили согласно инструкциям по применению тест-систем. Все образцы были протестированы в реакции иммунного блоттинга с использованием систем “БЛОТ-ВИЧ” (ЗАО “Биосервис”) и “ВЕСТЕРН БЛОТ ВИЧ-1” (“Organon”).

Табл.1 Характеристика ИФА-тест-систем для выявления антител к ВИЧ.

№ по каталогу	Наименование и краткое описание	Количество определений
D-0134	Набор реагентов для иммуноферментного выявления и подтверждения наличия антигена р24 ВИЧ-1.	12×8
D-0138	18 флаконов
D-0141	16 образцов
D-0142	16 образцов
D-0143	8 образцов
D-0144	6 образцов
D-0149	12х8
D-0150	24×8
D-0151	24×8
D-0152	12×8
D-0170	24×8
D-0171	2×96
D-0172	12×8
D-0173	24×8
D-0190	24×8
D-0191	2×96
D-0193	24×8
D-0192	12×8
D-0160

тест-система	антиген	параметры тест-системы	субстрат
ВИЧ 1	ВИЧ 2	тип ИФА
Вироностика	рекомбинантный, вирусный лизат, пептиды	р 24gp 160	env-антиген ВИЧ-2	сэндВИЧ	ТМБ
Женелавия	пептиды, рекомбинантный	gp 41 gp 160	gp 36	непрямой	ОФД
Комби-бест	рекомбинантный	__	__	сэндВИЧ	ТМБ
АВИЦЕННА	синтетические пептиды	р 24 gp 120 gp 41	gp 36	непрямой	ТМБ
СКРИН-ВИЧ	рекомбинантный	р 24 р 17 gp 41 gp 120	gp 110 gp 38	непрямой	ОФД
ПЕПТОСКРИН-2	пептиды	gp 41 gp 120	gp 32	непрямой	ОФД
ЭКОлаб-ТЕСТ ВИЧ 1,2	рекомбинантный	р 24 р 17 gp 41 gp 120	gp 38	непрямой	ОФД
АМЕРКАРД	рекомбинантный	gp 41 р 55	gp 32	непрямой	ОФД

Материалом для исследования служили 168 образцов сыворотки крови, включающие в себя сыворотки от ВИЧ — инфицированных (n=48), сыворотки от больных вирусными гепатитами В и С (n=35), а также сыворотки от пациентов, в крови которых не обнаружены антитела к ВИЧ (n=85) . Контрольная группа составила 20 здоровых доноров.

Учет результатов ИФА проводили на оборудовании фирмы Sanofi (Франция) – на ридере PR 2100 измеряли оптическую плотность (ОП) исследуемых образцов сыворотки крови. Уровень “среза” (ОП критическое) для каждой тест-системы рассчитывался согласно инструкциям. За “серую зону” принимали значения ОП в интервале + 10% от уровня “среза”. Образцы считали положительными, если значения их ОП были выше “серой зоны”. Образцы считали сомнительными, если значения их ОП находились в пределах “серой зоны”. Образцы считали отрицательными, если значения их ОП были ниже “серой зоны”.

Показатели специфичности в нашем исследовании варьировали от теста к тесту. Так, для здоровых доноров крови этот показатель составил 100%. При исследовании сывороток, полученных от больных вирусными гепатитами В и С специфичность изменялась от 3% (“Скрин-ВИЧ”) до 97% (“КомбиБест-анти-ВИЧ-1,2”) (таблица 2). Данный факт может быть объяснен, с одной стороны, недостаточной специфичностью оцениваемых диагностикумов, а с другой – наличием перекрестных реакций неспецифических факторов в сыворотках с компонентами тест-систем.

Табл. 2 Процент специфичности тест-систем для диагностики ВИЧ-инфекции.

Диагностикум	доноры	ВИЧ-негативные в иммуноблоте	больные гепатитом В и С
“Вироностика”	100 %	75 %	88 %
“Женелавия”	100 %	84,3 %	88 %
“Комби-Бест”	100 %	90 %	97 %
“Авиценна”	89,5 %	52,5 %	60 %
“Скрин-ВИЧ”	100 %	17,5 %	3 %
“Пептоскрин-2”	93,8 %	62,5 %	74 %
“ЭКОлаб-тест ВИЧ 1,2”	89,5 %	28,3 %	26 %
“АмерКард”	87,3 %	55,8 %	74 %

При оценке ложноположительных результатов нами были получены следующие данные (табл.3)

Табл.3 Процент ложноположительных результатов в ИФА-системах.

Тест-Система	ВИЧ-негативные в иммуноблоте	больные гепатитом В и С
серая зона, %	ложнополо-жительные результаты, %	серая зона, %	ложнополо-жительные результаты, %
“Вироностика”	10	16,7	2,8	8,6
“Женелавия”	8,3	11,7	2,8	8,6
“Комби-Бест”	4,2	5,8	2,8	*
“Авиценна”	5,0	24,2	8,6	34,3
“Скрин-ВИЧ”	4,2	45,8	2,8	97,1
“Пептоскрин-2”	8,3	24,2	14,3	14,3
“ЭКОлаб-тест ВИЧ 1,2”	9,2	32,5	17,1	60,0
“АмерКард”	7,5	36,7	20,0	5,7

* таких результатов нет

Таким образом, наибольшей специфичностью обладают тест-системы “Комби-Бест”, “Женелавия” и “Вироностика”. Остальные тест-системы дают высокий процент ложноположительных результатов, которые не подтверждаются в иммуноблоте.

Процент выявления антител к ВИЧ в серопозитивных образцах практически во всех ИФА-системах составил 100%. В тест-системах “ЭКОлаб-Женелавия-Микст” и “Авиценна” чувствительность была 97,9%. Наименьшая чувствительность из исследуемых диагностикумов была в тест-системе “Пептоскрин-2” – 89,6%. Эти результаты могут свидетельствовать о недостаточной чувствительности перечисленных тест-систем и о высокой вероятности получения ложнонегативных результатов.

Результаты проведенного исследования позволяют сделать выводы о том, что для массового тестирования на ВИЧ-инфекцию наиболее подходят такие высоко специфичные и чувствительные тест-системы, как “Комби-Бест-анти-ВИЧ-1,2”, “ЭКОлаб-Вироностика IV” и “ЭКОлаб-Женелавия-Микст”. Остальные диагностикумы могут давать высокий процент как ложноположительных, так и ложноотрицательных результатов.

В заключении необходимо отметить, что при тестировании сыворотки крови на ВИЧ-инфекцию следует принимать во внимание неодинаковую чувствительность и специфичность различных тест-систем и использовать несколько диагностикумов с различным принципом постановки реакции, особенно для сывороток крови с низким уровнем антител к ВИЧ и для тестирования донорской крови.

Однопробирочный тест для выявления и количественного анализа РНК генетических разновидностей ВИЧ, включая редкие не-М группы ВИЧ-1 и ВИЧ-2, на основе ОТ-ПЦР в реальном времени Текст научной статьи по специальности « Фундаментальная медицина»

Аннотация научной статьи по фундаментальной медицине, автор научной работы — Прасолова Мария Анатольевна, Иванов Михаил Константинович, Гашникова Наталья Матвеевна, Нетёсова Екатерина Сергеевна, Дымшиц Григорий Моисеевич

На основе метода ОТ-ПЦР с флюоресцентной детекцией в режиме реального времени разработан прототип диагностического набора, позволяющий надежно выявлять в сыворотке и плазме крови различные генетические варианты РНК ВИЧ-1 групп M,N,O,P и РНК ВИЧ-2 . Набор обладает высокой устойчивостью к нуклеотидным несоответствиям , широким линейным диапазоном измерения концентраций РНК ВИЧ, 100% аналитической специфичностью и хорошей аналитической чувствительностью: 42 МЕ/мл (ВИЧ-1 группы М), 45 копий/мл ( ВИЧ-2 ), 92 копий/ мл ( ВИЧ-1 группы O ), 90 копий/мл (ВИЧ-1 группы N). С помощью разработанного диагностического набора удалось успешно выявить и определить концентрацию РНК ВИЧ для всех образцов из международной референсной панели генотипов ВИЧ-1; результаты проведенных тестов коррелируют с данными, полученными с помощью коммерческих тестов.

Похожие темы научных работ по фундаментальной медицине , автор научной работы — Прасолова Мария Анатольевна, Иванов Михаил Константинович, Гашникова Наталья Матвеевна, Нетёсова Екатерина Сергеевна, Дымшиц Григорий Моисеевич

A Single-Tube Real-Time RT-PCR Assay for the RNA Detection and Quantification of Genetically Diverse HIV Including Rare Non-M Group of the HIV-1 and HIV-2

The RT-PCR method with real-time fluorescence detection was used for development of prototype of diagnostic kit for reliable diagnosis of genetic variants of RNA of the HIV-1of groups M, N, O, P and RNA of the HIV-2 in blood plasma and serum. The kit is stable against nucleotide defects, provides broad linear range of concentration of the HIV RNA, 100% analytical specificity and adequate analytical sensitivity: 42 МЕ/ml ( HIV-1 of group M), 45 copies/ml ( HIV-2 ), 92 copies/ml (HIV -1 of group O ), 90 copies/ml ( HIV-1 of group N). The kit provided successful detection and measurement of HIV RNA concentration in the samples of the international reference panel of the HIV-1 genotype. The results of the test correlate with results of commercial tests.

Текст научной работы на тему «Однопробирочный тест для выявления и количественного анализа РНК генетических разновидностей ВИЧ, включая редкие не-М группы ВИЧ-1 и ВИЧ-2, на основе ОТ-ПЦР в реальном времени»

© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2014

Прасолова М.А.1’2’3, Иванов М.К.1’2 3, Гашникова Н.М.4, Нетёсова Е.С.2, Дымшиц Г.М.5

ОДНОПРОБИРОЧНЫЙ ТЕСТ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ И КОЛИЧЕСТВЕННОГО АНАЛИЭА РНК ГЕНЕТИЧЕСКИХ РАЭНОВИДНОСТЕЙ ВИЧ, ВКЛЮЧАЯ РЕДКИЕ НЕ-М ГРУППЫ ВИЧ-1 И ВИЧ-2, НА ОСНОВЕ ОТ-ПЦР В РЕАЛЬНОМ ВРЕМЕНИ

1Институт цитологии и генетики СО РАН, 630090, Новосибирск; 2ЗАО «Вектор-Бест», 630559, п. Кольцово, Новосибирская область; ‘Новосибирский государственный университет, 630090, Новосибирск; 4ФБУН «Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор», 630559, п. Кольцово, Новосибирская область; 5Институт химической биологии и

фундаментальной медицины СО РАН, 630090, Новосибирск.

На основе метода ОТ-ПЦР с флюоресцентной детекцией в режиме реального времени разработан прототип диагностического набора, позволяющий надежно выявлять в сыворотке и плазме крови различные генетические варианты РНК ВИЧ-1 групп М,К,0,Р и РНК ВИЧ-2. Набор обладает высокой устойчивостью к нуклеотидным несоответствиям, широким линейным диапазоном измерения концентраций РНК ВИЧ, 100% аналитической специфичностью и хорошей аналитической чувствительностью: 42 МЕ/мл (ВИЧ-1 группы М), 45 копий/мл (ВИЧ-2), 92 копий/ мл (ВИЧ-1 группы 0), 90 копий/мл (ВИЧ-1 группы К). С помощью разработанного диагностического набора удалось успешно выявить и определить концентрацию РНК ВИЧ для всех образцов из международной референсной панели генотипов ВИЧ-1; результаты проведенных тестов коррелируют с данными, полученными с помощью коммерческих тестов. Ключевые слова: ВИЧ-1 группа O; ВИЧ-2; устойчивость к нуклеотидным несоответствиям; ОТ-ПЦР.

Вирус иммунодефицита человека (ВИЧ) продолжает оставаться одной из глобальных проблем здравоохранения: в мире количество людей, инфицированных ВИЧ-1, составляет 34 млн, в России — более 730 тыс. и продолжает расти [1]. Эффективность предотвращения дальнейшего распространения ВИЧ, как и лечения уже заразившихся, значительно зависит от точной, высокочувствительной и своевременной диагностики инфекции, в том числе выявления РНК ВИЧ с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) [2]. Тестирование препаратов донорской крови на РНК ВИЧ является обязательным во многих странах, в том числе и в России.

Особую проблему для диагностики ВИЧ-инфекции создает высокая генетическая изменчивость вируса. Выделены 4 генетические группы ВИЧ-1 (М, К, О и недавно описанная группа Р) [3]. Основной вклад в мировую эпидемию СПИДа вносят штаммы ВИЧ-1 группы М, которая в свою очередь делится на 9 субтипов и множество рекомбинантных форм [4]. Группы вирусов К, О и Р считаются редкими за пределами Африки, и в России пока официально не зарегистрировано ни одного случая заражения штаммами этих групп. Тем не менее уже описано много случаев инфицирования ВИЧ-1 группы О в разных странах Европы и США [5, 6]. Очевидно, что распространение редких групп N и Р также возможно. Ни один из отечественных и далеко не все импортные коммерческие тесты способны выявлять штаммы ВИЧ-1 не-М групп (причем эта проблема касается не только ПЦР, но и серологических методов [7]), что создает риск распространения таких недоступных для диагностики, но от этого не менее патогенных геновариантов вируса.

ВИЧ-2 также состоит из нескольких генетически удаленных друг от друга субтипов и их рекомбинан-

тов [8, 9]. Наиболее распространенными являются субтипы А и В. ВИЧ-2 встречается во всех частях света, хотя общее число инфицированных ВИЧ-2 гораздо ниже, чем ВИЧ-1. В силу генетической удаленности от ВИЧ-1 многие антиретровирусные препараты, в частности ненуклеозидные ингибиторы ревертазы, не эффективны при лечении пациентов с ВИЧ-2 [10]. Большинство современных серологических тестов выявляют антитела к вирусам обоих типов, однако к ПЦР-тестам такие требования до недавнего времени не предъявлялись, большинство коммерчески доступных диагностических наборов оптимизировано только для выявления РНК ВИЧ-1. Показано, что, как и в случае ВИЧ-1, вирусная нагрузка ВИЧ-2 в плазме крови коррелирует со стадией развития заболевания и ее измерение может использоваться в прогностических целях для мониторинга состояния пациента и назначения терапии [11]. Следовательно, определение РНК ВИЧ-2 актуально не только в качественном, но и в количественном варианте. Таким образом, существует объективная потребность в создании удобных для применения в клинических лабораториях доступных по цене высокочувствительных тестов для выявления и достоверной количественной оценки РНК ВИЧ-1 и ВИЧ-2, охватывающих все генетические группы и субтипы вируса.

Целью данной работы являлась разработка на основе метода ПЦР в реальном времени высокочувствительного теста для выявления РНК всех генетических групп ВИЧ-1 и ВИЧ-2 в одной пробирке.

Материалы и методы

Биологический материал. Клинические образцы сыворотки или плазмы крови, содержащие РНК ВИЧ-1 группы М, а также образцы сыворотки крови здоровых доноров были предоставлены Новосибирским областным центром по профилактике и борьбе со СПИД и инфекционными заболеваниями, лабораторией клинической иммунологии НИИ скорой помощи им. Н.В. Склифосовского г. Москвы.

Для определения предела чувствительности и границ динамического диапазона измерений концентраций использовали положительный контрольный образец (ПКО) РНК ВИЧ-1 субтипа А, охарактеризованный относительно международного стандарта РНК ВИЧ-1, полученной из Национального института биологических стандартов и контроля (NIBSC). Приготовление ПКО РНК ВИЧ-1 описано ранее [12].

Получение клинических образцов от пациентов, инфицированных ВИЧ-2 и ВИЧ-1 групп К,0,Р, было затруднительно из-за крайне малой распространенности этих вирусов в России. Основные этапы оптимизации теста проводили на искусственно синтезированных ДНК и РНК, соответствующих по нуклеотид-ным последовательностям имеющимся в базе данных фрагментам генома изолятов ВИЧ-1 групп О (8 геновариантов), групп N (2 геноварианта), группы Р, редких субтипов группы М (26 геновариантов) и ВИЧ-2 (субтипы А и В). Сборку двухцепочечных

матриц ДНК проводили путем полимеразного удлинения частично перекрывающихся олигонуклеотидов. В ДНК-матрицы, соответствующие референсным последовательностям субтипов и групп ВИЧ-1 и ВИЧ-2, вводили дополнительно последовательность Т7-промотора для проведения транскрипции in vitro. Правильность сборки ДНК-матриц подтверждали секвенированием. Для очистки синтезированных ДНК-матриц применяли электрофорез в агарозном геле (агароза SeaKem® GTG™, «Lonza», Швейцария) с последующей пассивной элюцией. Концентрацию ДНК-матриц измеряли спектрофотометрически с использованием прибора Nanodrop2000. Разведения искусственных матриц ВИЧ-2 и ВИЧ-1 групп N и O, соответствующие концентрациям ДНК около 104 копий/мкл, аликвотировали, хранили при -40°С и использовали в качестве количественных стандартов для определения вирусной нагрузки и для исследования аналитических характеристик разработанного теста. Образцы искусственных РНК были получены путем транскрипции in vitro с помощью набора T7 transcription kit («Fermentas», Литва) в соответствии с инструкцией производителя. Продукты реакции обрабатывали ДНКазой RQ1 («Promega», США). Полученную РНК осаждали этиловым спиртом, элюировали в воде, аликвотировали и хранили при -40°С.

Также в работе использовали лизат штамма ROD ВИЧ-2, полученный после культивирования вируса на чувствительных клетках. Путем секвенирования участка LTR размером 391 ну-клеотид и последующего филогенетического анализа подтвердили принадлежность данного образца к субтипу А. На основе лизата ВИЧ-2 был изготовлен ПКО РНК ВИЧ-2. Данный образец был разведен в пуле донорских сывороток, не содержащих маркеров ВИЧ, вирусных гепатитов В и С, разделен на аликвоты и лиофильно высушен. Концентрацию РНК ВИЧ-2 ПКО определяли посредством ПЦР-анализа с помощью разработанного теста, для построения калибровочной кривой использовали описанный выше количественный стандарт ВИЧ-2.

Проведение анализа. Выделение РНК проводили с использованием набора реагентов РеалБест Экстракция 1000 или Реал-Бест Экстракция 100 (ЗАО «Вектор-Бест», Россия). Для амплификации использовали готовую лиофильно высушенную реакционную смесь РеалБест МастерМикс ОТ (ЗАО «Вектор-Бест», Россия), содержащую все компоненты для проведения ОТ и ПЦР в одной пробирке, кроме специфичных олигонуклеотидов. В смесь добавляли праймеры, соответствующие ВИЧ-1 и ВИЧ-2, в концентрации по 12,5-25 пмоль и флюоресцентно меченые зонды по 6-12,5 пмоль. В анализе использовали приборы iQ5

Нуклеотидные последовательности праймеров для амплификации участка ЬТК ВИЧ-1 групп Ш,0,Р и результаты их проверки на предмет устойчивости к мисматчам

1. UNAIDS data 2018. URL: http://www.unaids.org/sites/default/files/media_asset/unaids-data-2018_en.pdf.

2. Санитарно-эпидемиологические правила СП 3.1.5.2826–10 «Профилактика ВИЧ-инфекции» (ред. от 21.07.2016) / Постановление Главного государственного санитарного врача РФ от 21.07.2016 № 95. М., 2016. [Sanitary and epidemiological rules SP 3.1.5.2826–10 «Prevention of HIV infection» (ed. from 21.07.2016). Resolution of the Chief state sanitary doctor of the Russian Federation from 21.07.2016 № 95. Moscow, 2016 (In Russ.)].

3. ВИЧ-инфекция: Информационный бюллетень № 43. М.: ФНМЦ по профилактике и борьбе со СПИДом ФБУН «Центральный НИИ эпидемиологии» Роспотребнадзора, 2018. [HIV infection: Information Bulletin № 43. Moscow: Federal scientific and methodological center for AIDS prevention and control Central research Institute «Central research Institute of epidemiology» of Rospotrebnadzor, 2018 (In Russ)].

4. Hemelaar J. Implications of HIV diversity for the HIV-1 pandemic. J. Infect., 2013 May, Vol. 66, No. 5, pp. 391–400. URL: DOI: 10.1016/j.jinf.2012.10.026.

5. Gaudy C., Moreau A., Brunet S., Descamps J.M., Deleplanque P., Brand D., Barin F. Subtype B human immunodeficiency virus (HIV) type 1 mutant that escapes detection in a fourth generation immunoassay for HIV infection. J. Clin. Microbiol., 2004, Vol. 42, pp. 2847–2849. 6. Ly T.D., Plantier J.C., Leballais L., Gonzalo S., Lemée V., Laperche S. The variable sensitivity of HIV Ag/Ab combination assays in the detection of p24 Ag according to genotype could compromise the diagnosis of early HIV infection. J. Clin. Virol., 2012, Vol. 55, pp. 121–127. URL: DOI: 10.1016/j.jcv.2012.06.012.

6. Qiu X., Sokoll L., Yip P., Elliott D.J., Dua R., Mohr P., Wang X.Y., Spencer M., Swanson P., Dawson G.J., Hackett J. Jr. Comparative evaluation of three FDA-approved HIV Ag/Ab combination tests using a genetically diverse HIV panel and diagnostic specimens.J. Clin. Virol., 2017 Jul., Vol. 92, pp. 62–68. URL: DOI: 10.1016/j.jcv.2017.05.005.

7. Баранова Е.Н., Шарипова И.Н., Денисова Н.М., Сусекина М.Е., Пузырев В.Ф., Саркисян К.А., Воробьева М.С., Бурков А.Н., Уланова Т.И. Возможности современных тест-систем при подтверждении ранней ВИЧ-инфекции // Вопросы вирусологии. 2009. Т. 54, № 5. С. 37–40. [Baranova E.N., Sharipova I.N., Denisova N.M. Susekina M.E., Puzyrev V.F., Sarkisyan K.A., Vorobyeva M.S., Burkov A.N., Ulanova T.I. The possibilities of modern test systems for the early confirmation of HIV infection. Questions of Virology, 2009, Vol. 54, No. 5, pp. 37–40 (In Russ.)].

8. Иванова Н.И., Пекшева О.Ю. Опыт выявления маркеров ВИЧ-инфекции с использованием нового ИФА-диагностикума ДС-ИФА-ВИЧ-АТ/АГ-СПЕКТР в лабораториях центров по профилактике и борьбе со СПИДом Приволжского Федерального округа // Клиническая лабораторная диагностика. 2009. № 3. С. 46–48. [Ivanova N.I., Peksheva O.Yu. Experience identifying markers of HIV with the new ELISA antigen of DS-ELISA-HIV-at/AG-SPECTRUM in the laboratories of the centers for the prevention and control of AIDS of the Volga Federal district. Clinical Laboratory Diagnostics, 2009, No. 3, pp. 46–48 (In Russ.)].

9. Распопина И.В., Панкова Л.В., Кожевникова И.В. Опыт выявления маркёров ВИЧ-инфекции с использованием нового ИФА-диагностикума Инвитролоджик ВИЧ 1,2-АГ/АТ // Вестник Челябинской областной клинической больницы. 2013. № 1 (20). С. 84. [Raspopina I.V., Pankova L.V., Kozhevnikov I.V. Experience of identifying markers of HIV with the new ELISA antigen of Envitrologic HIV-1,2-AG/AT. Bulletin of the Chelyabinsk Regional Clinical Hospital, 2013, No. 1 (20), pp. 84 (In Russ.)].

10. Шарипова И.Н., Ходак Н.М., Пузырев В.Ф., Бурков А.Н., Уланова Т.И. Сравнительное исследование специфичности тест-систем для диагностики ВИЧ-инфекции на категории образцов сывороток крови беременных женщин // Клиническая лабораторная диагностика. 2015. Т. 60, № 3. С. 38–41. [Sharipova I.N., Khodak N.M. Puzyrev V.F., Burkov A.N., Ulanova T.I. Comparative study of the specificity of test systems for the diagnosis of HIV infection in the category of blood serum samples of pregnant women. Clinical Laboratory Diagnostics, 2015, Vol. 60, No. 3, pp. 38–41 (In Russ.)].

11. Лисицина З.Н., Дмитриевская К.А., Коробан Н.В., Кондрашова Т.В. Иммунные тесты и диагностика острой стадии ВИЧ-инфекции // ВИЧ-инфекция и иммуносупрессии. 2017. Т. 9, № 2. С. 36–41. [Lisitsina Z.N., Dmitrievskaya K.A., Koroban N.V., Kondrashova T.V. Immune tests and diagnosis of the acute stage of HIV infection. HIV Infection and Immunosuppressive Disorders, 2017, Vol. 9, No. 2, pp. 36–41 (In Russ.)].

12. HIV assays: laboratory performance and other operational characteristics: rapid diagnostic tests (combined detection of HIV-1/2 antibodies and discriminatory detection of HIV-1 and HIV-2 antibodies): report 18. Geneva: World Health Organization, 2015.

13. Chaves P., Wesolowski L., Patel P., Delaney K., Owen S.M. Evaluation of the performance of the Abbott ARCHITECT HIV Ag/Ab Combo Assay. J. Clin. Virol., 2011 Dec., Vol. 52, Suppl. 1, pp. S51–S55. URL: DOI: 10.1016/j.jcv.2011.09.010.

14. Mitchell E.O., Stewart G., Bajzik O., Ferret M., Bentsen C., Shriver M.K. Performance comparison of the 4-th generation Bio-Rad Laboratories GS HIV Combo Ag/Ab EIA on the EVOLIS™ automated system versus Abbott ARCHITECT HIV Ag/Ab Combo, Ortho Anti-HIV 1+2 EIA on Vitros ECi and Siemens HIV-1/O/2 enhanced on Advia Centaur.J. Clin. Virol., 2013 Dec., Vol. 58, Suppl. 1, pp. e79–e84. URL: DOI: 10.1016/j.jcv.2013.08.009. 16. Product Package Insert. ARCHITECT HIV Ag/Ab Combo Reagent Kit. USA: Abbott Laboratories.

15. Инструкция по применению ИФА тест-системы «Дженскрин Ультра ВИЧ Aг/Aт». Франция: Bio-Rad. [Instructions for use of ELISA test system Genscreen Ultra HIV AG/AТ. France: Bio-Rad (In Russ.)].

16. Инструкция по применению набора реагентов «ДС-ИФА-ВИЧ-АГАТ-СКРИН». Нижний Новгород: ООО «Диагностические системы». [Instructions for use of a set of reagents «DS-IFA-VICH-AGATHE-SCREEN». Nizhny Novgorod: Diagnostic systems (In Russ.)].

17. Лаповок И.А., Лопатухин А.Э., Киреев Д.Е. и др. Молекулярно-эпидемиологический анализ вариантов ВИЧ-1, циркулировавших в России в 1987–2015 гг. // Терапевтический архив. 2017. Т. 89, № 11. С. 44–49. [Lapovok I.A., Lopatukhin A.E., Kireev D.A. et al. Molecular epidemiological analysis of HIV-1 circulating in Russia in the years 1987–2015. Therapeutic Archive, 2017, Vol. 89, No. 11, pp. 44–49 (In Russ.)].